एक तुलनात्मक प्रजाति दृष्टिकोण का उपयोग करने के लिए पैतृक प्रतिक्रियाएँ के तंत्रिका जीव विज्ञान की जाँच

Neuroscience
 

Summary

तुलनात्मक प्रजातियों दृष्टिकोण व्यवहार neuroscientists के विभिन्न neurobiological विशिष्ट एक विशिष्ट पशु मॉडल की विशेषता के रूप में देखा व्यवहार के साथ जुड़े कारकों का पता लगाने के लिए अनुमति देता है. स्वाभाविक रूप से निकट से संबंधित प्रजातियों के बीच व्यवहार में अंतर घटनेवाला का लाभ उठाते हुए, इस तकनीक इनवेसिव तकनीक को व्यवहार की अभिव्यक्ति में हेरफेर करने की आवश्यकता नहीं है.

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Franssen, C. L., Bardi, M., Lambert, K. G. Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses. J. Vis. Exp. (55), e3173, doi:10.3791/3173 (2011).

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Abstract

व्यवहार तंत्रिका विज्ञान के एक लक्ष्य के लिए अंतर्निहित neurobiological कारक है कि विशिष्ट व्यवहार को विनियमित करने की पहचान है. पशु मॉडल का उपयोग करने के लिए इस लक्ष्य को पूरा करने के लिए, कई रणनीतियों methodological इनवेसिव तकनीक ब्याज के व्यवहार (उदाहरण के लिए, घाव विधियों, औषधीय जोड़तोड़, microdialysis तकनीक, अनुवांशिक इंजीनियर पशु मॉडल) की तीव्रता में हेरफेर करने के लिए आवश्यकता होती है. एक तुलनात्मक प्रजातियों दृष्टिकोण का उपयोग शोधकर्ताओं को स्वाभाविक रूप से प्रतिक्रिया निकट से संबंधित प्रजातियों में मौजूदा रणनीति में मतभेद उत्पन्न करने का लाभ लेने के लिए अनुमति देता है. हमारी प्रयोगशाला में हम Peromyscus जीनस की दो प्रजातियों कि पैतृक प्रतिक्रिया में अलग का उपयोग करें. पुरुष कैलिफोर्निया हिरण माउस (Peromyscus californicus) अपने चचेरे भाई जबकि महिला के रूप में एक ही माता पिता प्रतिक्रियाओं दर्शाती है, आम हिरण माउस (Peromyscus maniculatus) वस्तुतः पिल्ले की उपस्थिति में कोई पोषण / माता - पिता की प्रतिक्रियाएं दर्शाती है. इस लेख में विशेष रुचि का neurobiological affiliative सामाजिक पैतृक कैलिफोर्निया हिरण माउस द्वारा प्रदर्शित प्रतिक्रियाओं के साथ जुड़े कारकों की एक अन्वेषण है. व्यवहार विश्लेषण के लिए डेटा संग्रह; की तैयारी और दिमाग का सेक्शनिंग, बुनियादी कदम के लिए immunocytochemistry में शामिल शोध के इस प्रकार के लिए उपयुक्त प्रजातियों की पहचान: क्योंकि व्यवहार तंत्रिका विज्ञान दृष्टिकोण बहुमुखी, अध्ययन के निम्नलिखित प्रमुख घटक संक्षेप किया जा संबोधित करेंगे वैसोप्रेसिन immunoreactivity की मात्रा का ठहराव, सॉफ्टवेयर न्यूरोइमेजिंग के लिए मस्तिष्क के ऊतकों यों का उपयोग, एक microsequencing वीडियो विश्लेषण के उपयोग के व्यवहार स्कोर और अंत में, उपयुक्त सांख्यिकीय विश्लेषण प्रदान करने के लिए शोध निष्कर्षों के सबसे सूचित व्याख्याओं.

Protocol

1. पशु मॉडल की पहचान

  1. कैलिफोर्निया हिरण माउस (Peromyscus californicus) पैतृक प्रतिक्रियाओं का पता लगाने के लिए एक आदर्श मॉडल है. जैसा कि आप देख, यह माउस पिल्ले बस के रूप में माताओं करते दूल्हे - वे भी उन पर इतना है कि यह लगता है जैसे पिल्ले नर्सिंग हैं झुकना. कैलिफोर्निया चूहों के व्यवहार एक ही जीनस, आम हिरण (Peromyscus maniculatus) माउस जो पिल्ले में कम रुचि दर्शाती है, अक्सर भागने की या यहाँ तक कि उन पर हमला करने की कोशिश कर की एक प्रजाति की तुलना में है. इन पिल्ले के साथ बातचीत प्रजातियों के चित्रों के लिए (चित्रा 1 देखें.)
  2. एक बार प्रजातियों मॉडल की पहचान की गई है तो विभिन्न समूहों के लिए स्थापित करने की आवश्यकता है. इस अध्ययन में, जैविक पिता, कोई parenting अनुभव के साथ कुंवारी, और दोनों प्रजातियों के सीमित पिल्ला जोखिम (पिल्ला उजागर या पालक पिता) के साथ कुंवारी इतनी उपयोग किया जाता है कि दोनों संवेदनशील और अधिग्रहीत पैतृक विशेषताओं का मूल्यांकन किया जा सकता है है. यह विशेष रूप से अध्ययन में हम भी विश्वास दिलाता हूं कि सामाजिक बातचीत एक पिल्ला और पिंजरे में रखा कुछ भी नहीं करने के लिए एक प्रतिनिधि प्रतिक्रिया के लिए विशिष्ट थे पिल्ला एक खिलौना माउस सभी समूहों को उजागर (चित्रा 2 देखें.)
  3. Neurobiological कारकों की जांच करने से पहले, यह महत्वपूर्ण है इसकी पुष्टि के लिए चयनित प्रजातियों हित के व्यवहार में स्पष्ट अंतर एक्ज़िबिट. इस अध्ययन में, पुरुषों के पांच मिनट और एक पैतृक व्यवहार ethogram (ethogram के उदाहरण के लिए तालिका 1 देखें) के लिए एक पिल्ला के साथ एक पिंजरे में रखा जाता है विलंबता जैसे स्कोर व्यवहार के लिए इस्तेमाल पिल्ला राशि और समय के साथ संपर्क में खर्च दृष्टिकोण पिल्ला. यदि आक्रामक प्रतिक्रिया मनाया जाता है, पिल्ला तुरंत हटा दिया है. इन सत्रों अक्सर तो एक सावधान व्यवहार विश्लेषण आयोजित किया जा सकता है बाद में वीडियो टेप कर रहे हैं.

2. मस्तिष्क के ऊतकों तैयार

  1. (प्रोटोकॉल जुड़ी) एक माउस के एक मानक छिड़काव के बाद दिमाग इतना है कि वे हित के विशिष्ट क्षेत्र (शो मस्तिष्क) में sectioned किया जा सकता है हटा रहे हैं.
  2. वैसोप्रेसिन (AVP) - एक मानक माउस मस्तिष्क एटलस (शो एटलस) hypothalamus में paraventricular नाभिक, एक के लिए इस अध्ययन में रुचि के neuropeptide उत्पादन कोशिकाओं में अमीर हो जाता क्षेत्र का पता लगाने के लिए प्रयोग किया जाता है.
  3. मस्तिष्क तो अवरुद्ध है और इतना है कि एक ठंड चक पर घुड़सवार ऊतक सूक्ष्म तक्षणी साथ sectioned होने से पहले फ्रीज होगा. मस्तिष्क एक ट्रिम मोड में sectioned है जब तक विशिष्ट स्थलों की पहचान कर रहे हैं, तो विशिष्ट मस्तिष्क मोटाई, इस मामले में 30 microns, मस्तिष्क विश्लेषण के लिए इस्तेमाल वर्गों के लिए सेट कर दिया जाता है.
  4. मस्तिष्क वर्गों को ध्यान में अच्छी तरह से फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के साथ भरा प्लेटों में रखा जाता है; (संलग्न पीबीएस के लिए प्रोटोकॉल, कृपया ध्यान दें कि यह केवल एक मानक immunocytochemistry प्रोटोकॉल का एक उदाहरण है).

3. Immunocytochemistry

  1. (संलग्न प्रोटोकॉल देखें) इस प्रक्रिया के विभिन्न चरणों के दौरान, यह महत्वपूर्ण है सही कौशल करने के लिए इस तकनीक (शो छात्र pipetting) के लिए रसायनों और अन्य महत्वपूर्ण तत्व के सटीक मापन आश्वासन pipetting.
  2. इस प्रक्रिया में पहला कदम दिमाग है जो अच्छी तरह से तीन से पांच बार प्लेटों में पीबीएस जगह शामिल धोने है, प्रत्येक धोने के बीच अच्छी तरह प्लेटें 10 मिनट के लिए एक घुमाव पर रखा जाता है (दिखाने के छात्र पीबीएस जगह और rockers पर अच्छी तरह प्लेटें रखने) .
  3. मस्तिष्क स्लाइसें तो प्राथमिक एंटीबॉडी समाधान के लिए उजागर कर रहे हैं और 4 डिग्री सेल्सियस घुमाव (शो प्रक्रिया) पर रात में संग्रहीत.
  4. दूसरे धोने के बाद, मस्तिष्क स्लाइसें एक घंटे के लिए एक उच्च माध्यमिक एंटीबॉडी के लिए उजागर कर रहे हैं कमरे के तापमान पर झूली कुरसी पर, तो फिर से धोया.
  5. अगला दिमाग एक Avitin बायोटिन परिसर neurochemical पॉजिटिव कोशिकाओं के दृश्य के लिए तैयार समाधान को उजागर कर रहे हैं.
  6. अंतिम दृश्य कदम के लिए, दिमाग थपका उजागर कर रहे हैं. यह एक खतरनाक उत्पाद है और हमेशा सावधानी के साथ संभाला जाना चाहिए. जैसा कि यहाँ देखा है, मस्तिष्क स्लाइसें आपकी आंखों के सामने काले (प्रक्रिया शो) शुरू करते हैं.
  7. थपका जोखिम के बाद, दिमाग washes के अंतिम श्रृंखला के माध्यम से जाओ और तो ध्यान subbed खुर्दबीन स्लाइड पर रखा और रातोंरात सूखी (एक स्लाइड पर एक मस्तिष्क टुकड़ा के स्थान दिखा, subbed स्लाइड्स प्रोटोकॉल के लिए अनुलग्नक देखें) की अनुमति दी.
  8. स्लाइड्स तो आसुत जल और शराब washes की एक श्रृंखला के माध्यम से मंजूरी दे दी है, अंत में Citrosolv में coverslipped जा रहा है और सुरक्षित रखने के (इस प्रक्रिया के विभिन्न पहलुओं को दिखाने, समाशोधन प्रक्रिया के लिए अनुलग्नक देख) के लिए एक slidebox में संग्रहीत पहले डूबे हुए किया जा रहा है.

4. Neuroquantification

  1. बाद स्लाइड्स सूख चुके हैं, वे विशेष neuroquantification सॉफ्टवेयर के साथ मूल्यांकन किया जा सकता है. यहाँ Bioquant सॉफ्टवेयर के लिए माउस दिमाग के paraventricular नाभिक में वैसोप्रेसिन पॉजिटिव कोशिकाओं और फाइबर यों (स्क्रीन पर सॉफ्टवेयर ... और माइक्रोस्कोप दिखा) के लिए प्रयोग किया जाता है.
  2. हित के विशिष्ट क्षेत्र माप विकल्पों का उपयोग कर की पहचान की हैसॉफ्टवेयर के neuroquantification लिए दृश्य क्षेत्र स्थापित करने के लिए. यह महत्वपूर्ण है कि प्रत्येक जानवर के लिए एक सुसंगत दृश्य क्षेत्र का आकार मात्रा (शो छात्र यह कर).
  3. यहाँ अव्यक्त रूप से सना हुआ वैसोप्रेसिन immunoreactive सेल शरीर और फाइबर स्पष्ट कर रहे हैं. क्योंकि यह मुश्किल है गिनती करने के लिए या इस ऊतक का पता लगाने के लिए है, इस सॉफ्टवेयर की एक विशेष सुविधा प्रकाश thresholding का उपयोग करता है के लिए ब्याज की निर्दिष्ट क्षेत्र के भीतर सकारात्मक दाग ऊतक की कुल राशि का निर्धारण. इस thresholding हमें बताता है कितना निर्दिष्ट क्षेत्र के वैसोप्रेसिन पॉजिटिव ऊतक (कंप्यूटर स्क्रीन पर दिखाने के डेटा मान) निहित है.

5. व्यवहार विश्लेषण

  1. यदि एक से अधिक पर्यवेक्षक वीडियोटेप स्कोरिंग हो जाएगा, यह महत्वपूर्ण है अंतर करदाता विश्वसनीयता स्थापित करने के लिए विश्वास दिलाता हूं कि पर्यवेक्षकों का एक सुसंगत तरीके से व्यवहार स्कोरिंग कर रहे हैं. वास्तविक स्कोरिंग सत्र के लिए, एक व्यवहार स्कोरिंग शीट अवलोकन सत्र के दौरान व्यवहार की आसान स्कोरिंग के लिए अनुमति देते हैं (फैल शीट स्कोरिंग के उदाहरण के लिए तालिका 2 देखें) के लिए तैयार रहना चाहिए.
  2. व्यवहार है कि तेजी से प्रासंगिक प्रतिक्रिया नहीं कर रहे हैं के लिए, एक microsequencing विश्लेषण विशिष्ट प्रतिक्रियाओं की प्रगति के बारे में subtleties प्रकट कर सकते हैं. उदाहरण के लिए, सौंदर्य व्यवहार बहुत तेजी से प्रतिक्रिया की एक श्रृंखला के होते हैं. हालांकि एक विकल्प के लिए बस और सौंदर्य की उपस्थिति की अवधि रिकॉर्ड है, दूसरे के लिए इस प्रतिक्रिया के साथ घटनाओं की श्रृंखला दस्तावेज है. इस microsequencing सॉफ्टवेयर का प्रयोग, पर्यवेक्षकों का एक विशेष व्यवहार हर दूसरे के रूप में सॉफ्टवेयर (शो सॉफ्टवेयर और वीडियो) के द्वारा प्रेरित की उपस्थिति स्कोर.
  3. डेटा संग्रह के बाद, ब्याज के मापदंडों को निर्धारित कर रहे हैं और उचित व्यवहार स्कोर का विश्लेषण कर रहे हैं. उदाहरण पिल्ला है, या सौंदर्य अनुक्रम में अवरोधों (प्रत्येक जानवर के लिए दर्ज किया गया डेटा के साथ फैल शीट साथ कंप्यूटर शो) की संख्या के साथ संपर्क में बिताए समय की कुल अवधि हो सकता है.
  4. एक बार व्यवहार स्कोर किया जाता है यह पुष्टि करने के लिए महत्वपूर्ण है कि दो प्रजातियों के अध्ययन में रुचि के व्यवहार के लिए अलग प्रतिक्रिया रणनीतियों का प्रदर्शन किया. इस मामले में कैलिफोर्निया हिरण चूहों आम हिरण चूहों की तुलना में अधिक पैतृक व्यवहार एक्ज़िबिट चाहिए. इसके अतिरिक्त, विभिन्न उपायों व्यवहार मस्तिष्क के उपायों के साथ सहसंबद्ध किया जा सकता है है प्रासंगिक प्रभावों के एक अधिक सूचित दृश्य प्राप्त.

6. प्रतिनिधि परिणाम:

  1. मॉडल को मान्य करने के लिए, डेटा स्पष्ट रूप से संकेत मिलता है कि दो प्रजातियों ब्याज के व्यवहार के संबंध के साथ अलग किया जाना चाहिए. यहाँ आप देखते हैं कि पी. californicus पुरुषों और अधिक समय खर्च सौंदर्य और पिल्ले, पैतृक प्रतिक्रियाओं के दो पहचान (चित्रा 4 देखें) से अधिक तले बिताया है .
  2. के रूप में देखा जा सकता है, पैतृक पी. आदेश में अगर ब्याज की neurobiologial चर पैतृक प्रतिक्रिया में महत्वपूर्ण है, वैसोप्रेसिन की राशि (AVP) सकारात्मक ऊतक कई प्रासंगिक मस्तिष्क क्षेत्रों के लिए मात्रा निर्धारित किया गया था निर्धारित करने के लिए californicus जानवरों इन मस्तिष्क क्षेत्रों के कई में प्रतिरक्षा पॉजिटिव अधिक ऊतक था. (चित्रा 5 देखें).
  3. एक संबंधित microsequencing विश्लेषण का उपयोग अध्ययन में यह धारणा थी कि पैतृक कैलिफोर्निया चूहों कम उनके समकक्षों की तुलना में कुंवारी चिंता एक्ज़िबिट जाएगा, तदनुसार, जब एक शिकारी की गंध से अवगत कराया, पिता कुंवारी जानवरों से संवारने अनुक्रम में कम रुकावट प्रदर्शन (देखें चित्र ) 6.

चित्रा 1
चित्रा 1: (ए) पुरुष कैलिफोर्निया सजातीय विदेशी पिल्ला ओर पैतृक प्रतिक्रियाओं का प्रदर्शन चूहों. (बी) पुरुष हिरण माउस एक सतर्क दृष्टिकोण (भाग लेने के खिंचाव) और एक सजातीय पिल्ला विदेशी की उपस्थिति में परिहार प्रतिक्रिया का प्रदर्शन. नोट: इन सामाजिक बातचीत के आकलन में, अगर एक पुरुष पिल्ला ओर आक्रामक प्रतिक्रिया दर्शाती है, experimenters तुरंत पिंजरे के ऊपर हिट करने के लिए पुरुष विचलित. इस समय सत्र समाप्त है और पिल्ला निकाल दिया जाता है, किसी भी घावों के लिए निरीक्षण और माँ को लौटे. हमारी प्रयोगशाला में, यह शायद ही कभी पी. के साथ मनाया जाता है californicus पुरुषों लेकिन कभी कभी पी. के साथ मनाया जाता है maniculatus; करीब अवलोकन और तत्काल हस्तक्षेप, हालांकि, पशुओं को घटनेवाला से नुकसान को रोकने के.

चित्रा 2
चित्र: 2 एक कैलिफोर्निया खिलौना माउस के साथ बातचीत माउस, सबसे इन उत्तेजनाओं पर जुगल करने की कोशिश की.

चित्रा 3
चित्रा 3: अध्ययन के प्रयोगात्मक डिजाइन, प्रत्येक प्रजातियों के लिए प्रत्येक समूह में लगभग 6 जानवरों थे.

चित्रा 4
चित्रा 4: immunocytochemistry प्रक्रिया के ग्राफिक.

चित्रा 5
अंजीर5 ure कैलिफोर्निया और हिरण चूहों में पैतृक प्रतिक्रियाओं, अधिक पैतृक प्रतिक्रियाओं (दूल्हे, झुकना, तेजी से दृष्टिकोण) कैलिफोर्निया चूहों में मनाया गया. अधिक खिंचाव आती है (तनाव प्रतिक्रिया) हिरण चूहों में मनाया गया.

चित्रा 6
चित्रा 6 दोनों प्रजातियों के विभिन्न मस्तिष्क क्षेत्रों में वैसोप्रेसिन immunoreactivity. कैलिफोर्निया चूहों PVN कोशिकाओं और फाइबर में अधिक धुंधला हो जाना था.

7 चित्रा
चित्रा 7: पैतृक कैलिफोर्निया चूहों अपने सौंदर्य दृश्यों में पिल्ला उजागर और कुंवारी समूहों की तुलना में एक शिकारी गंध की उपस्थिति में कम अवरोधों का प्रदर्शन.

Discussion

यह लेख तीन आवश्यक व्यवहार तंत्रिका विज्ञान की जांच के सफल निष्पादन के लिए महत्वपूर्ण होने के बारे में सोचा घटकों पर चर्चा, (2) एक सटीक और संवेदनशील immunocytochemistry प्रोटोकॉल, (1) एक प्रतिनिधि और वैध पशु मॉडल और (3) ज्यादातर विश्लेषण (अवलोकन और सांख्यिकीय ) दोनों व्यवहार और मस्तिष्क डेटा की. एक एकल वर्ग में गलतियाँ सबसे निश्चित रूप से पूरे अध्ययन के परिणामों समझौता नहीं करेंगे. इसलिए, ध्यान से उचित पशु मॉडल का चयन करने के बाद, काफी प्रयास पायलट व्यवहार और histological प्रक्रियाओं को विश्वास दिलाता हूं कि व्यवहार मज़बूती से अध्ययन में मनाया जाएगा, दिमाग के सफल प्रसंस्करण द्वारा बाद परीक्षण की ओर निर्देशित किया जाना चाहिए.

जैसा कि पहले उल्लेख किया है, तुलनात्मक प्रजातियों का उपयोग करने के लिए एक विशेष प्रतिक्रिया के neurobiological तंत्र की पहचान एक मूल्यवान methodological दृष्टिकोण है क्योंकि इस तकनीक जेनेटिक इंजीनियरिंग या दर्दनाक शल्य चिकित्सा जोड़तोड़ की आवश्यकता नहीं है. इस प्रकार, इस methodological दृष्टिकोण में कम की धमकी दी है, बरकरार जानवरों का इस्तेमाल. जानवरों के प्राकृतिक रूपों का उपयोग, तथापि, प्राकृतिक वातावरण की तरह के निगमन द्वारा सुदृढ़ भले ही पशुओं प्रयोगशाला में रखे जाते हैं. इसके अलावा, अगर प्रयोगशाला अध्ययनों को आगे ब्याज के व्यवहार में प्रजातियों मतभेद की प्रामाणिकता को मान्य करने के लिए क्षेत्र बढ़ाया जा सकता है है, यह अगले कदम की सिफारिश की है. हालांकि तुलनात्मक दृष्टिकोण कई लाभ प्रदान करता है, डेटा की एक सीमा correlative प्रकृति है, नतीजतन, औषधीय जोड़तोड़ के रूप में अतिरिक्त तकनीक को आगे हित के व्यवहार में लक्षित neurobiological प्रणालियों की भूमिका को मान्य करने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए.

एक बार experimenters, व्यवहार, histological और सांख्यिकीय प्रक्रियाओं के बारे में आश्वस्त लग रहा है, इतनी देखभाल लिया जाना चाहिए कि पशुओं के रहने की स्थिति में सभी समूहों के लिए छोड़कर, ज़ाहिर है, प्रयोगात्मक हेरफेर के लिए स्थिर रहेगा. प्रकाश कार्यक्रम, शोर स्तर, रखवाले, नमी का स्तर और प्रयोगशाला में odors जैसे चर में परिवर्तन 'जानवरों neurobiological प्रतिक्रियाओं पर महत्वपूर्ण प्रभाव हो सकता है.

इस अनुच्छेद में प्राथमिक एंटीबॉडी वैसोप्रेसिन लेकिन अन्य प्राथमिक एंटीबॉडी ब्याज के विभिन्न neurochemicals के एक बहुतायत के लिए इस्तेमाल किया जा सकता का पता लगाने के के लिए इस्तेमाल किया गया था. यदि experimenter एक नया एंटीबॉडी के साथ काम कर रहा है, यह महत्वपूर्ण है टाइट्रेट करना अध्ययन का संचालन करने के लिए नई एंटीबॉडी के इष्टतम कमजोर पड़ने का निर्धारण. कई बार बहुत अधिक एंटीबॉडी (के रूप में विक्रेता द्वारा सुझाए) प्रयोग किया जाता है, ऊतक कि भी संकेत अंतर अंधेरे है जिसके परिणामस्वरूप में, आगे, एंटीबॉडी के अत्यधिक उपयोग से बहुत ही महंगा है.

अंत में, अगर एक एक सांख्यिकीय विश्लेषण से अधिक वैकल्पिक विचारों और डेटा की व्याख्या प्रदान किया जा सकता है, वे का उपयोग किया जाना चाहिए. इस विशेष अध्ययन में, यह सामान्य रैखिक मॉडल, correlational, और बहुआयामी स्केलिंग विश्लेषण डेटा के सबसे जानकारीपूर्ण दृश्य प्रदान किया गया.

Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgments

इस शोध कोई अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था. राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (KGL के लिए) 0,723,341 है. हम भी हैं Schapiro अंडर ग्रेजुएट रिसर्च फैलोशिप प्रोग्राम और Randolph - Macon कॉलेज में मनोविज्ञान विभाग द्वारा उपलब्ध कराए गए योगदान के लिए आभारी हैं. आखिरकार, हम इस और इस वीडियो के लेख के लिए आर एम सी प्रयोगशाला की तैयारी में अमांडा Rzucidlo मदद शोध में क्रेग Kinsley सहयोगात्मक योगदान की सराहना करते है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Binocular Compound Microscope Motic BA400
BIOQUANT Life Science Software BioQuant Image Analysis Corporation Version 8.40.20
Cryostat Microm International HM525
Masterflex Console Drive Easy-Load L/S (Perfusion Pump) Cole-Parmer 7518-00
24 Well Cell Culture Cluster (tissue culture treated; non-pyrogenic polystyrene; sterile) Corning 3526
25x75x1mm Microscope Slides Globe Scientific, Inc. 1324W
22x50mm No.1 Cover Slip Globe Scientific, Inc. 1414-10
Non-sterile 3mL Graduated Large Bulb Transfer Pipettes Electron Microscopy Sciences 70962-9 &nbps;
Alconox Detergent Powder Alconox, Inc. 1104
Sodium Chloride Sigma-Aldrich S9888-1kg CAS 7647-14-5
Monobasic Sodium Phosphate Spectrum SO130 CAS 10049-21-5
Sodium Phosphate Dibasic Dihydrate Sigma-Aldrich 30412 CAS 10028-24-7
Triton X Spectrum TR135 CAS 9002-93-1
Permount Fisher Scientific SP15-500 CAS 108-88-3
Chromium potassium Sulfate Sigma-Aldrich C-5926 CAS 7788-99-0
CitriSolv Fisher Scientific 22-143975
Ethanol, High Den.Poly Bottles, 200 proof, 24 x 1 pint Pharmco-AAPER 111000200CSPP
Normal Goat Serum Vector Laboratories S-1000
Rabbit anti vasopressin Analyte specific reagent Immunostar, Inc. 20069
Biotinylated anti-rabbit IgG (H+L) affinity-purified Vector Laboratories BA-1000
Elite Standard Vectastain ABC Kit Vector Laboratories PK-6100
DAB Peroxidase Substrate Kit Vector Laboratories SK-4100
Original Unflavored Gelatin (4-count envelopes) 1-oz box Knox Purchase at local grocery store
3% Hydrogen Peroxide CareOne Purchase at local pharmacy
Bleach Clorox Purchase at local grocery store

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References

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