माउस फेफड़ों के कैंसर रिसर्च में उपयोगी टपकाना और निर्धारण के तरीकों

Medicine

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Summary

इस पत्र के लक्ष्य बहुत फेफड़ों के कैंसर या अन्य विकृतियों के साथ सेटअप और माउस फेफड़ों के विश्लेषण में सहायता करेगा कि सरल विधियों का वर्णन करने के लिए है। हम तो बस और मज़बूती से फेफड़ों instillations, निर्धारण, और फेफड़ों की मात्रा माप बाहर ले जाने के लिए 3 प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।

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Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. J. Vis. Exp. (102), e52964, doi:10.3791/52964 (2015).

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Abstract

घायल करने या चूहों को मारने के बिना सीधे फेफड़ों में रहते एजेंटों, सेल, या रसायन पैदा करने की क्षमता फेफड़ों के कैंसर अनुसंधान के क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण उपकरण है। फेफड़े के कार्य के मापन के लिए चूहों intubate के लिए कैसे दिखा प्रकाशित किया गया है कि तरीकों में से एक नंबर रहे हैं हालांकि, कोई भी चूहों की बड़ी साथियों में तेजी से सांस की नली टपकाना के लिए संभावित समस्याओं के बिना कर रहे हैं। वर्तमान में कागज, एक सरल और त्वरित तरीका एक कुशल तरीके से इस तरह के instillations बाहर ले जाने के लिए एक अन्वेषक सक्षम बनाता है कि वर्णित है। विधि किसी भी विशेष उपकरण या प्रकाश की आवश्यकता नहीं है और बहुत कम अभ्यास के साथ सीखा जा सकता है। यह एक माउस anesthetizing श्वासनली कल्पना करने के लिए गर्दन में एक छोटा सा चीरा, और फिर सीधे एक अंतःशिरा कैथेटर डालने शामिल है। छोटा सा चीरा जल्दी ऊतक चिपकने के साथ बंद कर दिया है, और चूहों को ठीक करने के लिए अनुमति दी जाती है। एक कुशल छात्र या तकनीशियन 2 मिनट / माउस की औसत दर से instillations कर सकते हैं। एक बार टीकैंसर की स्थापना की है वह फेफड़ों के मात्रात्मक histologic विश्लेषण के लिए एक की जरूरत है वहाँ अक्सर है। परंपरागत रूप से निर्धारण के दौरान फेफड़ों मुद्रास्फीति के मानकीकरण के लिए परेशान नहीं करते आमतौर पर पैथोलॉजिस्ट, और विश्लेषण अक्सर काफी व्यक्तिपरक हो सकता है कि एक स्कोरिंग प्रणाली पर आधारित हैं। इस समय एक फेफड़ों के ट्यूमर के आकार के सकल अनुमान के लिए पर्याप्त रूप से पर्याप्त हो सकता है, फेफड़ों की संरचना या कोशिकाओं के किसी भी उचित stereological मात्रा का ठहराव एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य निर्धारण प्रक्रिया और बाद में फेफड़ों की मात्रा माप की आवश्यकता है। यहाँ हम दोनों के दबाव में फेफड़ों फिक्सिंग और फिर सही ढंग से तय फेफड़ों की मात्रा को मापने के लिए सरल, विश्वसनीय प्रक्रियाओं का वर्णन। केवल आवश्यकता है 1 मिलीग्राम-300 ग्राम की एक सीमा से अधिक सटीक है कि एक प्रयोगशाला संतुलन है। इस प्रकार यहाँ प्रस्तुत प्रक्रियाओं बहुत चूहों में फेफड़ों के कैंसर, बनाने का इलाज है, और विश्लेषण करने की क्षमता में सुधार सकता है।

Introduction

कारणों की एक संख्या के लिए, फेफड़ों के कैंसर के लिए व्यापक रूप से माउस में अध्ययन नहीं किया गया। इसका एक कारण यह फेफड़ों के लिए उपयोग विवो में बहुत मुश्किल है, और तय फेफड़ों के मात्रात्मक विश्लेषण आमतौर पर ऐसा नहीं किया जाता है। इस पत्र में वर्णित विधि इस स्थिति में सुधार करने के लिए तैयार कर रहे हैं। लक्ष्यों के साथ साथ बहुत फेफड़ों के कैंसर या अन्य विकृतियों के साथ सेटअप और माउस फेफड़ों के विश्लेषण में सहायता करेगा कि सरल विधियों का वर्णन करने के लिए कर रहे हैं। इन तरीकों में से कोई भी पूरी तरह से नए हैं, वे यहाँ वर्णित के रूप में सरल ढंग से खड़े अकेले तरीकों के रूप में एक साथ प्रस्तुत नहीं किया गया है।

मुख्य रूप से अनुदैर्ध्य अध्ययन में व्यक्तिगत चूहों में दोहराने फेफड़े के कार्य या ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना करने का उद्देश्य के लिए माउस फेफड़ों की इंटुबैषेण के लिए तरीके का वर्णन किया है कि पांडुलिपियों के एक नंबर दिया गया है। कि मूल कागज के बाद से, समझौता ज्ञापनों के लिए अलग अलग दृष्टिकोण का वर्णन किया है कि कई अन्य कागजात नहीं किया गया हैई इंटुबैषेण 1 -9। इन सभी तरीकों का सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया जा सकता है, वे आम तौर पर काफी प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है, और एक nontrivial विफलता दर के बिना अक्सर नहीं हैं। इसके अलावा, फेफड़े के कार्य माप बाहर ले जाने के क्रम में, प्रवेशनी कोई हवा रिसाव नहीं है कि इतना कसकर पर्याप्त श्वासनली फिट करने की जरूरत है। हालांकि, इंटुबैषेण के लिए एक और व्यावहारिक उपयोग फेफड़ों को सीधे विशेष एजेंट (कैंसर कोशिकाओं या अन्य अपमान) या चिकित्सीय दवाओं देने के लिए है। इस तरह की एक प्रक्रिया एक टाइट फिटिंग प्रवेशनी और न ही किसी भी परिष्कृत फेफड़े के कार्य उपकरण की आवश्यकता नहीं है। यहाँ दिखाया गया है कि इस विधि के उपन्यास सुविधा घेघा में प्रवेश प्रवेशनी की किसी भी संभावना के बिना इंटुबैषेण की अनुमति देता है कि एक छोटी सी शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया शामिल है। यह सरल दृष्टिकोण अपेक्षाकृत छोटे से प्रशिक्षण या अनुभव के साथ सफल इंटुबैषेण सक्षम बनाता है। के रूप में कई के रूप में 30 चूहों / घंटा शून्य के करीब पहुंच एक असफलता की दर के साथ इस दृष्टिकोण का उपयोग कर इलाज किया जा सकता है।

एक बार टीवह चूहों घायल या कैंसर फेफड़ों तो histologic और वैकृत विश्लेषण के लिए हटाया जा सकता है, बलिदान करने के लिए तैयार हैं। हालांकि, ठीक से अन्य फेफड़ों के साथ तुलना के लिए किसी भी histologic चर यों करने के लिए, यह निर्धारण प्रक्रियाओं के मानकीकरण और ठीक से तय फेफड़ों की मात्रा 10 यों के लिए आवश्यक है। इस पत्र में विस्तार से मानकीकृत निर्धारण प्रक्रियाओं के साथ ही तय हो गई फेफड़ों की मात्रा को मापने के लिए एक रास्ता है कि अनुमति सरल प्रक्रियाओं का वर्णन है। इतनी मात्रा दृढ़ संकल्प के बिना, केवल रिश्तेदार घनत्व 10 से मापा जा सकता है, क्योंकि मात्रा ऊतक विज्ञान की मात्रा का ठहराव में एक आवश्यक मीट्रिक है। फेफड़ों की मात्रा में जाना जाता है, एक बार हालांकि, कोशिकाओं और फेफड़ों में अन्य संरचनात्मक माप का पूर्ण माप तो मात्रा निर्धारित किया जा सकता है।

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Protocol

निम्नलिखित प्रोटोकॉल 20-35 ग्राम चूहों में अच्छी तरह से काम करता है कि एक प्रणाली का वर्णन है। विधि आसानी से बस कैथेटर आकार बदलकर बड़े या छोटे चूहों के लिए अनुकूल हो सकता है। सभी पशु प्रोटोकॉल जॉन्स हॉपकिंस विश्वविद्यालय के पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया।

1. फेफड़े टपकाना

  1. इंटुबैषेण के लिए उपयोग करने के लिए एक वाणिज्यिक एक इंच लंबे 20 ग्राम नसों में प्रवेशनी का चयन करें।
  2. मैन्युअल चित्रा 1 में सचित्र के रूप में यह नोक पर एक सा घुमाव उत्पन्न करने के लिए झुकने कैथेटर टिप को संशोधित करें।
  3. आईपी ​​ketamine (100 मिलीग्राम / किग्रा) और xylazine (15 मिलीग्राम / किग्रा) का एक मिश्रण के साथ माउस इंजेक्शन anesthetize, और पलटा गति की अनुपस्थिति से संज्ञाहरण की पुष्टि करें। तुरंत संज्ञाहरण के बाद आंखों पर पशु चिकित्सा मरहम लागू करें। संज्ञाहरण आँखों पर पशु चिकित्सा मरहम लागू करते हैं और पोस्ट सर्जिकल और टपकाना analgesia के लिए carprofen (5-10 मिलीग्राम / किग्रा वर्ग) देने के तुरंत बाद।
  4. समझौता ज्ञापन की जगहएक sloped मंच पर एसई लापरवाह। चित्रा 2 में दिखाया गया है, सीवन छोरों के साथ एक बड़े कार्यालय बांधने की मशीन पूरी तरह से अच्छी तरह से काम करता है पर टेप।
  5. गर्दन और स्वच्छ के उदर भाग दाढ़ी और 70% शराब के साथ गर्दन क्षेत्र कीटाणुरहित। नई latex- और पाउडर मुक्त दस्ताने के साथ, 70% शराब के साथ कीटाणुरहित शल्य चिकित्सा उपकरणों का उपयोग करें।
  6. का उपयोग करते हुए तेज कैंची लगभग 12 मिमी कम छेनी नीचे गर्दन में एक छोटी सी शल्य चीरा बनाते हैं।
  7. एक संदंश धीरे गर्दन में त्वचा पुल के साथ श्वासनली के उदर दीवार देखा जा सकता है दुमदारी तक।
  8. धीरे जीभ वापस लेना और माउस के उदर सतह की ओर झुका हुआ तुला टिप के साथ प्रवेशनी डालें। 1.4 के रूप में, गर्दन में त्वचा पर धीरे खींच, और श्वासनली में प्रवेशनी डालें।
    नोट: थोड़ा अभ्यास के साथ, कैथेटर श्वासनली नीचे चलती दिखाई जाएगी। यह घेघा में चला जाता है, तो कैथेटर के आंदोलन का कोई दृश्य देखा हो जाएगा। कोई चीरोंश्वासनली में बना रहे हैं।
  9. कैथेटर गर्दन में श्वासनली में देखा है, एक बार मज़बूती से होना करने के लिए इसके बारे में 5 मिमी उन्नत मुखर रस्सियों से पारित कर दिया, लेकिन अभी भी अच्छी तरह से कैरिना ऊपर।
  10. एक जेल लोड हो रहा विंदुक टिप के साथ कैथेटर के माध्यम से इंजेक्शन द्वारा तरल के 50 μl अप करने के लिए पैदा करने के लिए तैयार करें। Luer हब में टिप जगह है, लेकिन माउस की श्वास के साथ टिप तुल्यकालिक में तरल पदार्थ के आंदोलन का निरीक्षण करने के लिए ध्यान से देखने के इंजेक्शन लगाने से पहले। तब instillate इंजेक्षन।
  11. 1 मिलीलीटर सिरिंज के साथ, तुरंत फेफड़ों में तरल गहरी वितरित करने में मदद करने के लिए कैथेटर के माध्यम से फेफड़ों में हवा के 0.6 मिलीलीटर की एक अपेक्षाकृत तेजी से मुद्रास्फीति करते हैं। प्रवेशनी निकालें।
  12. प्रवेशनी निकालें।
  13. Vetbond के लिए पैकेज डालने के निर्देशों के अनुसार छोटी सी शल्य घाव को बंद करने के लिए cyanoacrylate चिपकने वाला की एक छोटी राशि का उपयोग करें। अलग-अलग पिंजरों में चूहों प्लेस और वे जाग जब तक नेत्रहीन उन पर नजर रखने और discomf का कोई संकेत के बिना सामान्य रूप से व्यवहारort।

2. फेफड़े फिक्सेशन

नोट: सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं एक माउस में किया जाता है एक बार, फेफड़ों फॉर्मेल्डीहाइड (या किसी भी अन्य वांछित लगानेवाला) के साथ निर्धारण द्वारा histologic प्रसंस्करण के लिए सज जा सकता है।

  1. एक IACUC स्वीकार्य प्रक्रिया के साथ माउस बलिदान। वीडियो में दिखाया गया प्रतिनिधि माउस के लिए, एक anesthetized माउस की ग्रीवा अव्यवस्था प्रयोग किया जाता है।
  2. शल्य चिकित्सा, श्वासनली के उदर पक्ष को उजागर एक छोटे से कट रही है, और श्वासनली में एक 18 जी ठूंठ सुई की नोक डालने, और धागे के साथ बांधने द्वारा (पहले से ही ऐसा नहीं किया है तो) एक ट्रेकियोस्टोमी प्रदर्शन करते हैं।
  3. ध्यान से, एक midline चीरा के साथ छाती खोलने डायाफ्राम दूर कटौती, और फेफड़ों को बेनकाब करने के लिए पार्श्व छाती दीवारों को हटा दें।
  4. Formaldehyde युक्त एक अंगूठी स्टैंड पर एक जलाशय के लिए सुई की Luer अंत कनेक्ट। चित्रा 3 देखें।
  5. 25 सेमी समझौता ज्ञापन के स्तर से ऊपर formaldehyde के ऊपर की सतह सेटएसई। चित्रा 3 देखें। इसके बाद एक पानी निकलने की टोंटी के अंत द्रव बाहर चलाकर निर्धारण ट्यूबिंग में कोई हवा नहीं है सुनिश्चित करें। जलाशय ट्यूबिंग को सांस की नली प्रवेशनी की Luer अंत कनेक्ट। Formaldehyde के साथ फेफड़ों में हवा को पानी निकलने की टोंटी खोलें। कम से कम 20 मिनट के लिए दबाव में फेफड़ों छोड़ दें।
  6. Formaldehyde के साथ फेफड़ों में हवा को पानी निकलने की टोंटी खोलें। कम से कम 20 मिनट के लिए दबाव में फेफड़ों छोड़ दें।
  7. इसके बाद, ठूंठ सुई के अंत से परे श्वासनली बंद टाई। यह uncannulated श्वासनली की अधिक बेनकाब करने के लिए सुई पर धीरे धीरे वापस खींचने के लिए मदद मिल सकती है। सुरक्षित रूप से बंधे है, जब पानी निकलने की टोंटी को हटा दें।
  8. ध्यान से फेफड़ों काटना।
  9. रात भर formaldehyde में फेफड़ों रखें। अब समय ठीक हैं, और कुछ दाग या प्रक्रियाओं के विशिष्ट समय निर्दिष्ट कर सकता है। इसके अलावा ऐसे Z-ठीक कर के रूप में किसी भी अन्य तरल fixatives, टपकाना और विसर्जन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
  10. आगे histologic प्रक्रिया से पहले, मापनेअगले वर्णित के रूप में तय फेफड़ों की मात्रा।

फिक्स्ड फेफड़ों की मात्रा का मापन 3.

  1. चित्रा 4 में सचित्र के रूप में आर्किमिडीज सिद्धांत का उपयोग फेफड़ों की मात्रा को मापने फॉर्मेल्डीहाइड से तय फेफड़ों निकालें और दिल और किसी भी अन्य गैर फेफड़े के ऊतकों काटना।
  2. पूरी तरह से पानी के नीचे फेफड़ों रखने के लिए प्रयोग किया जाता है कि एक पहले से निर्माण साधारण घर का तार समर्थन डिवाइस का प्रयोग करें।
    नोट: इस डिवाइस का इस्तेमाल किया जा रहा है, जो भी संतुलन के साथ संगत किए जाने की जरूरत है। चित्रा 5 में दिखाया गया एक विशिष्ट डिवाइस प्लास्टिक pipettes और पतली (20 ग्राम) तार से बनाया गया है। इस प्रणाली के वीडियो में इस्तेमाल संतुलन के साथ अच्छी तरह से काम करता है, लेकिन आसानी से सबसे प्रयोगशाला शेष राशि के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
  3. पानी में जगह में समर्थन पिंजरे के साथ संतुलन और बारदाना पर पानी की ≈200 मिलीलीटर के साथ एक बीकर रखें। । चित्रा 6 देखें धातु पिंजरे निकालें; पानी की सतह पर फेफड़ों जगह है और पानी के नीचे दबातेपिंजरे के साथ।
  4. संतुलन पर वजन रिकॉर्ड। यह संख्या पानी विस्थापित की मात्रा को दर्शाता है और इस प्रकार फेफड़ों की मात्रा का एक सीधा उपाय है। यकीन है कि फेफड़ों या सीवन या पक्षों या बीकर के नीचे स्पर्श नहीं करता तार पिंजरे के किसी भी भाग बनाने के लिए सावधान रहें।
  5. सटीकता के लिए, इस माप दोहराएँ। एक ऊतक पर पानी से फेफड़े, और सूखी निकालें। फिर से जगह में पिंजरे के साथ बीकर धड़ा और फेफड़ों की मात्रा माप दोहराएँ। दो मात्रा माप तो औसतन किया जाना चाहिए।
    नोट: फेफड़ों के बारे में अधिक से अधिक एक सप्ताह के लिए formalin में छोड़ दिया जाता है, फेफड़ों में हवा तरल में भंग कर दिया जाएगा। जब ऐसा होता है, फेफड़ों डूब जाएगी, तो यह जलमग्न फेफड़ों रखने के लिए चित्रा 5 में के रूप में किसी भी उपकरण का उपयोग करने के लिए आवश्यक नहीं रह गया है। इस तरह के मामले में मात्रा 4 चित्र में सचित्र के रूप में यह पूरी तरह से जलमग्न है जब तक सिवनी तारों में से एक द्वारा फेफड़ों धारण करके बस से मापा जा सकता है।

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Representative Results

प्रक्रिया से ही किसी भी सामान्यीकृत परिणाम के लिए नेतृत्व नहीं करता है पहली प्रोटोकॉल में वर्णन है। यह केवल सीधे श्वासनली में पदार्थों टपकाना करने के लिए एक बहुत ही विश्वसनीय साधन का वर्णन है। 7 trypan नीले यहाँ वर्णित विधि के साथ डाले गया था, जिसमें एक फेफड़ों का एक उदाहरण से पता चलता है। श्वासनली या चूहों 11,12 में सीधे दिया अन्य रंगों या ट्रेसर के साथ देखा गया है क्या करने के लिए इसी तरह की डाई के व्यापक वितरण, वहाँ है। हम यह भी क्रमश व्यापक फाइब्रोसिस या वातस्फीति, में जो परिणाम फेफड़े, को bleomycin या elastase या तो वितरित करने के लिए इस विधि का इस्तेमाल किया है।

पोस्टमार्टम के फेफड़ों में संरचनात्मक परिवर्तन बढ़ाता के लिए वर्णित प्रक्रियाओं 25 सेमी एच 2 ओ के दबाव में तय फेफड़ों की मात्रा पर डेटा प्रदान इस तरह की मात्रा माप की कुल संख्या 10 में सेल या ऊतक के घनत्व के बाद निष्पक्ष histologic माप को परिवर्तित करने के लिए आवश्यक हैं। इस पत्र केवल डेएक बहुत ही सटीक फेफड़ों की मात्रा प्राप्त करने के लिए साधन तो शास्त्री। नौ 10-12 सप्ताह पुरानी स्वस्थ Balb / ग चूहों में हम (एसडी ±) एक मतलब बाएं फेफड़े मात्रा कुल के बारे में 30% होने के साथ 0.82 ± 0.09 मिलीग्राम की अचल फेफड़ों की मात्रा को मापा। Balb में / ग चूहों अग्नाशय इलास्टेज के 3 यू दिया प्रयोगात्मक वातस्फीति उत्पन्न करने के लिए (इस पत्र में वर्णित विधि के साथ), फेफड़ों तय मात्रा 30% से कम शेष बाएं फेफड़े अंश के साथ, 1.15 ± 0.13 मिलीग्राम की वृद्धि हुई।

चित्र 1
चित्रा 1: टपकाना के लिए इस्तेमाल थोड़ा घुमावदार टिप के साथ नसों में कैथेटर।

चित्र 2
चित्रा 2:। इंटुबैषेण के लिए चूहों का समर्थन करने के लिए इस्तेमाल 3 अंगूठी बांधने की मशीन 3 चूहों को पकड़ करने के लिए स्थापित यह बांधने की मशीन sloped।


चित्रा 3:। द्रव के शीर्ष माउस के ऊपर 25 सेमी सेट के साथ रिंग पर Formalin भरा जलाशय, माउस के लिए जुड़े हैं इस निर्धारण आम तौर पर एक धूआं हुड में किया जाना चाहिए।

चित्रा 4
चित्रा 4:। आर्किमिडीज सिद्धांत एक जलमग्न वस्तु से विस्थापित पानी का वजन वस्तु की मात्रा के बराबर होती है। फेफड़ों के सामान्य रूप से कुछ अवशिष्ट हवा को बरकरार रखे हुए है, क्योंकि चित्रा 5 में के रूप में एक डिवाइस पूरी तरह से जलमग्न फेफड़ों रखने की जरूरत है।

चित्रा 5
चित्रा 5: लैब फेफड़ों पूरी तरह से पानी के भीतर रखने के लिए समर्थन कर दिया डिवाइस।प्लास्टिक pipettes और धातु के तार से निर्माण किया।

चित्रा 6
चित्रा 6: बीकर और फेफड़ों की मात्रा माप के लिए तैयार tared डुबकी डिवाइस के साथ प्रयोगशाला संतुलन।

चित्रा 7
चित्रा 7: इंटुबैषेण कैथेटर के माध्यम से trypan नीले रंग को देखते हुए एक फेफड़ों का उदाहरण है।

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Discussion

यहाँ वर्णित प्रक्रियाओं कई फायदे हैं। सबसे पहले आवश्यक उपकरण सरल और सस्ती है। दूसरा, इंटुबैषेण जल्दी से कुछ त्रुटियों के साथ किया जा सकता है। तीसरा, तय फेफड़ों की मात्रा एक लगातार दबाव में फेफड़ों को ठीक है, और फिर उपाय करने की क्षमता फेफड़ों के 10 में संरचनाओं या कोशिकाओं के समुचित मात्रा का ठहराव की अनुमति देता है।

इंटुबैषेण के लिए एक संभावित नकारात्मक पक्ष यह मामूली सर्जरी है। यह एक 2 एन डी टपकाना चाहिए तो प्रक्रिया को दोहराने की क्षमता को सीमित कर सकता है। हालांकि, चिपकने के सावधान सर्जरी और आवेदन के साथ हम नियमित रूप से या बाद में दोनों ने एक दूसरे टपकाना एक सप्ताह में करने के लिए सक्षम है। निरंतर दोहराया instillations आवश्यक हैं या बार-बार फेफड़े के कार्य परीक्षण की जरूरत है, तो एक और इंटुबैषेण दृष्टिकोण 13,14 अधिक वांछनीय हो सकता है।

टपकाना करने में, उल्लेख किया जाना चाहिए कि कई व्यावहारिक मुद्दों कर रहे हैं। यह महत्वपूर्ण है टीओ मुंह की प्रारंभिक खोलने में जीभ के आंदोलन के साथ संभव के रूप में कोमल हो। संदंश इस्तेमाल कर रहे हैं, सुझाव यह जीभ को घायल करने के लिए आसान है, के बाद से रबर टयूबिंग के साथ कवर किया जाना चाहिए, और इस माउस की मौत हो सकती है। यहाँ तरीकों 6 सप्ताह से अधिक उम्र के चूहों के इंटुबैषेण के लिए डिजाइन किया गया है, वे आसानी से युवा चूहों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

हमारे टपकाना प्रक्रिया शुरू में oropharyngeal आकांक्षा 11 की विधि के लिए एक विकल्प के रूप में तैयार किया गया था। इस बाद विधि आसानी से सीखा जा सकता है, जबकि instillate के कुछ ग्रसनी में रहता है और निगल जाता है, के बाद से फेफड़ों के लिए दिया वास्तविक मात्रा अनिश्चित बनी हुई है। श्वासनली और हम यहाँ प्रदर्शित के रूप में बाद फेफड़ों मुद्रास्फीति में एक सीधा टपकाना के साथ, instillate सीधे फेफड़ों के लिए दिया जाता है। यह इस तरह के इंटुबैषेण कर सकते हैं श्वासनली 11,12 के लिए सीधे पदार्थों देने के लिए इंटुबैषेण का उपयोग करने के लिए डा संभव है, हालांकि यह है कि ध्यान देने योग्य हैऊपरी airway या मुखर chords दाना, और सामान्य रूप में हमारे प्रक्रिया की अनुमति देता है कि 100% सफलता दर सुनिश्चित करने के लिए प्रशिक्षण का एक बहुत उच्च स्तर की आवश्यकता है।

हम वर्णन निर्धारण प्रक्रिया में कई जांचकर्ताओं क्या उपयोग करने के लिए इसी तरह की है। वहाँ लगानेवाला के लिए इस्तेमाल किया मुद्रास्फीति के दबाव में कुछ परिवर्तनशीलता अक्सर होता है, लेकिन हम 25 सेमी एच 2 ओ के ऊपर महंगाई से संभावित नुकसान के बिना पूरी तरह से फुलाया फेफड़ों रहता है कि एक उचित समझौता है कि लग रहा है। यह यह 25 सेमी एच के लिए तरल पदार्थ के साथ फुलाया एक फेफड़ों 2 हे कुल फेफड़ों की क्षमता 35 सेमी एच 2 ओ पर हवा मुद्रास्फीति के साथ क्या हो सकता है के करीब एक मात्रा में होना चाहिए कि लग सकता है, हालांकि, हालांकि, कि ध्यान दिया जाना चाहिए, यह है सच्चाई से दूर। वास्तव में, लगानेवाला साथ मुद्रास्फीति आम तौर पर हवा फेफड़ों की क्षमता 15,16 के 70% से कम एक मात्रा में यह परिणाम है। और आयल एम्बेडिंग के साथ बाद में प्रसंस्करण के साथ, histologic वर्गों में देखी प्रभावी फेफड़ों की मात्रा कार्यात्मक अवशिष्ट CA नीचे होने की संभावना हैpacity (एफआरसी)। सबसे आम लगानेवाला formalin या जेड तय है, लेकिन immunologic धुंधला के लिए, एक glutaraldehye मिश्रण अक्सर आवश्यक है। जांचकर्ता दाग होने की जरूरत है पर निर्भर करता है एक लगानेवाला चुनने की आवश्यकता होगी, लेकिन इष्टतम लगानेवाला की आगे की चर्चा के इस तरीके पत्र के दायरे से परे है।

Histologic वर्गों का उचित मात्रात्मक विश्लेषण करने के लिए आदेश में यह फेफड़ों की मात्रा 10 की एक माप के लिए आवश्यक है। यह धारावाहिक वर्गों (Cavalieri विधि) की पूरी अनुक्रम से फेफड़ों की मात्रा पाने के लिए संभव है, माउस फेफड़ों में यह हम इस दस्तावेज़ और वीडियो में वर्णन किया है बस के रूप में तय फेफड़ों की मात्रा को मापने के लिए अक्सर सरल है। हम वर्णन प्रक्रिया करने के लिए सिर्फ सेकंड लेता है और नियमित रूप से सभी फेफड़ों fixations के साथ किया जाना चाहिए। इस प्रकार मापा मात्रा बाद के प्रसंस्करण और embedding के साथ किसी भी दबाव के लिए खाते में नहीं है, तथापि, कि ध्यान में रखें, और यह महत्वपूर्ण है, तो Cavalieri विधि चाहिएइस्तेमाल किया गया। यह तय मात्रा माप के बारे में एक अंतिम ध्यान दें तय फेफड़ों में बाएं फेफड़े में फेफड़ों की मात्रा के अंश विवो में मापा गया है जो कि तुलना में काफी छोटा है। यह आम तौर पर 25 सेमी एच पर तय फेफड़ों से ऊपर माप में केवल 30% है, जबकि कार्यात्मक अवशिष्ट क्षमता पर चूहों के दो प्रकारों के विवो में फेफड़ों की सीटी इमेजिंग, कुल 17 के बारे में 40% होने की बाएं फेफड़े दिखाया 2 हे । यह तो अलग क्यों होना चाहिए वर्तमान समय में, हम समझ में नहीं आता, लेकिन मात्रात्मक histologic विश्लेषण में परिवर्तन का विश्लेषण करते समय यह ध्यान में रखा जाना चाहिए। फेफड़ों की मात्रा का माप होने फेफड़ों के कैंसर के अध्ययन, के संबंध में ठीक से विशिष्ट रासायनिक desnsities या पूरे ट्यूमर या पूरे फेफड़ों में पूर्ण संख्या के लिए विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के घनत्व पर डेटा मानक के अनुसार एक अन्वेषक सक्षम बनाता है।

सारांश में, इंटुबैषेण प्रक्रिया यहाँ का वर्णन निर्माण करने के लिए सस्ती हैऔर सरल का उपयोग करने के लिए, और यह जल्दी से सफलतापूर्वक अपेक्षाकृत कम अनुभव के साथ माउस फेफड़ों में तरल पदार्थ पैदा करने के लिए सीखने के लिए सबसे जांचकर्ताओं और प्रयोगशाला तकनीशियनों को सक्षम होना चाहिए। इसके अलावा, फेफड़ों के histologic विश्लेषण के लिए निर्धारण प्रक्रियाओं और फेफड़ों की मात्रा माप फेफड़ों की कोशिकाओं और फेफड़ों संरचना के समुचित repeatable और मात्रात्मक विश्लेषण के लिए एक साधन उपलब्ध कराते हैं।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Laboratory Balance Ohaus Adventurer Pro Model AV 313  Other balances can be used if they have a range of 1-300 g
20 g Luer intravenous catheter Insylte Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva
500 ml laboratory bottle Various Several other possible vendors

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References

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  1. First of all great article and it is very informative. I am trying to order supplies to have a setup That is shown approve in Figure 3. I was wondering if you can give a more detailed description of this setup. i.e. the materials and instruments used. I am not sure what the glass reservoir is called and not sure what type of stopcock is being used or the type of tubing. Thanks in advance for your reply.

    Reply
    Posted by: Christina V.
    January 21, 2016 - 3:43 PM

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