Regioselective O- גליקוזילציה של נוקלאוזידים via זמני 2', 3'-Diol הגנה על ידי אסתר Boronic לסינתזה של דו-סוכר נוקלאוזידים

Chemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Chemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים לסינתזה של דו-סוכר נוקלאוזידים מאת regioselective O- גליקוזילציה של ribonucleosides באמצעות הגנה זמנית של שלהם 2', 3'-diol moieties ניצול של אסתר boronic מחזורית. שיטה זו חל על מספר נוקלאוזידים לא מוגן כמו אדנוזין, guanosine, cytidine, uridine, 5-methyluridine 5-fluorouridine לתת נוקלאוזידים דו-סוכר המתאימים.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Someya, H., Itoh, T., Kato, M., Aoki, S. Regioselective O-Glycosylation of Nucleosides via the Temporary 2',3'-Diol Protection by a Boronic Ester for the Synthesis of Disaccharide Nucleosides. J. Vis. Exp. (137), e57897, doi:10.3791/57897 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

דו-סוכר נוקלאוזידים, המורכבים מסקטור moieties דו-סוכר ואת הבסיסים החנקניים המרכיבים, נודעו בשם קבוצת מוצרים טבעיים שיש bioactivities בעלי תכונות רבגוניות יקרי ערך. אמנם Oכימי - גליקוזילציה אסטרטגיה בדרך כלל מועיל לסנתז נוקלאוזידים דו-סוכר, הכנת מצעים תורמים glycosyl ו acceptors דורש מייגע מגן הקבוצה מניפולציות של טיהור- כל שלב סינתטי. בינתיים, מספר קבוצות המחקר דיווחו על כך boronic, אסטרים borinic לשמש מגן או הפעלת קבוצה של פחמימות נגזרים על מנת להשיג את acylation regio - ו/או stereoselective אלקילציה, silylation, גליקוזילציה. במאמר זה נדגים את ההליך עבור regioselective O- גליקוזילציה של ribonucleosides לא מוגן ניצול חומצה boronic. Esterification של 2', 3'-diol של ribonucleosides עם חומצה boronic עושה הגנה זמנית של diol, ו, O- גליקוזילציה הבאים עם תורם glycosyl בנוכחות p- toluenesulfenyl כלוריד וכסף היתרים triflate, התגובה regioselective של קבוצת 5'-הידרוקסיל לממן את נוקלאוזידים דו-סוכר. בשיטה זו יכול להיות מיושם נוקלאוזידים שונים, כגון guanosine, אדנוזין, cytidine, uridine, 5-metyluridine 5-fluorouridine. מאמר זה ווידאו המלווה את ייצג מידע שימושי (חזותי) עבור O- גליקוזילציה של נוקלאוזידים לא מוגן, שלהם תחליפי לסינתזה של דו-סוכר נוקלאוזידים אלא גם מגוון מבחינה ביולוגית רלוונטית נגזרים.

Introduction

דו-סוכר נוקלאוזידים, אשר conjugates של נוקלאוטיד, moiety פחמימות מקושרים באמצעות O-glycosidic בונד, מהווים שיעור יקר ערך-באופן טבעי פחמימות נגזרים1,2 ,3,4,5,6,7. למשל, הם משולבים ביולוגיות כגון tRNA (חומצה ריבונוקלאית העברה), poly(ADP-ribose) (ADP = אדנוזין diphosphate), כמו גם כמה סוכנים אנטיבקטריאלי וחומרים אחרים מבחינה ביולוגית-פעיל (למשל, adenophostins, amicetins, ezomycin)5,6,8,9,10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19. לפיכך, דו-סוכר נוקלאוזידים ונגזרותיהם צפויים להיות תרכובות הפניה למחקר לגילוי סמים. למתודולוגיות לסינתזה של דו-סוכר נוקלאוזידים מסווגים לשלוש קטגוריות; אנזימטי O- גליקוזילציה20,21, כימי N- גליקוזילציה5,9,16,22,23, 24, ו הכימי O- גליקוזילציה7,9,14,16,18,19,24, 25,26,27,28,29,30,31,32,33, 34,35,36,37. בפרט, Oכימי - גליקוזילציה תהיה שיטה יעילה כדי להפוך את stereoselective סינתזה סינתזה בקנה מידה גדול של נוקלאוזידים דו-סוכר. מחקר קודם הראה כי O- גליקוזילציה של 2'-deoxyribonucleoside 2 עם thioglycosyl התורם 1, באמצעות השילוב של p- toluenesulfenyl כלוריד וכסף triflate, מעניקה רצוי דו-סוכר nucleoside 3 (איור 1; Ar = aryl ו פ ג = קבוצה מגן)38.

בעקבות תוצאות אלה, החלטנו לפתח את O- גליקוזילציה של החלת מערכת יזם triflate p/כסף כלוריד - toluenesulfenyl ribonucleosides. בעוד מספר דוגמאות של O- גליקוזילציה של ribonucleosides מוגן חלקית כבר הפגינו7,9,14,16,18,19 ,24,32,33,34,35,36,37, השימוש לא מוגנים או מוגן באופן זמני ribonucleosides כמו מקבל glycosyl עבור O- גליקוזילציה דווח החזרה. לכן, ההתפתחות של regioselective O- גליקוזילציה של ribonucleosides לא מוגנים או מוגן באופן זמני מספקות שיטה סינתטית יותר מועיל ללא הגנה על מניפולציות קבוצה של ribonucleosides. על מנת להשיג את regioselective O- גליקוזילציה של ribonucleosides, התמקדנו תרכובות בורון, כי מספר דוגמאות של acylation regio - ו/או stereoselective, אלקילציה, silylation גליקוזילציה פחמימות המעו ף בסיוע boronic או חומצה borinic דיווח39,40,41,42,43,44,45 ,46,47,48,49,50. במאמר זה נדגים את ההליך לסינתזה של דו-סוכר נוקלאוזידים ניצול regioselective O- גליקוזילציה בקבוצת 5'-הידרוקסיל של ribonucleosides דרך אסתר boronic ביניים. באסטרטגיה המובאת כאן, אסתר boronic ביניים 6 להיות המוענקת על ידי esterification של ribonucleoside 4 עם boronic חומצה 5, אשר מאפשר את regioselective O- גליקוזילציה- 5'-הידרוקסיל קבוצה עם התורם thioglycosyl 7 לתת את דו-סוכר nucleoside 8 (איור 1B)51. למדנו גם את האינטראקציה של ribonucleoside וחומצה boronic על ידי תהודה מגנטית גרעינית (NMR) ספקטרוסקופיה, כדי לבחון את היווצרות אסתר boronic. Esterification לעשות עם אסתר boronic, תגובת גליקוזילציה דורשים תנאים נטול מים כדי למנוע את הידרוליזה של אסתר boronic, התורם glycosyl. במאמר זה נדגים ההליכים טיפוסי כדי לקבל את התנאים נטול מים לתגובות גליקוזילציה מוצלחת חוקרים וסטודנטים לא רק בכימיה, אלא גם בתחומי מחקר אחרים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הערה: כל הנתונים ניסיוני [NMR, spectroscopies אינפרא-אדום (IR), המונים spectroscopies (MS), סיבובים אופטי ונתונים מנתח היסודות] של תרכובות מסונתז דווחו ב- נייר הקודם51.

1. נוהל O- גליקוזילציה תגובות

  1. סינתזה של תרכובת α/β-12 (כניסה 12 ב טבלה 1)
    הערה: ערכים 1-13 טבלה 1 בוצעו באמצעות הליך דומה.
    1. הגנה זמנית של 2', 3'-diol של ribonucleoside40
      1. ב- 10 מ"ל הבקבוק בצורת אגס (מבחנה 1) להמיס mannosyl התורם α -9 (28.4 מ"ג, 0.0486 mmol)52, uridine 10 (7.9 מ ג, 0.0324 mmol) ו 4 - חומצה phenylboronic (trifluoromethyl) ג 11 (9.3 מ ג, 0.0490 mmol) בפירידין נטול מים (0.40 mL).
        הערה: השימוש בקבוקון אגס 10 מ"ל מומלץ כי, בשלב 1.1.3.1, תערובת התגובה יועברו אל הבקבוק 2 (10 מ ל שני-צוואר עגול-התחתון בקבוקון עם מחצה מצורף) המכיל מולקולרית sieves אבקה.
      2. שיתוף להתנדף תערובת התגובה (להשיג צעד 1.1.1.1). עם פירידין נטול מים (0.40 מ ל, 3 x), נטול מים 1, 4-dioxane (0.40 מ ל, 3 x) בטמפרטורת החדר ל- ca. 40 ° C כדי להסיר את כל המים.
      3. להמיס את השאריות (מתקבל בשלב 1.1.1.2.) בנטול מים 1, 4-dioxane (0.32 מ"ל) ומערבבים את תערובת התגובה בטמפרטורה ריפלוקס שלה עבור h 1 לטופס של אסתר boronic (הגנה זמנית).
      4. הסר את הממס באמצעות המאדה ואחריו משאבת ואקום.
    2. הפעלה של הנפות מולקולרית
      1. ב- 10 מ ל שני-צוואר עגול-התחתון בקבוקון עם מחצה מצורף (הבקבוק 2), להוסיף 4 Å אבקת הנפות מולקולרית (64-מ ג).
        הערה: יש לבחור הנפות מולקולרית המתאים על פי הממס המשמש את גליקוזילציה (3 Å עבור acetonitrile) ו- 4 Å 1, 4-dioxane, דיכלורומתאן של propionitrile.
      2. מחממים את הנפות מולקולרית במיקרוגל תחת לחץ אטמוספירי. רגוע תחת לחץ מופחת פונו ע י משאבה ואקום (3 x) אותם ואני ואז לייבש אותם עם אקדח חום תחת לחץ מופחת תוך כדי החלפת האוויר בגז ארגון מספר פעמים.
    3. גליקוזילציה
      1. להמיס את השאריות של שלב 1.1.1.4. בקבוק 1 ב propionitrile (0.64 מ"ל) או ממיסים אחרים ולהעביר פתרון זה הבקבוק. 2.
        הערה: Acetonitrile, 1, 4-dioxane, דיכלורומתאן ו propionitrile שימשו עבור ערכים 1-7 ו- 9, כניסה 10, 11 ערך וערכי 8, 12 ו- 13, בהתאמה.
      2. מערבבים את תערובת התגובה הבקבוק 2 בטמפרטורת החדר במשך 0.5 h ואחריו קירור זה ל-40 מעלות צלזיוס.
        הערה: הטמפרטורה השתנה בהתאם הממס המשמש את גליקוזילציה (-40 ° C עבור דיכלורומתאן ו- propionitrile), טמפרטורת החדר עבור 1, 4-dioxane, ו-20 ° C עבור acetonitrile.
      3. להוסיף תערובת התגובה בטמפרטורה זהה המשמשים בשלב 1.1.3.2 כסף triflate (49.9 mg, 0.194 mmol) ו p -toluenesulfenyl כלוריד (12.8 µL, 0.0968 mmol).
      4. מערבבים את תערובת התגובה בטמפרטורה זהה עבור 1.5 h.
      5. בדוק את התגובה על ידי שכבת דק כרומטוגרפיה (TLC) עם הקסאן/אתיל אצטט [3/1 (v/v)] כדי לבדוק את התורמים glycosyl [הגורם השמירה (Rf) (התורם α -9) = 0.63] עם הכלורופורם/מתנול [10/1 (v/v))] כדי לבדוק את glycosyl acceptors ומוצרים [Rf (מקבל 10) = 0.03, Rf (המוצר הרצוי) = 0.50].
      6. להרוות את תערובת התגובה עם רוויה המימית סודיום ביקרבונט (1.0 מ"ל), לדלל את זה עם הכלורופורם (2.0 מ ל), להסיר את החומרים לא מסיסים עם Celite, לשטוף היטב את Celite עם הכלורופורם (20 מ ל).
      7. לשטוף את פילטרט של (שכבה אורגני) עם רוויה המימית סודיום ביקרבונט (20 מ ל, 3 x), מלח (20 מ ל) באמצעות משפך של 100 מ.
      8. מתייבשים השכבה אורגני שנוצר עם נתרן גופרתי, לסנן את החומרים לא מסיסים, לרכז את פילטרט של שימוש על המאדה.
      9. בערך לטהר את השאריות שנותרו על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 50/1 (v/v)] לממן גס 5'-O-(-6" -O- אצטיל-2", 3", 4"- tri-Oבנזיל-α/β-ᴅ-mannopyranosyl) uridine המכיל כמות קטנה של תוצרי לוואי (15.2 מ"ג, סירופ שקוף).
    4. Acetylation
      1. בבקבוקון 5 מ"ל, לפזר את המתחם גולמי שנוצר מוכן בשלב 1.1.3.9 ב פירידין נטול מים (0.20 מ ל).
      2. להוסיף N,N-דימתיל-4-aminopyridine (כמות קטליטי), אנהידריד אצטי (20.4 µL, 0.0216 mmol: מקבילות 10 מבוסס על המתחם גולמי) לפתרון ב 0 º C.
      3. מערבבים את תערובת התגובה בטמפרטורה זהה עבור 0.5 h ואחריו מחמם לטמפרטורת החדר.
      4. לאחר ערבוב בין לילה, לבדוק את התגובה על ידי חום ואהבה עם הכלורופורם/מתנול [30/1 (v/v)] [Rf (α/β-12) = 0.45].
      5. לדלל את התערובת התגובה עם הכלורופורם (20 מ ל).
      6. לשטוף את השכבה אורגני עם חומצת מלח 1 מ' (20 מ ל, 3 x), רווי המימית סודיום ביקרבונט (20 מ ל, 3 x) מלח (20 מ ל) באמצעות משפך של 100 מ.
      7. מתייבשים השכבה אורגני שנוצר עם נתרן גופרתי, לסנן את החומרים לא מסיסים, לרכז את פילטרט של שימוש על המאדה.
      8. לטהר את השאריות שנותרו על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 90/1 (v/v)] לתת α/β-12 (15.8 מ ג, 61%, α/β = 1.6/1, אמורפיות חסר צבע).
  2. סינתזה של תרכובות β-22 β-30 (טבלה 2) ו β-33 (טבלה 3)
    הערה: הסינתזה של β-22-Β-30β-33בוצע באמצעות הליך דומה.
    1. סינתזה של מתחם β-22 (כניסה 1 בטבלה מס ' 2)
      1. הגנה זמנית של 2', 3'-diol של ribonucleoside
        1. ב- 10 מ"ל הבקבוק בצורת אגס (מבחנה 3) להמיס אדנוזין 13 (20.4 מ ג, 0.0763 mmol), galactosyl תורם β -21 (80.4 mg, 0.114 mmol)53ו 4-(trifluoromethyl) phenylboronic חומצה 11 c (21.7 mg, 0.114 mmol) בנטול מים פירידין (0.76 מ ל).
          הערה: השימוש בקבוקון אגס 10 מ"ל מומלץ כי תערובת התגובה יועברו אל הבקבוק 4 (10 מ ל שני-צוואר עגול-התחתון בקבוקון עם מחצה מצורף) המכיל מולקולרית sieves אבקת בשלב 1.2.1.3.1.
        2. שיתוף להתנדף תערובת התגובה (מתקבל בשלב 1.2.1.1.1.) עם פירידין נטול מים (0.76 מ ל, 3 x), נטול מים 1, 4-dioxane (0.76 מ ל, 3 x) בטמפרטורת החדר ל- ca. 40 ° C כדי להסיר את כל המים.
        3. להמיס את השאריות (מתקבל בשלב 1.2.1.1.2.) בנטול מים 1, 4-dioxane (0.76 מ ל) ומערבבים את תערובת התגובה בטמפרטורה ריפלוקס שלה עבור h 1 לטופס של אסתר boronic (להגנה זמנית).
        4. הסר את הממס באמצעות המאדה ואחריו משאבת ואקום.
      2. הפעלה של הנפות מולקולרית
        1. ב- 10 מ ל שני-צוואר עגול-התחתון בקבוקון עם מחצה מצורף (הבקבוק 4), להוסיף 4 Å אבקת הנפות מולקולרית (150 מ ג).
        2. מחממים את הנפות מולקולרית במיקרוגל תחת לחץ אטמוספירי. רגוע תחת לחץ מופחת פונו ע י משאבה ואקום (3 x) אותם ואני ואז לייבש אותם עם אקדח חום תחת לחץ מופחת תוך כדי החלפת האוויר בגז ארגון מספר פעמים.
      3. גליקוזילציה
        1. להמיס את השאריות של שלב 1.2.1.1.4. בתוך הבקבוק 3 ב- propionitrile (1.50 מ ל) ולהעביר פתרון זה הבקבוק. 4.
        2. מערבבים את תערובת התגובה בטמפרטורת החדר במשך ה' 0.5, ולאחריו קירור זה ל-40 מעלות צלזיוס.
        3. להוסיף כסף triflate (117.6 מ"ג, 0.458 mmol) ו p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol) לתערובת התגובה בטמפרטורה אותו כפי שהוזכר בשלב 1.2.1.3.2.
        4. מערבבים את תערובת התגובה, בטמפרטורה זהה עבור 1.5 h.
        5. בדוק את התגובה על ידי חום ואהבה עם הקסאן/אתיל אצטט [2/1 (v/v)] כדי לבדוק את התורמים glycosyl [Rf (התורם β -21) = 0.62] עם הכלורופורם/מתנול [10/1 (v/v)] כדי לבדוק את glycosyl acceptors ואת המוצרים [Rf (מקבל 13 ) = 0.05, Rf (המוצר הרצוי) = 0.30].
        6. להרוות את תערובת התגובה עם רוויה המימית סודיום ביקרבונט (2.0 מ ל), לדלל את זה עם הכלורופורם (3.0 מ"ל), להסיר את החומרים לא מסיסים דרך Celite, לשטוף היטב את Celite עם הכלורופורם (30 מ ל).
        7. לשטוף את פילטרט של (שכבה אורגני) עם רוויה המימית סודיום ביקרבונט (30 מ ל, 3 x), מלח (30 מ ל) באמצעות משפך של 100 מ.
        8. מתייבשים השכבה אורגני שנוצר עם נתרן גופרתי, לסנן את החומרים לא מסיסים, לרכז את פילטרט של שימוש על המאדה.
        9. לטהר את השאריות שנותרו על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 30/1 (v/v)] לממן β -22 (27.4 מ ג, 42%, חסר צבע אחיד).
    2. סינתזה של מתחם β-23 (כניסה 2 בטבלה מס ' 2)
      1. התנהגות התגובה באמצעות 14 (28.4 מ"ג, 0.0765 mmol)54, β -21 (80.5 מ ג, 0.115 mmol), 11 c (מ ג 21.8, 0.115 mmol), כסף p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol), triflate (117.8 מ ג, 0.458 mmol), נטול מים 1, 4-dioxane (0.76 מ ל), נטול מים propionitrile (1.50 מ ל) ו Å 4 מולקולרית הנפות (150 מ ג). לטהר את שאריות הנוצרת על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 50/1 (v/v)] לתת β23 (21.9 מ ג, 30%, חסר צבע אחיד). TLC: Rf (β -23) = 0.37 [כלורופורם/מתנול = 10/1 (v/v)].
    3. סינתזה של מתחם β-24 (3 כניסה בטבלה מס ' 2)
      1. לנהל את התגובה באמצעות 15 (21.6 מ ג, 0.0763 mmol), β -21 (80.5 מ ג, 0.115 mmol), 11 c (21.8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol), כסף triflate (117.6 מ"ג, 0.458 mmol), נטול מים (1, 4-dioxane 0.76 מ ל), נטול מים propionitrile (1.50 מ ל), ואת Å 4 מולקולרית הנפות (150 מ ג). לטהר את שאריות הנוצרת על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 8/1 (v/v)] לתת β -24 (8.1 מ ג, 12%, חסר צבע אחיד). TLC: Rf (β -24) = 0.20 [כלורופורם/מתנול = 10/1 (v/v)].
    4. סינתזה של מתחם β-25 (4 כניסה בטבלה מס ' 2)
      1. התנהגות התגובה באמצעות 16 (27.0 מ"ג, 0.0764 mmol)55, β -21 (80.5 מ ג, 0.115 mmol), 11 c (מ ג 21.8, 0.115 mmol), כסף p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol), triflate (117.8 מ ג, 0.458 mmol), נטול מים 1, 4-dioxane (0.76 מ ל), נטול מים propionitrile (1.50 מ ל) ו Å 4 מולקולרית הנפות (150 מ ג). לטהר את שאריות הנוצרת על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 20/1 (v/v)] לתת β -25 (31.4 mg, 44%, חסר צבע אחיד). TLC: Rf (β -25) = 0.27 [כלורופורם/מתנול = 10/1 (v/v)].
    5. סינתזה של מתחם β-26 (5 כניסה בטבלה מס ' 2)
      1. לנהל את התגובה באמצעות 10 (18.6 מ"ג, 0.0762 mmol), β -21 (80.4 mg, 0.114 mmol), 11 c (21.7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol), כסף triflate (117.6 מ"ג, 0.458 mmol), נטול מים (1, 4-dioxane 0.76 מ ל), נטול מים propionitrile (1.50 מ ל), ואת Å 4 מולקולרית הנפות (150 מ ג). לטהר את שאריות הנוצרת על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 40/1 (v/v)] לתת β -26 (26.1 מ ג, 42%, חסר צבע אחיד). TLC: Rf (β -26) = 0.45 [כלורופורם/מתנול = 10/1 (v/v)].
    6. סינתזה של מתחם β-27 (כניסה 6 בטבלה מס ' 2)
      1. לנהל את התגובה באמצעות 17 (19.7 מ"ג, 0.0763 mmol), β -21 (80.5 מ ג, 0.115 mmol), 11 c (21.8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol), כסף triflate (117.6 מ"ג, 0.458 mmol), נטול מים (1, 4-dioxane 0.76 מ ל), נטול מים propionitrile (1.50 מ ל), ואת Å 4 מולקולרית הנפות (150 מ ג). לטהר את שאריות הנוצרת על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 40/1 (v/v)] לתת β -27 (33.8 mg, 53%, חסר צבע אחיד). TLC: Rf (β -27) = 0.50 [כלורופורם/מתנול = 10/1 (v/v)].
    7. סינתזה של מתחם β-28 (7 כניסה בטבלה מס ' 2)
      1. לנהל את התגובה באמצעות 18 (20.0 מ ג, 0.0763 mmol), β -21 (80.4 mg, 0.114 mmol), 11 c (21.7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol), כסף triflate (117.6 מ"ג, 0.458 mmol), נטול מים (1, 4-dioxane 0.76 מ ל), נטול מים propionitrile (1.50 מ ל), ואת Å 4 מולקולרית הנפות (150 מ ג). לטהר את שאריות הנוצרת על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם ואז אתיל אצטט/כלורופורם = (v/v) 1/1] לתת β28 (38.8 מ ג, 61%, חסר צבע אחיד). TLC: Rf (β -28) = 0.33 [כלורופורם/מתנול = 10/1 (v/v)].
    8. סינתזה של מתחם β-29 (8 ערך בטבלה מס ' 2)
      1. לנהל את התגובה באמצעות 19 (18.5 מ ג, 0.0761 mmol), β -21 (80.4 mg, 0.114 mmol), 11 c (21.7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol), כסף triflate (117.6 מ"ג, 0.458 mmol), נטול מים (1, 4-dioxane 0.76 מ ל), נטול מים propionitrile (1.50 מ ל), ואת Å 4 מולקולרית הנפות (150 מ ג). לטהר את שאריות הנוצרת על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 10/1 (v/v)] לתת β -29 (34.1 mg, 55%, חסר צבע אחיד). TLC: Rf (β -29) = 0.25 [כלורופורם/מתנול = 10/1 (v/v)].
    9. סינתזה של מתחם β-30 (9 כניסה בטבלה מס ' 2)
      1. התנהגות התגובה באמצעות 20 (26.6 מ ג, 0.0766 mmol)56, β -21 (80.6 mg, 0.115 mmol), 11 c (מ ג 21.8, 0.115 mmol), כסף p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol), triflate (117.8 מ ג, 0.458 mmol), נטול מים 1, 4-dioxane (0.76 מ ל), נטול מים propionitrile (1.50 מ ל) ו Å 4 מולקולרית הנפות (150 מ ג). לטהר את שאריות הנוצרת על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 50/1 (v/v)] לתת β -30 (28.0 מ ג, 40%, חסר צבע אחיד). TLC: Rf (β -30) = 0.48 [כלורופורם/מתנול = 10/1 (v/v)].
    10. סינתזה של מתחם β-33 (כניסה 1 בטבלה 3)
      1. התנהגות התגובה באמצעות 18 (20.0 מ ג, 0.0762 mmol), β -31 (80.4 mg, 0.114 mmol)57, 11 c (מ ג 21.7, 0.114 mmol), כסף p- toluenesulfenyl כלוריד (30.3 µL, 0.229 mmol), triflate (117.6 מ ג, 0.458 mmol), נטול מים 1, 4-dioxane (0.76 מ ל), נטול מים propionitrile (1.50 מ ל) ו Å 4 מולקולרית הנפות (150 מ ג). לטהר את שאריות הנוצרת על ידי טור כרומטוגרפיה [סיליקה ג'ל, כלורופורם/מתנול = 1/0 - 30/1 (v/v)] לתת β -33 (34.5 מ ג, 54%, חסר צבע אחיד). TLC: Rf (β -33) = 0.33 [כלורופורם/מתנול = 10/1 (v/v)].

2. deprotection של β-28 (איור 2)

  1. בקבוקון 5 מ"ל, הוסף β -28 (25.2 מ ג, 0.0300 mmol) ו- 10 מ' מתילאמין מתנול (2.0 מ"ל)58.
  2. מערבבים את תערובת התגובה ב-0 מעלות צלזיוס במשך 2 h ואחריו מחמם אותו לטמפרטורת החדר.
  3. לאחר ערבוב את התערובת עבור 13 h, לבדוק את התגובה על ידי חום ואהבה עם הכלורופורם/מתנול [10/1 (v/v)] [Rf (β -35) = 0.20].
  4. לרכז את תערובת התגובה באמצעות המאדה.
  5. להמיס את השאריות וכתוצאה מכך במים (15 מ"ל). ולשטוף את שכבה מימית עם דיכלורומתאן (15 מ ל, 3 x) באמצעות משפך 50 מ ל.
  6. רכז השכבה המימית בעזרת המאדה.
  7. לטהר את השאריות שנותרו על ידי מפוח ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC) [עמודה: הלחמה עמודה (octadecylsilane) (20באופן כללי x 250 מ מ), eluent: מים (מכיל חומצה trifluoroacetic 0.1% [וי/v]), קצב הזרימה: 8.0 mL/min, זיהוי: 266 nm, טמפרטורה: 25 ° C, זמן השמירה: 20 דקות] לתת β -35 (7.9 מ ג, 62%, מוצק אמורפי חסר צבע)59.

3. NMR מחקרים של אסתר Boronic מחזורית (איור 3 ו- 4)

  1. הכנה ומדידה של 36
    1. ב- 10 מ"ל הבקבוק בצורת אגס, להמיס uridine 10 (34.3 מ ג, 0.140 mmol) ו- 4-(trifluoromethyl) phenylboronic חומצה 11 c (40.0 מ ג, 0.211 mmol) בפירידין נטול מים (1.00 מ ל).
    2. שיתוף להתנדף תערובת התגובה עם פירידין נטול מים (1.00 מ ל, 3 x), נטול מים 1, 4-dioxane (1.00 מ ל, 3 x) בטמפרטורת החדר ל- ca. 40 ° C כדי להסיר את כל המים.
    3. להמיס את השאריות, נטול מים 1, 4-dioxane (1.40 מ"ל) ומערבבים את תערובת התגובה בטמפרטורה ריפלוקס שלה עבור h 1 לטופס של אסתר boronic (להגנה זמנית).
    4. לוותר על תערובת התגובה (0.14 מ"ל) לקח 5 מ.
    5. הסר הממיס המבחנה מ ל באמצעות המאדה ואחריו משאבת ואקום.
    6. להמיס את שאריות וכתוצאה מכך 36 acetonitrile -d3 (0.64 מ ל).
    7. למדוד 1H, 11B ו- 19F NMR spectroscopies בעזרת קוורץ NMR צינור 25 º C.
  2. הכנה או מידה 38
    1. להכין תערובת התגובה 38 מ- 11 c (40.0 מ ג, 0.211 mmol) באמצעות ההליך דומה לזו של השלב 3.1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

התוצאות של O- גליקוזילציה של uridine 10 thiomannoside α -9 מסוכמות בטבלה 160,61. ערך 1, O- גליקוזילציה של 10 עם α -9 בהיעדר נגזרים החומצה boronic גרמו להיווצרות תערובת מסובך. כניסה 2, 10 ו- phenylboronic חומצה 11 א היו מעורבים, התאדו במשותף עם פירידין ו 1, 4-dioxane ונסערת, לאחר מכן, ב- 1, 4-dioxane בטמפרטורה ריפלוקס שלה כדי ליצור הגנה זמנית על 2', 3'-cis- diol ואחריו תוספת של α -9 לנהל גליקוזילציה.

ערכי 3-13, O- glycosylations בוצעו לפי הפרוטוקול המתואר כאן (שלב 1.1). השפעת substituents על החומצה arylboronic נחקר ערכי 4 - 9. חומצות arylboronic אלקטרון לקויה כגון 4-(trifluoromethyl) phenylboronic חומצה 11 c ו- 2, 4-difluorophenylboronic חומצה 11 d הביא תשואות גבוהות כימי של α/β-12 מזו של 4-methoxyphenylboronic חומצה 11b , כנראה עקב יציבות גבוהה יותר ביניים boronic אסתר מקריסטלים של חומצה arylboronic חשוכת-אלקטרון62. עם זאת, השימוש של 4-nitrophenylboronic חומצה 11e, אשר יש גם קבוצת פורש אלקטרון, גרמו תשואה נמוכה כימי של α/β-12 בגלל המסיסות נמוכה של אסתר boronic ביניים ב- acetonitrile. בערך 8, O- גליקוזילציה באמצעות 4-hexylphenylboronic חומצה 11f , propionitrile (כדי לשפר את המסיסות של אסתר boronic ביניים) לא שיפר את התשואה כימי. כניסה 9, alkylboronic (חומצה cyclopentylboronic 11 גרם) שימש במקום חומצה arylboronic, אשר הביא תשואה נמוכה יותר כימי של α/β-12 מאשר זה של חומצות arylboronic.

אפקט הממס כימיות ביבול ובאיכות סטריאוסלקטיביות של המוצר גליקוזילציה נחקרה ערכי 10-12. כניסה 10, השימוש של 1, 4-dioxane הממס מותרת יותר α-stereoselective O- גליקוזילציה מאשר השימוש acetonitrile עשה63,64, ואילו התשואה של α/β-12 היו לא מספיקות. כניסה 11, O- גליקוזילציה ב דיכלורומתאן נתן כמות זניחה של α/β-12 בשל המסיסות נמוכה הביניים. כניסה 12, באמצעות propionitrile כמו הממס הביא תשואה גבוהה יותר כימי של α/β-12 מאשר כאשר באמצעות ממיסים אחרים (ערכים 5, 10 ו- 11) עם כמעט אותו סטריאוסלקטיביות לעומת השימוש acetonitrile (כניסה 5). כניסה 13, המקבילים של p- toluenesulfenyl כלוריד וכסף triflate הצטמצם ל 1.8 ו- 3.6 נגד 10, בהתאמה (ערכי 1-12, ושווי 3.0 ו- 6.0 של p- toluenesulfenyl כלוריד וכסף triflate היו משמש נגד 10, בהתאמה) לממן α/β-12 בתוצאה דומה.

בטבלה 2, O- glycosylations של 10 ו- 13 - 20 עם thiogalactoside β -21 בוצעו בתנאים התגובה ממוטבת נוסדה בשנת טבלה 1 (כניסה 12) (בנייר זה, אדנין, גואנין, ציטוזין, אורציל, תימין, ו 5-fluorouracil הן באופן מקוצר כאייד, גואה, Cyt, עורה, מלכותך, ו 5-FUra, בהתאמה, לא בתור A, G, C, U, T ו- 5-פו, אשר abbriviations הכללי שלהם כדי למנוע אי הבנה [לדוגמה, C-nucleoside פירושה בדרך כלל C (פחמן)-חוב glycosidic]). במקרה של אדנוזין, לא מוגן 13 המוענקת את nucleoside דו-סוכר המתאימים בתשואה גבוהה יותר מ- N- מוגן 14 יכול, כתוצאה depurination 14 ו/או β -23 דומה שלנו דוח (ערכים 1 ו- 2) הקודם38. O- גליקוזילציה של N- guanosine מוגן 16 שסופק β -25 בתשואה טובה יותר בהשוואה של גליקוזילציה לא מוגן 15 בשל המסיסות גבוה הביניים מקריסטלים 16 יותר מ 15 (ערכים 3 ו- 4). ערכי 5-7, נבחנו O- glycosylations של uridine 10 ותחליפי 5-metyluridine 17 ו 5-fluorouridine 18 . השימוש של 10 המוענקת β -26 (42% yield) עם תגובת לוואי לתת תוצר לוואי שבה 5-העמדה של moiety אורציל היה להחליף עם p- tolylthio קבוצה (כניסה 5)65. מצד שני, 17 ו- 18, בהם 5-המיקום של moiety אורציל הוא קבוצת מתיל או פטור, נתן את דו-סוכר המתאימים התשואות נוקלאוזידים β -27 ו β -28 בינוני, בהתאמה (ערכי 6 ו- 7). יתר על כן, תגובה בקנה מידה גדול באמצעות 250 מ"ג של 18 (0.95 mmol) ו- 1.01 גר' β -21 (1.43 mmol) המוענקת β -28 תשואה 58% (מ ג 461.0), המהווה התשואה אותו כמעט כמו זה של תגובה בקנה מידה קטן (% 61 ב 7 ערך של בטבלה 2 ). במקרה של cytidine, O- גליקוזילציה לא מוגן 19 נתן β -29 תשואה מעט טוב יותר מאשר השימוש של N- מוגן 20 וכתוצאה מכך β -30 עשה.

מספר תורמים glycosyl, כגון glucosyl התורם β -31, galactosyl תורם β -21ו- mannosyl התורם α -32, שימשו את O- גליקוזילציה של 5-fluorouridine 18 (טבלה 3)66. התוצאה של כניסה 2 היא זהה לזה של כניסה 7 המובאים בטבלה 2 בכתב היד. מתוצאות אלה, השימוש galactosyl התורם β -21 המוענקת את המקביל המוצר β -28 תשואה גבוהה לעומת השימוש של β -31 וα -32. ערך 3, התגובה באמצעות α -32 נתן תערובת של α -34 עם לוואי בלתי מזוהה, אשר יכול להיות משקל מולקולרי דומה כמו זה של 34 (ההנחה היא כי זה יכול להיות regio - או stereoisomer של 34), כי תרכובות אלו יכולים להיות מופרדים באמצעות כרומטוגרפיה הסתננות ג'ל (GPC), המפריד בין תרכובות בעל משקל מולקולרי שונה. יתר על כן, התערובת הראה משמרות כימי דומה בספקטרום F NMR 19(164.0 ו 165.2 ppm). Deprotection של גליקוזילציה המוצר β -28 באמצעות מתילאמין נתן β -35 (62%) (איור 2).

תערובת התגובה 36 מקריסטלים של 10 ו 11 c לפי שלב 3 של הפרוטוקול (איור 3) נצפתה על ידי 1H, 11ב' ו- 19ספקטרוסקופיה F NMR כדי לחקור את היווצרות אסתר boronic ביניים 37 (איור 4). תערובת התגובה 38 הוכנה גם מ- 11 c להשוואה. התוצאות של ספקטרום H NMR 1עולה כי האות של 2-3'-הידרוקסיל פרוטונים נעלם, ואת זה של פרוטונים 2' ו- 3' באופן דרמטי העביר להתקפה בנוכחות 11 c (דמויות 4A , 4B). ב ספקטרום B NMR 11, הנחנו את הפסגות של אסתר boronic 37, 11 c ו/או boroxine 40 (שהוא trimer מחזורית שנוצר על ידי עיבוי התייבשות של שלוש חומצות boronic), ופירידין boroxine מורכבים 39 (שהוא מבנה המוצע בהתבסס על הנתונים ספקטרה המדווחת של מתחמי פירידין boroxine) נצפו ב 32 עמודים לדקה, 28 ppm, ו 21 עמודים לדקה, בהתאמה (דמויות 4C - 4E)67,68, 69. ב 19ספקטרום F NMR, שיערנו כי הפסגות של 37, 11 c ו/או 40ו- 39 שיתאימו-63.3 ppm,-63.2 ppm ו--62.8 ppm, בהתאמה (דמויות 4F - 4 H).

Figure 1
איור 1 : עבודה קודמת ועבודה זו. (א) לוח זה מציג את O- גליקוזילציה של 2 ′-deoxyribonucleoside עם thioglycoside קידום על ידי p- toluenesulfenyl כלוריד (p- TolSCl) כסף triflate (AgOTf). (B) לוח זה מראה את regioselective O- גליקוזילציה של ribonucleoside לא מוגן ניצול של אסתר boronic מחזורית כקבוצה שיגן על זמני. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 : Deprotection של β-28- המחשוף של קבוצות בנזואיל נערך עם מתילאמין (MeNH2) להרשות לעצמו β -35. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3 : הכנת תערובות התגובה 36 ו-38. תערובות 36 ו -38 הוכנו מ- uridine 10 ו- 4-(trifluoromethyl) phenylboronic חומצה 11 c מ ג 11, בהתאמה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4: מחקר NMR של אסתר boronic המחזורי ביניים 37 מקריסטלים של חומצה phenylboronic uridine 10 ו- 4-(trifluoromethyl) 11 c על ידי 1H, 11B, ו- 19F NMR מידות acetonitrile -d3 25 ° c. 37, 39 , 40 היו מבנים המוצע, ראה איור 3. (א) לוח זה מראה 10 שנצפה על ידי 1H NMR. (B) לוח זה מציג תערובת 36 שנצפה על ידי 1H NMR. (ג) לוח זה מראה 11 c שנצפה על ידי 11B NMR. (ד) לוח זה מציג תערובת 38 שנצפה על ידי 11B NMR. (E) לוח זה מציג תערובת 36 שנצפה על ידי 11B NMR. (F) לוח זה מראה 11 c 19F NMR (פירושונים). (G) לוח זה מציג תערובת 38 שנצפה על ידי 19F NMR. (H) לוח זה מציג תערובת 36 19F NMR (פירושונים). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure of Table 1

כניסה Boronic חומצה b תמיסה # הממס תנאי התשואה (עבור 3 שלבים) c
1 - MeCN −20 ° C, 1.5 h < 16% (תערובת מורכבת)
2 a,d PhB(OH)2 (11 א) MeCN −20 ° C, 1.5 h 41% (Α/Β = 1.6/1)
3 a,e 11 א MeCN −20 ° C, 1.5 h 45% (Α/Β = 1.6/1)
4 a,e 4-MeOC6H4B(OH)2 (11b) MeCN −20 ° C, 1.5 h 39% (Α/Β = 1.8/1)
5 a,e 4-CF3ג'6H4B(OH)2 (ג 11) MeCN −20 ° C, 1.5 h 51% (Α/Β = 1.8/1)
6 a,e 2, 4-F2C6H4B(OH)2 (11 ד') MeCN −20 ° C, 1.5 h 46% (Α/Β = 1.8/1)
7 a,e 4. לא2C6H4B(OH)2 (11e) MeCN −20 ° C, 1.5 h 24% (Α/Β = 1.6/1)
8 a,e 4-CH3(CH2)5C6H4B(OH)2 (11f) EtCN −40 ° C, 1.5 h 30% (Α/Β = 1.6/1)
9 a,e חומצה Cyclopentylboronic (11 גרם) MeCN −20 ° C, 1.5 h 8% (Α/Β = 1.7/1)
10 a,e 11c 1, 4-dioxane ר. ט., 1.5 h 27% (Α/Β = 3.3/1)
11 a,e 11c CH2Cl2 −40 ° C, 1.5 h מעקב
12 a,e 11c EtCN −40 ° C, 1.5 h 61% (Α/Β = 1.6/1)
13 e, f 11c EtCN −40 ° C, 1.5 h 57% (Α/Β = 1.5/1)

טבלה 1. תנאי ריאקציה עבור regioselective O- גליקוזילציה של uridine 10 thiomannoside α-9- Glycosylations בוצעו באמצעות 1.5 במקבילות של α -9, 3.0 במקבילות של p- toluenesulfenyl כלוריד, ושווי 6.0 של כסף triflate נגד 10. המוצרים וכתוצאה מכך היו acetylated במקבילות ca. 10 של אצטי (Ac2O) בנוכחות כמות קטליטי של N,N-דימתיל-4-aminopyridine (DMAP). b חומצה Boronic 11 היה 1.5 מקבילות נגד 10. ג היחס α/β של α/β-12 נבדקה על-ידי 1H NMR. d תערובת של 10 ו- 11 א היה שותף התאדו ועם פירידין 1, 4-dioxane ונסערת ואז ב- 1, 4-dioxane בטמפרטורה שלה ריפלוקס, ואחריו התוספת של פתרון של α -9 ב acetonitrile לנהל גליקוזילציה. e תערובת של α -9, 10ו- 11 היה שותף התאדו ועם פירידין 1, 4-dioxane ונסערת ואז ב- 1, 4-dioxane בטמפרטורה ריפלוקס שלה ואחריו טיפול עם p- toluenesulfenyl כלוריד, כסף triflate. f לתגובה גליקוזילציה נערך באמצעות 1.5 במקבילות של α -9, 1.8 במקבילות של p- toluenesulfenyl כלוריד, ושווי 3.6 כסף triflate נגד 10. המוצרים וכתוצאה מכך היו acetylated במקבילות ca. 10 של אנהידריד אצטי בנוכחות כמות קטליטי של N,N-דימתיל-4-aminopyridine. Ac = אצטיל, בסון = בנזיל, Ph = phenyl.

Figure of Table 2

כניסה מקבל המוצר התשואה (עבור 2 צעדים)
1 13 (הבסיסים החנקניים המרכיבים = אייד) Β -22 42%
2 14 (הבסיסים החנקניים המרכיבים = איידBz) Β -23 30%
3 15 (הבסיסים החנקניים המרכיבים = גואה) Β -24 12%
4 16 (הבסיסים החנקניים המרכיבים = גואהאניBu) Β -25 44%
5 10 (הבסיסים החנקניים המרכיבים = ההחלטיים) Β -26 42% (ca-15%: הבסיסים החנקניים המרכיבים = 5-STol-עורה)
6 17 (הבסיסים החנקניים המרכיבים = מלכותך) Β -27 53%
7 18 (הבסיסים החנקניים המרכיבים = 5-FUra) Β -28 61%
8 19 (הבסיסים החנקניים המרכיבים = Cyt) Β -29 55%
9 20 (הבסיסים החנקניים המרכיבים = CytBz) Β -30 40%

בטבלה 2. O -Glycosylations של נוקלאוזידים 10 ו 13-20 עם thiogalactoside β-21 לסינתזה של דו-סוכר נוקלאוזידים β-22-β-30. Glycosylations בוצעו באמצעות 1.5 במקבילות של β -21, המקבילים 1.5 4 - חומצה phenylboronic (trifluoromethyl) ג 11, 3.0 במקבילות של p- toluenesulfenyl כלוריד, ושווי 6.0 של כסף triflate נגד מקבל (10 ו- 13 - 20). תערובת של β -21, מקבל (10 ו- 13 - 20) ו- 11 c היה שותף התאדו ועם פירידין 1, 4-dioxane ונסערת ואז ב- 1, 4-dioxane בטמפרטורה ריפלוקס שלה ואחריו טיפול עם p - toluenesulfenyl כלוריד וכסף triflate. Bz = בנזואיל, אניBu = isobutyryl, Tol = tolyl, איד = אדנין, גואה = גואנין, עורה = אורציל, מלכותך = תימין, 5-FUra = 5-fluorouracil, Cyt = ציטוזין.

Figure of Table 3

כניסה התורם המוצר התשואה (עבור 2 צעדים)
1 Β -31 (Glc) Β -33 54%
2 b Β -21 (גל) Β -28 61%
3 Α -32 (אדם) Α -34 < 39% (תערובת)

טבלה 3- O -Glycosylations של glycosyl תורמים β-21, β-31, וα-32 עם 5-fluorouridine 18 לסינתזה של דו-סוכר נוקלאוזידים β-28, β-33, וα-34. Glycosylations בוצעו באמצעות מקבילות 1.5 תורם (β -21, β -31, או α -32), 1.5 מקבילות 4-(trifluoromethyl) phenylboronic חומצה 11 c, 3.0 במקבילות של p- toluenesulfenyl כלוריד, ושווי 6.0 של כסף triflate נגד 18. תערובת של התורם (β -21, β -31או α -32), 18ו- 11 c היה שותף התאדו ועם פירידין 1, 4-dioxane ונסערת ואז ב- 1, 4-dioxane בטמפרטורה ריפלוקס שלה ואחריו טיפול עם p - toluenesulfenyl כלוריד וכסף triflate. b זה אותה תוצאה כמו כניסה 7 המובאים בטבלה 2. Glc = אסיאתית, גל = galactoside, גבר = mannoside, 5-FUrd = 5-fluorouridine.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

מטרתו של כתב יד זה היא להציג שיטה סינתטית נוח להכין נוקלאוזידים דו-סוכר באמצעות ribonucleosides לא מוגן בלי מניפולציות קבוצה מגן מייגע. אנחנו מדווחים בזאת על regioselective O- glycosylations של נוקלאוזידים via זמני 2', 3'-diol הגנה על ידי אסתר boronic מחזורית (איור 1B)51.

הכנת אסתר boronic המחזורי ביניים הוא אחד הצעדים החשובים. ממיסים נטול מים אמור לשמש עבור אידוי שיתוף של תערובת התגובה (שלבים 1.1.1.2 ו- 1.2.1.1.2 של הפרוטוקול), השלב esterification (שלבים 1.1.1.3 ו- 1.2.1.1.3) כי אולי האסטרים boronic המוכן nucleoside וחומצה boronic להיות הידרוליזה בקלות. התגובות - גליקוזילציה Oגם לדרוש תנאים נטול מים כדי למנוע את הידרוליזה של התורמים glycosyl. לכן, את הנפות מולקולרית (שלבים 1.1.2 ו 1.2.1.2) את הבקבוקון למטה בסיבוב שני-צוואר, ממיסים את נטול מים (שלבים 1.1.3.1 ו- 1.2.1.3.1) צריך להיות מספיק יבשים לפני השימוש שלהם עבור O- גליקוזילציה.

יש לאחסן את toluenesulfenyl p -כלוריד-המוכנים לפי שלנו הקודם נייר38 - בחושך ב-20 ° C, כדי לשמש בתוך 3 חודשים. אם הכסף triflate רטוב, זה צריך להיות יבשים , vacuo לפני השימוש בו עבור O- גליקוזילציה.

בשיטה זו יכול להיות מיושם שונים נוקלאוזידים, תורמים glycosyl (טבלה 1, 2ו- 3). הסינתזה בקנה מידה גדול של β -28 במידה רבה הצליח, למעט כמה דוגמאות כגון השילוב של α -32 ו- 18 (טבלה 3, כניסה 3), שבו בידודו של nucleoside הרצוי דו-סוכר אינה קלה. בנוסף, שיטה זו מוחלת על הקמת 1", 5'-glicosidic הצמדה של דו-סוכר נוקלאוזידים (הקמת 1", 2'- ו 1 ", הצמדה 3'-glicosidic עדיין שילמדו).

O- גליקוזילציה ניצול נוקלאוזידים ללא הגנה מספקת נוקלאוזידים דו-סוכר בתהליך קצר יותר מאשר שיטות קודמות באמצעות נוקלאוזידים מוגן.

O- גליקוזילציה של הגנה נוקלאוזידים ניצול הגנה זמנית של אסתר boronic מחזורית יכול לחול על הכנת שונות ביולוגית-פעיל דו-סוכר נוקלאוזידים, תחליפי שלהם. במיוחד, β -35 ו שלה תחליפי צפויים להיות המועמדים סמים חדשים מאז זה כבר ידוע כי 5-fluorouridine 5-fluorouracil יש פעילויות נגד סרטן, אנטי וירוס, אנטי-בקטריאלי24,59, 70,71,72,73,74,75,76. אנו גם מאמינים כי היישום של הגנה זמנית של קבוצות הידרוקסיל מאת אסתר boronic יהיה שימושי לסינתזה של מגוון רחב של תרכובות ומלאכותי, וכן נוקלאוזידים דו-סוכר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

מחקר זה מומן ע grants-in-aid של משרד החינוך, תרבות, ספורט, מדע, טכנולוגיה (MEXT) יפן (מס 15K 00408, 24659011, 24640156, 245900425 ו- 22390005 עבור אאוקי שין), על ידי מענק של המחקר הביוכימי טוקיו קרן, טוקיו, יפן, ועל -ידי הקרן טאס (אוניברסיטת טוקיו של מדע) שטחי מחקר אסטרטגי. ברצוננו להודות נוריקו Sawabe (בפקולטה של מדעי הרוקחות, טוקיו האוניברסיטה למדעים) המידות של ספקטרום NMR, אורי האסוואגה (הפקולטה למדעי התרופות, טוקיו האוניברסיטה למדעים) בשביל המדידות של מסה ספקטרה, מצואו של טומוקו (מכון מחקר מדעי וטכנולוגי, אוניברסיטת טוקיו של המדע) עבור המידות של מנתח היסודות.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Silver trifluoromethanesulfonate Nacalai Tesque 34945-61
Phenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry B0857
p-Methoxyphenylboronic acid Wako Pure Chemical Industries 321-69201
4-(Trifluoromethyl)phenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry T1788
2,4-Difluorophenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry D3391
Cyclopentylboronic acid (contains varying amounts of Anhydride) Tokyo Chemical Industry C2442
4-Nitrophenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry N0812
4-Hexylphenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry H1489
Adenosine Merck KGaA 862.
Guanosine Acros Organics 411130050
Cytidine Tokyo Chemical Industry C0522
Uridine Tokyo Chemical Industry U0020
5-Fluorouridine Tokyo Chemical Industry F0636
5-Methyluridine Sigma M-9885
Methylamine (40% in Methanol, ca. 9.8mol/L) Tokyo Chemical Industry M1016
N,N-dimethyl-4-aminopyridine Wako Pure Chemical Industries 044-19211
Acetic anhydride Nacalai Tesque 00226-15
Pyridine, Dehydrated Wako Pure Chemical Industries 161-18453
Acetonitrile Kanto Chemical 01031-96
1,4-Dioxane Nacalai Tesque 13622-73
Dichloromethane Wako Pure Chemical Industries 130-02457
Propionitrile Wako Pure Chemical Industries 164-04756
Molecular sieves 4A powder Nacalai Tesque 04168-65
Molecular sieves 3A powder Nacalai Tesque 04176-55
Celite 545RVS Nacalai Tesque 08034-85
Acetonitrile-D3 (D,99.8%) Cambridge Isotope Laboratories DLM-21-10
Trifluoroacetic acid Nacalai Tesque 34831-25
TLC Silica gel 60 F254 Merck KGaA 1.05715.0001
Chromatorex Fuji Silysia Chemical FL100D
Sodium hydrogen carbonate Wako Pure Chemical Industries 191-01305
Hydrochloric acid Wako Pure Chemical Industries 080-01061
Sodium sulfate Nacalai Tesque 31915-96
Chloroform Kanto Chemical 07278-81
Sodium chloride Wako Pure Chemical Industries 194-01677
Methanol Nacalai Tesque 21914-74
JEOL Always 300 JEOL Measurement of NMR
Lamda 400 JEOL Measurement of NMR
PerkinElmer Spectrum 100 FT-IR Spectrometer Perkin Elmer Measurement of IR
JEOL JMS-700 JEOL Measurement of MS
PerkinElmer CHN 2400 analyzer Perkin Elmer Measurement of elemental analysis
JASCO P-1030 digital polarimeter JASCO Measurement of optical rotation
JASCO PU-2089 Plus intelligent HPLC pump JASCO For HPLC
Jasco UV-2075 Plus Intelligent UV/Vis Detector JASCO For HPLC
Rheodyne Model 7125 Injector Sigma-Aldrich 58826 For HPLC
Chromatopac C-R8A Shimadzu For HPLC
Senshu Pak Pegasil ODS Senshu Scientific For HPLC
p-Toluenesulfenyl chloride Prepared  Ref. 38
Phenyl 6-O-acetyl-2,3,4-tri-O-benzyl-1-thio-a-D-mannopyranoside (a-9) Prepared  Ref. 52
4-Metylphenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-b-D-galactopyranoside (b-21) Prepared  Ref. 53
4-Metylphenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-b-D-glucopyranoside (b-31) Prepared  Ref. 57
4-Metylphenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-a-D-Mannopyranoside (a-32) Prepared  Ref. 67
6-N-Benzoyladenosine (14) Prepared  Ref. 54
2-N-Isobutyrylguanosine (16) Prepared  Ref. 55
4-N-Benzoylcytidine (20) Prepared  Ref. 56

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kobayashi, J., Doi, Y., Ishibashi, M. Shimofuridin A, a nucleoside derivative embracing an acylfucopyranoside unit isolated from the okinawan marine tunicate Aplidium multiplicatum. The Journal of Organic Chemistry. 59, 255-257 (1994).
  2. Takahashi, M., Tanzawa, K., Takahashi, S. Adenophostins, newly discovered metabolites of penicillium brevicompactum, act as potent agonists of the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor. The Journal of Biological Chemistry. 269, 369-372 (1994).
  3. Haneda, K. Cytosaminomycins, new anticoccidial agents produced by Strevtomvces sp. KO-8119 I. taxonomy, production, isolation and physico-chemical and biological properties. The Journal of Antibiotics. 47, 774-781 (1994).
  4. Shiomi, K., Haneda, K., Tomoda, H., Iwai, Y., Omura, S. Cytosaminomycins, new anticoccidial agents produced by Streptomyces sp. KO-8119 II. structure elucidation of cytosaminomycins A, B, C and D. The Journal of Antibiotics. 47, 782-786 (1994).
  5. Knapp, S. Synthesis of complex nucleoside antibiotics. Chemical Reviews. 95, 1859-1876 (1995).
  6. Efimtseva, E. V., Kulikova, I. V., Mikhailov, S. N. Disaccharide nucleosides as an important group of natural compounds. Journal of Molecular Biology. 43, 301-312 (2009).
  7. Huang, R. M., et al. Marine nucleosides: Structure, bioactivity, synthesis and biosynthesis. Marine Drugs. 12, 5817-5838 (2014).
  8. Efimtseva, E. V., Mikhailov, S. N. Disaccharide nucleosides and oligonucleotides on their basis. New tools for the study of enzymes of nucleic acid metabolism. Biochemistry (Moscow). 67, 1136-1144 (2002).
  9. Mikhailov, S. N., Efimtseva, E. V. Disaccharide nucleosides. Russian Chemical Reviews. 73, 401-414 (2004).
  10. Kimura, K., Bugg, T. D. H. Recent advances in antimicrobial nucleoside antibiotics targeting cell wall biosynthesis. Natural Product Reports. 20, 252-273 (2003).
  11. Winn, M., Goss, R. J. M., Kimura, K., Bugg, T. D. H. Antimicrobial nucleoside antibiotics targeting cell wall assembly: Recent advances in structure-function studies and nucleoside biosynthesis. Natural Product Reports. 27, 279-304 (2010).
  12. Takahashi, M., Kagasaki, T., Hosoya, T., Takahashi, S. Adenophostins A and B: Potent agonists of inositol-1,4,5-trisphosphate receptor produced by Penicillium brevicompactum. Taxonomy, fermentation, isolation, physico-chemical and biological properties. The Journal of Antibiotics. 46, 1643-1647 (1993).
  13. Takahashi, S., Kinoshita, T., Takahashi, M. Adenophostins A and B: Potent agonists of inositol-1,4,5-trisphosphate receptor produced by penicillium brevicompactum. Structure elucidation. The Journal of Antibiotics. 47, 95-100 (1994).
  14. Hotoda, H., Takahashi, M., Tanzawa, K., Takahashi, S., Kaneko, M. IP3 receptor-ligand. 1: Synthesis of adenophostin A. Tetrahedron Letters. 36, 5037-5040 (1995).
  15. Hirota, J., et al. Adenophostin-medicated quantal Ca2+ release in the purified and reconstituted inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 1. FEBS Letters. 368, 248-252 (1995).
  16. McCormick, J., et al. Structure and total synthesis of HF-7, a neuroactive glyconucleoside disulfate from the funnel-web spider Hololena curta. Journal of the American Chemical Society. 121, 5661-5665 (1999).
  17. Bu, Y. Y., Yamazaki, H., Ukai, K., Namikoshi, M. Anti-mycobacterial nucleoside antibiotics from a marine-derived Streptomyces sp. TPU1236A. Marine Drugs. 12, 6102-6112 (2014).
  18. Knapp, S., Gore, V. K. Synthesis of the ezomycin nucleoside disaccharide. Organic Letters. 2, 1391-1393 (2000).
  19. Behr, J. B., Gourlain, T., Helimi, A., Guillerm, G. Design, synthesis and biological evaluation of hetaryl-nucleoside derivatives as inhibitors of chitin synthase. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 13, 1713-1716 (2003).
  20. Binder, W. H., Kӓhlig, H., Schmid, W. Galactosylation by use of β-galactosidase: Enzymatic syntheses of disaccharide nucleosides. Tetrahedron: Asymmetry. 6, 1703-1710 (1995).
  21. Ye, M., Yan, L. -Q., Li, N., Zong, M. -H. Facile and regioselective enzymatic 5-galactosylation of pyrimidine 2-deoxynucleosides catalyzed by β-glycosidase from bovine liver. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 79, 35-40 (2012).
  22. Niedballa, U., Vorbrüggen, H. A general synthesis of N-glycosides. III. Simple synthesis of pyrimidine disaccharide nucleosides. The Journal of Organic Chemistry. 39, 3664-3667 (1974).
  23. Abe, H., Shuto, S., Matsuda, A. Synthesis of the C-glycosidic analog of adenophostin A, a potent IP3 receptor agonist, using a temporary silicon-tethered radical coupling reaction as the key step. Tetrahedron Letters. 41, 2391-2394 (2000).
  24. Watanabe, K. A., et al. Nucleosides. 114. 5'-O-Glucuronides of 5-fluorouridine and 5-fluorocytidine. Masked precursors of anticancer nucleosides. Journal of Medicinal Chemistry. 24, 893-897 (1981).
  25. Khan, S. H., O'Neill, R. A. Modern Methods in Carbohydrate Synthesis. Harwood Academic Publishers. Amsterdam, The Netherlands. (1996).
  26. Lindhorst, T. K. Essentials ofCarbohydrate Chemistry and Biochemistry. Wiley-VCH Verlag Gmb-H & Co. KGaA. Weinheim, Germany. (2007).
  27. Demchenko, A. V. Handbook of Chemical Glycosylation. Wiley-VCH Verlag Gmb-H & Co. KGaA. Weinheim, Germany. (2008).
  28. Chen, X., Halcomb, R. L., Wang, P. G. Chemical Glycobiology (ACS Symposium Series 990). American Chemical Society. American Chemical Society. Washington, WA. (2008).
  29. Toshima, K., Tatsuta, K. Recent progress in O-glycosylation methods and its application to natural products synthesis. Chemical Reviews. 93, 1503-1531 (1993).
  30. Ito, Y. My stroll in the backyard of carbohydrate chemistry. Trends in Glycoscience and Glycotechnology. 22, 119-140 (2010).
  31. Yasomanee, J. P., Demchenko, A. V. From stereocontrolled glycosylation to expeditious oligosaccharide synthesis. Trends in Glycoscience and Glycotechnology. 25, 13-41 (2013).
  32. Nakamura, M., Fujita, S., Ogura, H. Synthesis of disaccharide nucleoside derivatives of 3-deoxy-ᴅ-glycero-ᴅ-galacto-2-nonulosonic acid (KDN). Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 41, 21-25 (1993).
  33. Mikhailov, S. N., et al. Studies on disaccharide nucleoside synthesis. Mechanism of the formation of trisaccharide purine nucleosides. Nucleosides & Nucleotides. 18, 691-692 (1999).
  34. Lichtenthaler, F. W., Sanemitsu, Y., Nohara, T. Synthesis of 5'-O-glycosyl-ribo-nucleosides. Angewandte Chemie International Edition. 17, 772-774 (1978).
  35. Knapp, S., Gore, V. K. Synthesis of the shimofuridin nucleoside disaccharide. The Journal of Organic Chemistry. 61, 6744-6747 (1996).
  36. Zhang, Y., Knapp, S. Glycosylation of nucleosides. The Journal of Organic Chemistry. 81, 2228-2242 (2016).
  37. Xing, L., Niu, Q., Li, C. Practical glucosylations and mannosylations using anomeric benzoyloxy as a leaving group activated by sulfonium ion. ACS Omega. 2, 3698-3709 (2017).
  38. Aoki, S., et al. Synthesis of disaccharide nucleosides by the O-glycosylation of natural nucleosides with thioglycoside donors. Chemistry - An Asian Journal. 10, 740-751 (2015).
  39. Duggan, P. J., Tyndall, E. M. Boron acids as protective agents and catalysts in synthesis. Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1. 1325-1339 (2002).
  40. Method for preparation of 2'-O-alkylribonucleosides by regioselective alkylation of 2',3'-O-(arylboronylidene) ribonucleosides. JPN. Patent. Yamada, K., Hayakawa, H., Wada, T. 5, JP 2009/256335A (2009).
  41. Lee, D., Taylor, M. S. Borinic acid-catalyzed regioselective acylation of carbohydrate derivatives. Journal of the American Chemical Society. 133, 3724-3727 (2011).
  42. Gouliaras, C., Lee, D., Chan, L., Taylor, M. S. Regioselective activation of glycosyl acceptors by a diarylborinic acid-derived catalyst. Journal of the American Chemical Society. 133, 13926-13929 (2011).
  43. Satoh, H., Manabe, S. Design of chemical glycosyl donors: Does changing ring conformation influence selectivity/reactivity. Chemical Society Reviews. 42, 4297-4309 (2013).
  44. Liu, X., et al. 1,2-trans-1-Dihydroxyboryl benzyl S-glycoside as glycosyl donor. Carbohydrate Research. 398, 45-49 (2014).
  45. Kaji, E., et al. Thermodynamically controlled regioselective glycosylation of fully unprotected sugars through bis(boronate) intermediates. European Journal of Organic Chemistry. 3536-3539 (2014).
  46. Nakagawa, A., Tanaka, M., Hanamura, S., Takahashi, D., Toshima, K. Regioselective and 1,2-cis-α-stereoselective glycosylation utilizing glycosyl-acceptor-derived boronic ester catalyst. Angewandte Chemie International Edition. 127, 11085-11089 (2015).
  47. Tanaka, M., Nashida, J., Takahashi, D., Toshima, K. Glycosyl-acceptor-derived borinic ester-promoted direct and β-stereoselective mannosylation with a 1,2-anhydromannose donor. Organic Letters. 18, 2288-2291 (2016).
  48. Nishi, N., Nashida, J., Kaji, E., Takahashi, D., Toshima, K. Regio- and stereoselective β-mannosylation using a boronic acid catalyst and its application in the synthesis of a tetrasaccharide repeating unit of lipopolysaccharide derived from E. Coli O75. Chemical Communications. 53, 3018-3021 (2017).
  49. Mancini, R. S., Leea, J. B., Taylor, M. S. Boronic esters as protective groups in carbohydrate chemistry: Processes for acylation, silylation and alkylation of glycoside-derived boronates. Organic & Biomolecular Chemistry. 15, 132-143 (2017).
  50. Mancini, R. S., Lee, J. B., Taylor, M. S. Sequential functionalizations of carbohydrates enabled by boronic esters as switchable protective/activating groups. The Journal of Organic Chemistry. 82, 8777-8791 (2017).
  51. Someya, H., Itoh, T., Aoki, S. Synthesis of disaccharide nucleosides utilizing the temporary protection of the 2',3'-cis-diol of ribonucleosides by a boronic ester. Molecules. 22, 1650 (2017).
  52. Lemanski, G., Ziegler, T. Synthesis of 4-O-ᴅ-mannopyranosyl-α-ᴅ-glucopyranosides by intramolecular glycosylation of 6-O-tethered mannosyl donors. Tetrahedron. 56, 563-579 (2000).
  53. Liu, G., Zhang, X., Xing, G. A general method for N-glycosylation of nucleobases promoted by (p-Tol)2SO/Tf2O with thioglycoside as donor. Chemical Communications. 51, 12803-12806 (2015).
  54. Zhu, X. -F., Williams, H. J., Scott, A. I. An improved transient method for the synthesis of N-benzoylated nucleosides. Synthetic Communications. 33, 1233-1243 (2003).
  55. Eisenführ, A., et al. A ribozyme with michaelase activity: Synthesis of the substrate precursors. Bioorganic & Medicinal Chemistry. 11, 235-249 (2003).
  56. Samuels, E. R., McNary, J., Aguilar, M., Awad, A. M. Effective synthesis of 3'-deoxy-3'-azido nucleosides for antiviral and antisense ribonucleic guanidine (RNG) applications. Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids. 32, 109-123 (2013).
  57. France, R. R., Rees, N. V., Wadhawan, J. D., Fairbanks, A. J., Compton, R. G. Selective activation of glycosyl donors utilising electrochemical techniques: a study of the thermodynamic oxidation potentials of a range of chalcoglycosides. Organic & Biomolecular Chemistry. 2, 2188-2194 (2004).
  58. Wunderlich, C. H., et al. Synthesis of (6-13C)pyrimidine nucleotides as spin-labels for RNA dynamics. Journal of the American Chemical Society. 134, 7558-7569 (2012).
  59. Abraham, R. C., et al. Conjugates of COL-1 monoclonal antibody and β-ᴅ-galactosidase can specifically kill tumor cells by generation of 5-fluorouridine from the prodrug β-ᴅ-galactosyl-5-fluorouridine. Cellular Biophysics. 24, 127-133 (1994).
  60. Huang, X., Huang, L., Wang, H., Ye, X. -S. Iterative one-pot synthesis of oligosaccharides. Angewandte Chemie International Edition. 43, 5221-5224 (2004).
  61. Verma, V. P., Wang, C. -C. Highly stereoselective glycosyl-chloride-mediated synthesis of 2-deoxyglucosides. Chemistry - A European Journal. 19, 846-851 (2013).
  62. Martínez-Aguirre, M. A., Villamil-Ramos, R., Guerrero-Alvarez, J. A., Yatsimirsky, A. K. Substituent effects and pH profiles for stability constants of arylboronic acid diol esters. The Journal of Organic Chemistry. 78, 4674-4684 (2013).
  63. Wulff, G., Röhle, G. Results and problems of O-glycoside synthesis. Angewandte Chemie International Edition. 13, 157-170 (1974).
  64. Demchenko, A., Stauch, T., Boons, G. -J. Solvent and other effects on the stereoselectivity of thioglycoside glycosidations. Synlett. 818-820 (1997).
  65. Welch, C. J., Bazin, H., Heikkilä, J., Chattopadhyaya, J. Synthesis of C-5 and N-3 arenesulfenyl uridines. Preparation and properties of a new class of uracil protecting group. Acta Chemica Scandinavica. 39, 203-212 (1985).
  66. Tam, P. -H., Lowary, T. L. Synthesis of deoxy and methoxy analogs of octyl α-ᴅ-mannopyranosyl-(1→6)-α-ᴅ-mannopyranoside as probes for mycobacterial lipoarabinomannan biosynthesis. Carbohydrate Research. 342, 1741-1772 (2007).
  67. Yalpani, M., Boeseb, R. The structure of amine adducts of triorganylboroxines. Chemische Berichte. 116, 3347-3358 (1983).
  68. McKinley, N. F., O'Shea, D. F. Efficient synthesis of aryl vinyl ethers exploiting 2,4,6-trivinylcyclotriboroxane as a vinylboronic acid equivalent. The Journal of Organic Chemistry. 69, 5087-5092 (2004).
  69. Iovine, P. M., Fletcher, M. N., Lin, S. Condensation of arylboroxine structures on Lewis basic copolymers as a noncovalent strategy toward polymer functionalization. Macromolecules. 39, 6324-6326 (2006).
  70. Chen, T. -B., Huzak, M., Macura, S., Vuk-Pavlović, S. Somatostatin analogue octreotide modulates metabolism and effects of 5-fluorouracil and 5-fluorouridine in human colon cancer spheroids. Cancer Letters. 86, 41-51 (1994).
  71. Agudo, R., et al. Molecular characterization of a dual inhibitory and mutagenic activity of 5-fluorouridine triphosphate on viral RNA synthesis. Implications for lethal mutagenesis. Journal of Molecular Biology. 382, 652-666 (2008).
  72. Kirienko, D. R., Revtovich, A. V., Kirienko, N. V. A high-content, phenotypic screen identifies fluorouridine as an inhibitor of pyoverdine biosynthesis and Pseudomonas aeruginosa virulence. mSphere. 1, 00217 (2016).
  73. Wu, Q., Xia, A., Lin, X. Synthesis of monosaccharide derivatives and polymeric prodrugs of 5-fluorouridine via two-step enzymatic or chemo-enzymatic highly regioselective strategy. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 54, 76-82 (2008).
  74. Brusa, P., et al. In vitro and in vivo antitumor activity of immunoconjugates prepared by linking 5-fluorouridine to antiadenocarcinoma monoclonal antibody. Il Farmaco. 52, 71-81 (1997).
  75. Ozaki, S., et al. 5-Fluorouracil derivatives XX.: Synthesis and antitumor activity of 5'-O.-unsaturated acyl-5-fluorouridines. Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 38, 3164-3166 (1990).
  76. Martino, M. M., Jolimaitre, P., Martino, R. The prodrugs of 5-fluorouracil. Current Medicinal Chemistry. Anti-Cancer Agents. 2, 267-310 (2002).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics