Normothermic Ex Situ hjertet perfusjon i arbeider modus: vurdering av hjertefunksjon og metabolisme

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Normothermic ex situ hjertet perfusjon (ESHP), beholder hjertet i slagene, semi fysiologiske tilstand. Når utført i en arbeidsmodus, gir ESHP muligheten til å utføre avanserte vurderinger av donor hjerte funksjon og orgel levedyktighet. Her beskriver vi vår metode for hjerteinfarkt ytelse evaluering under ESHP.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Hatami, S., White, C. W., Ondrus, M., Qi, X., Buchko, M., Himmat, S., Lin, L., Cameron, K., Nobes, D., Chung, H. J., Nagendran, J., Freed, D. H. Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism. J. Vis. Exp. (143), e58430, doi:10.3791/58430 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Gjeldende standardmetoden for orgel bevaring (kald oppbevaring, CS), viser hjertet å løpet av kalde ischemia som begrenser tiden som trygt bevaring og øker risikoen for uønskede etter transplantasjon resultater. Statisk natur cs tillater dessuten ikke for orgel bedømmelse eller intervensjon under bevaring intervall. Normothermic ex situ hjertet perfusjon (ESHP) er en ny metode for bevaring av donert hjertet som minimerer kaldt iskemi ved å gi oksygenrikt, næringsrike perfusate til hjertet. ESHP har vist seg å være ikke dårligere enn til CS i bevaring av standard-kriterier donor hjerter og har også bidratt klinisk transplantasjon av hjerter donert etter sirkulasjons fastsettelse av død. Foreløpig perfuses kun tilgjengelig klinisk ESHP enheten hjertet i losset, ikke-fungerende tilstand, begrense vurderinger av hjerteinfarkt. Derimot gir ESHP i arbeidsmodus mulighet for omfattende evaluering av cardiac ytelse ved vurdering av funksjonelle og metabolske parametere under fysiologiske forhold. Videre har tidligere eksperimentelle studier antydet at ESHP i arbeidsmodus kan resultere i bedre funksjonell bevaring. Her beskriver vi protokollen for ex situ perfusjon hjertet i et stort pattedyr (svin) modell, som er reproduserbar for ulike dyr modeller og hjertet størrelser. Programvaren i denne ESHP apparatet gir sanntid og automatisk kontroll av pumpen fart å opprettholde ønsket aorta og venstre atrial trykket og evaluerer en rekke funksjonelle og elektrofysiologiske parametere med minimalt behov for tilsyn/manipulasjon.

Introduction

Klinisk relevans

Mens de fleste aspekter av cardiac transplantasjon har utviklet seg betydelig siden den første hjertetransplantasjon i 1967, fortsatt kald lagring (CS) standarden for donor hjerte bevaring1. CS viser organ for en periode på kalde ischemia som begrenser trygt bevaring intervallet (4-6 timer) og øker risikoen for primære pode dysfunksjon2,3,4. På grunn av statisk natur CS er vurderinger av funksjonen eller terapeutisk intervensjon ikke mulig i tiden mellom orgel innkjøp og transplantasjon. Dette er en bestemt begrensning i utvidet kriterier givere inkludert hjerter donert etter sirkulasjons død (DCD), opprette en hindring for overvinne betydelig gap mellom behov og den gjeldende donor basseng5,6. Å løse denne begrensningen, ex situ hjertet perfusjon er foreslått som ny, semi fysiologiske bevare donert hjerter, minimere eksponering for kalde iskemi ved å gi oksygenert, næringsrike perfusate til hjertet samtidig bevaring 1 , 7 , 8.

Ex situ hjertet perfusjon

En av de mest brukte metodene for ex situ undersøkelse av isolerte hjertet er Langendorff perfusjon. I denne metoden, introdusert av Oskar Langendorff i 1895 blod strømmer inn coronary arteries og ut koronar sinus av isolerte hjertet, med hjertet i et tomt og slo staten9,10. Klinisk ESHP i en Langendorff modus med Transmedics Organ Care System apparatet (OCS) har vist seg å være ikke dårligere enn til CS i bevaring av standard-kriterier donor hjerter1, og har muliggjort klinisk transplantasjon av DCD hjerter 11. men det er bekymringer om muligheten for enheten å evaluere orgelet levedyktighet, som en rekke donor hjerter utgangspunktet tenkt å være transplantable ble forkastet etter perfusjon på OCS3. OCS støtter hjertet i Langendorff (ikke fungerer) modus, og dermed har begrenset kapasitet for evaluering av pumping funksjon av hjertet3,12. En voksende mengde bevis antyder at funksjonelle parametere tilbyr en bedre måte å vurdere orgel levedyktighet, antyder at vurderinger av hjertefunksjon kan bli et pålitelig verktøy for evaluering og utvalg av hjerter for transplantasjon under ESHP3 ,12,13,14, videre våre studier på ex situ perfused svin hjerter foreslår at ESHP i arbeidsmodus gir forbedrede funksjonelle bevaring av hjertet under perfusjon intervallet15,16.

Et ESHP apparat kan bevare hjertet i en arbeidsmodus må inneha en grad av automatisering sikkert og presist opprettholde preload, afterload og strømningshastigheter. Et slikt system bør også ha fleksibilitet til å lette omfattende vurderinger av hjertefunksjon foretas. The ESHP apparatet brukes her er utstyrt med tilpasset programvare som 1) gir og opprettholder ønsket aorta (Ao) og venstre atrial (LA) Trykk/flyt og 2) gir sanntid analyse av funksjonelle parametere og visuell vurdering av press bølgeformer med minimalt behov for tilsyn. Trykket informasjonen er kjøpt med standard væskefylte trykk transduktorer, og strømmen data er kjøpt med transitt-doppler flyten sonder. Disse signalene er digitalisert med en bro og analog inngang, henholdsvis. Hjertet er plassert vannrett med en liten høyde for de store skipene en myk silikon membran. Cannulation vedlegg passerer gjennom membranen, omfatter et samsvar kammer dempende ventrikkel utstøting. Målet med dette arbeidet er å gi forskere i feltet av cardiac transplantasjon med en protokoll for ex situ perfusjon og evaluering av hjertet, under normothermic, semi fysiologiske forhold i arbeidsmodus, i et stort pattedyr (Yorkshire gris) modell.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle prosedyrene i dette manuskriptet ble utført i samsvar med retningslinjene i kanadiske Rådet for dyr omsorg og guide for omsorg og bruk av forsøksdyr. Protokollene ble godkjent av dyr institusjon av University of Alberta. Denne protokollen er utlignet i kvinnelige juvenile Yorkshire griser mellom 35-50 kg. Alle personer involvert i ESHP prosedyrer hadde mottatt riktig biosikkerhet trening.

1. pre-kirurgisk forberedelser

  1. Plasser orgel kammeret ordentlig på apparatet handlevognen og installere silicon støtte membranen inne i orgel kammeret. Ao, lungearterien (PA) og LA koblingspunkt kan ses i figur 1.
  2. Installere ESHP rør nettverk (representert i figur 2AB) oxygenator og filter. Knytte varmeveksler vann linjene og feie gass slangen til oxygenator.
  3. Sted flyten sonder for å måle koronar sinus/PA og LA flyt på tilsvarende slangen.
  4. Koble Ao og LA press måleomformerne representant linjene i kretsen.
  5. Kontroller at alle rør tilkoblinger er godt festet, og alle stopcocks og luer låser er ordentlig lukket på ledige områder.
  6. Prime kretsen med 750 mL endret Krebs-Henseleit buffer (NaCl, 85; KCl, 4.6; NaHCO3, 25; KH2PO, 1,2. MgSO4, 1,2. glukose, 11; og CaCl21,25 mmol/L) som inneholder 8% albumin. De air Ao og LA pumpene ved å plassere pumpen uttaket over mengden slik at luften forlater pumpe kammeret (Figur 3). Løsningen vanligvis trenger ikke å være oxygenized før perfusjonen.
  7. Start programvaren etter Ao og LA pumpene de sendes og kretsen er primet.

2. ESHP programvare initialisering og justeringer

Merk: ESHP apparater her er utstyrt med et egendefinert program å tillate kontroll av pumpen fart for å oppnå og opprettholde ønsket LA og Ao press. Programvaren analyserer funksjonelle parametere også og gir en visuell vurdering av press bølgeformer (Figur 4).

  1. For å starte programmet ESHP, klikker du på snarveien på skjermen.
  2. "Innstilling" siden, klikker du "starte". Initialisering av meldingen vises på bordet (figur 5).
  3. På samme side, null flyt sensorer "null LA flyten" og "null PA flyt". Meldingen vises på bordet.
  4. Juste høyden på press måleomformerne mellom silisium støtte. Til null press måleomformerne, åpne Ao og LA press transdusere (og noen andre transdusere angir du trykket) i atmosfæren, og deretter "null alle presset" knapp. Meldingen vises på bordet.
  5. "Main" siden fortere Ao pumpe gradvis opp til punktet der flyte fra Ao kanyle vises i orgel kammeret. I dagens system oppnås dette med 900-1000 omdreininger per minutt (RPM).
  6. Legge 750 mL blod til perfusate løsningen å bringe totalt perfusate volumet til 1,5 L (som beskrevet i den "kirurgi, høsting blod og hjertet innkjøp" delen) og deretter LA pumpen PRM (800-900 RPM) slik at ingen air forblir i LA kanyle eller LA forbindelsesslangen under silikon støtte membranen.
  7. Etter initialisering kontrollere programvare og de lufting av ESHP apparater, kan donor hjerte innkjøp fortsette.

3. forberedelser og anestesi

  1. Administrere 20 mg/kg av ketamin og 0,05 mg/kg av atropin intramuskulært for premedication.
  2. Overføre grisen på kirurgisk Suite og plassere grisen i drifts tabellen tabletop oppvarming for å opprettholde normothermia.
  3. Sjarmere oksygen infusjonshastigheten for maske induksjon dyr vekt og bedøvende systemet. Oksygen flyten bør være 20-40 mL/kg for lukket sirkel bedøvende kretser.
  4. Slå på isoflurane til 4 – 5%. etter en eller to minutter kan dette reduseres til 3%.
  5. Evaluere dybden av anestesi. Grisen er i kirurgiske flyet hvis det er ingen tilbaketrekning refleks svar på skadelige stimulans.
  6. Etter bekreftelse av aktuelle dybden av anestesi, går du til intubasjon.
  7. Plass puls oksymeter sonde på tungen (foretrukket) eller øret. Oksygenmetning målt ved puls oximetry bør forbli over 90%.
  8. Barbere flekker av hår av på venstre og høyre albue regionene, og venstre kvele. Vaske av hud oljer med såpe og vann, skyll med rubbing alkohol og tørke. Plass ECG kontaktene. Unngå bly wire interferens med kirurgiske området. Koble fører til de riktige stedene.
  9. For å opprettholde anestesi, justere oksygen flyt (20-40 mL/kg) og pustet gass rate (1 – 3%). Hjertefrekvensen skal 80-130 beats/min. pustefrekvens bør være 12-30 åndedrag/min.
  10. Barbering, vask og tas aseptisk forberede snitt området.

4. blod samling og hjertet innkjøp

  1. Evaluere anestesi hver minimum hver 5 min for å bekrefte kirurgisk flyet (ingen pedal refleks og ingen blink refleks, ingen respons på smertefulle stimuli).
  2. Utføre en median sternotomy.
    1. Identifisere jugulum og xiphoid som landemerker.
    2. Med electrocautery, utvikle midtlinjen mellom landemerkene ved subkutan vev og fascia mellom fiber av pectoralis major muskelen.
    3. Merke midtlinjen langs sternal bein med cautery. Utføre sternal osteotomi med en elektrisk eller air-drevet så. For å forhindre skaper fortsetter skader den underliggende strukturen (f.eks pericardium og brachiocephalica og truncus brachiocephalicus), gradvis med så.
    4. Trekke sternum gradvis, bruker en sternal festepunkt. For å unngå overdreven spenninger og vascular skade, ikke plass festepunkt for langt cranially.
    5. Gratis sternopericardial leddbånd fra sternum bruke cautery bakre overflate.
    6. Åpne pericardium med en Metzenbaum saks og fastsette perikard kantene til sternum med 1-0 silke Sutur.
  3. Utvide midtlinjen innsnitt cranially med 2-3 cm og avsløre høyre arteria carotis communis og vena jugularis.
  4. Få proksimale og distale kontroll av fartøyene ved rundt skipene med silke bånd (2-0).
  5. Knytte skallen toroms båndene på hver fartøy.
  6. Åpne den fremre 1/3 hver fartøy med en 11-blad og deretter sette inn en 5-6 F skjede i hver fartøy. Tie caudal toroms slipset rundt hver fartøy å sikre de respektive sheathes.
  7. Overvåke arterielle og sentrale venøs presset ved å koble hver slire til en trykktransduceren.
  8. Levere 1000 U/kg heparin intravenøst.
  9. Plasser en 3-0 polypropylen vesken-streng Sutur rundt en atrial appendage og sikre den med en felle.
  10. Inne det veske-streng suture, oppretter du en 1 cm snitt på appendage med en 11 blad. Sette inn en to-trinns venøs kanyle (28/36 FR) inne i snitt og posisjon distale i IVC. Sikre kanyle ved tieing snare til den venøse kanyle. Kontroll utløpet av kanyle med en slangen klemme.
  11. Fra totrinns venøs kanyle i høyre atrium, samle 750 mL fullblod fra gris gradvis over en periode på 15 min inn en autoklaveres glassbeholder og samtidig erstatte volumet med 1 L en isotonic crystalloid løsning som Plasmalyte A.
  12. Legge til blodet perfusjon krets (som har vært tidligere primet med 750 mL Krebs-Henseleit buffer inneholder 8% albumin) for å nå et endelig antall 1.5 L perfusate. Perfusate er en 1:1 kombinasjon av Krebs-Henseleit med 8% albumin løsning og fullblod fra donor dyr 17.
  13. Plasser en cardioplegia nål (14-16 F) i den stigende Ao og sikre den med en felle.
  14. Koble cardioplegia kanyle til cardioplegia posen og legge til 100 mL blod 400 mL cardioplegia (St. Thomas Hospital løsning) å nå et endelig antall 500 mL blod cardioplegia.
  15. Euthanize grisen av exsanguination. Hvis planlegger å legge mer blod til perfusate etter start av perfusjon (i henhold til målene av studien), samle blod og legge 10-30 U/mL av heparin og lagre den i en glass container eller en plast pose på 4 ° C for kort varighet (timer
  16. Cross-klemme den stigende Ao Ao klemme og levere cardioplegic løsningen til Ao roten.
  17. Etter levering av cardioplegic løsningen er fullført, Fjern kryss-klemmen og utføre cardiectomy.
    1. For enkel vedlegges Ao og PA deres representant kanyle, delvis dissekere den stigende Ao fra PA bruker en Metzenbaum saks.
    2. Mudderbunn opphøyd og vena cava, forlate omtrent 1 cm lengde på hver.
    3. Skille hjertet fra den bakre brysthulen ved transecting pulmonary venene.
    4. Avgiftsdirektoratet hjertet sikre alle Ao arch fartøy er anskaffet sammen med et segment av synkende Ao. Bevare opp PA bifurkasjonen.
  18. Veie tom hjertet. Mengden av vektøkning over ex situ bevaring intervallet kan brukes som en beregning for orgel ødem.

5. plassering av hjertet på ESHP apparat og initiering av perfusjon

  1. Trim overflødig vev rundt LA med en Metzenbaum saks og klippe pulmonary årer å skape en felles orifice.
  2. Plass en veske-streng Sutur rundt LA munnstykket med en 3-0 polypropylen Sutur.
  3. Sutur og Lukk den underlegne vena cava med en 3-0 polypropylen Sutur. La den overlegne vena cava åpen i begynnelsen av perfusjon å sikre høyre ventrikkel (RV) forblir dekomprimerte til perfusate varmet og en organisert rytme oppnås.
  4. Plasser LA kanyle i LA munnstykket og sikre den med en felle (figur 6).
  5. Forsiktig klem ventriklene som de lufter hjertet"fra 5.5. og legge den til 5.7. som øke Ao pumpen fart til 1600 RPM som forsiktig klemme hjertet. Gjenværende luften i Ao rot mates gjennom innominate og subclavian grener.
  6. Fest Ao Ao kanyle i silikon membranen. Sikre Ao rundt kanyle med silke slips. Trim Ao for å oppnå riktig løgn uten spenning eller brette.
  7. Øke Ao pumpen fart til 1600 RPM. Gjenværende luften i Ao rot mates gjennom innominate og subclavian grener.
  8. Koble Ao purge linjen til truncus brachiocephalicus. Sikre tilkoblingen med silke slips.
  9. Snare venstre arteria subclavia munnstykket med silke slips. Sikre nedleggelsen med en felle og fest. Gjennom munnstykket av arteria subclavia, plasserer du en introducer skjede (5f). Kontroller at kateter og retningen er riktig justert slik at det ikke forstyrrer Ao ventil funksjon.
  10. Koble trykktransduceren Ao introducer skjede siden porten.
  11. Les Ao trykket på skjermen. Justere Ao pumpen fart for å nå et dårlig trykk på 30 mm Hg. På dette punktet (tid 0), perfusjonen vil ha startet i ikke-arbeidstid-modus (Langendorff modus) og utseendet til en mørk deoxygenated perfusate i PA linje er en reflektor av reetablering av koronar flyt. Angi en tidtaker følge varigheten av perfusjonen hvis nødvendig.
  12. Slå på varmeveksleren og sett temperaturen 38 ° C. Perfusate vil varme opptil 37-38 ° C i ca 10 min. For normothermic perfusjon av et svin hjerte, holde temperaturen på 38 ° C hele perfusjonen.
  13. Opprettholde perfusjonen i modus for ikke-prosjekttid for den første timen av perfusjonen. Justere LA pumpen fart for å opprettholde LA press på 0 mmHg.
  14. Når perfusate temperaturen er > 34 ° C, evaluere hjerterytmen og tempo og defibrillate som kreves (5-20 joule). Sikre hjertet dekomprimeres helt før du prøver cardioversion.
  15. Sjekk statusen oppløst gass med en blod gass analysator. Justere gass blandingen til å opprettholde en pH: 7.35-7.45, arteriell delvis presset av karbondioksid (PenCO2): 35-45 mmHg, arteriell delvis trykket av oksygen (PenO2): 100-150 mmHg og oksygen metning (så2) ≥95%.
  16. Når hjertet er normothermic og i en stabil rytme, ligate den overlegne vena cava.
  17. Knytte midlertidig pacemaker fører til en atrial veggen og tempo hjertet i en AAI modus på 100 slag i minuttet.
  18. Fest epicardial electrocardiography elektrodene på overflaten av hjertet.
  19. Bytt til arbeidsmodus etter 1 h av perfusjon i Langendorff modus. For dette formålet, angi ønsket LA Press (vanligvis 6 – 8 mmHg) på venstre side av hovedsiden, i delen "ønsket LAP" i programvaren, og klikk på knappen for å starte tilbakemeldinger. Aktivert arbeidsmodus vises som en grønn knapp, og LA pumpen fart automatisk vil øke og synke å nå og opprettholde ønsket LA press.
  20. Som hjertet begynner å arbeide, reduseres koronar vascular motstand som resulterer i en lav diastolisk trykk. Justere Ao pumpen fart for å opprettholde Ao diastolisk trykk av 40 mmHg som afterload under perfusjon i arbeidsmodus.

6. metabolske støtte under ESHP

Merk: Organ perfusjon løsninger, inkludert Krebs-Henseleit buffer løsning, inneholder vanligvis glukose som primær energi underlaget.

  1. Sjekk glukoseverdier (f.eks med blod gass analyse) regelmessig i perfusjonen. I henhold til forbruk priser, bruker du en standard infusjon pumpe Erstatt glukose av kontinuerlig arterial tilførsel og/eller bolus doser, opprettholde en arteriell konsentrasjon av 6-8 mmol/L av glukose i hele perfusjonen.
  2. Bruker en separat infusjon pumpe, levere 2 U/t av insulin til perfusate gjennom perfusjon, endre frekvensen av insulin infusjon i henhold til målene av studien.
  3. Levere 0,08 µg/min adrenalin til perfusate ved hjelp av en standard infusjon pumpe β-adrenoceptor stimulering av hjertet, og fortsetter gjennom perfusjonen. Alternativt kan en infusjon av 4 µg/min av dobutamin brukes.

7. anti-mikrobielle og anti-inflammatorisk agenter

  1. Legge til et bredt spekter antibiotika (f.eks 3.375 gram av piperacillin-tazobactam) i perfusate i starten av perfusjon.
  2. Legge til anti-inflammatoriske midler (f.eks 500 mg av metylprednisolon) i perfusate i samsvar med målene av studien, om nødvendig.

8. evaluering av funksjon

Merk: ESHP kontrollerer programvaren automatisk beregner og registrerer stabil hemodynamic og funksjonelle indekser hver ti sekunder.

  1. Vurdering av steady state systolisk og diastolisk funksjon
    1. For vurdering og opptak av jevn Tilstandsdataene, gjennom introducer skjede tidligere i arteria subclavia, plasserer du et væskefylte pigtail kateter i venstre ventrikkel (LV) i arbeidsmodus.
      1. Tømme pigtail kateter med saltvann og plasser guidekabelen inni den.
      2. Forsiktig inn i kateter skjede kanyle tidligere plassert i arteria subclavia. Så snart det går gjennom Ao ventilen, fjerne guidewire sakte og koble pigtail kateter LV press linjen.
      3. Følg LV press bølge på skjermen. Diastolisk delen av press bølgen kommer null når kateter er riktig plassert i LV. Av notatet er dette trinnet kun mulig i arbeidsmodus siden Ao ventilen må være åpne normalt for pigtail kateter å tre inn i kammeret. Når pigtail kateter settes i LV og koblet til trykktransduceren LV, registreres LV maksimum og minimum Hastighetsgraden Press (dP/dT min og dP/dT maks) automatisk.
    2. Bestemme hjerteinfarkt ytelsen ved å indeksere den målte flow på LA linjen for hjertet masse (mL·min– 1·g– 1), på en gitt konstant LA Press (6 – 8 mmHg), og en Ao diastolisk trykk 40 mm Hg og en puls på 100 beats·min– 1. LA trykket lik den cardiac utgang, antar det er ingen Ao insuffisiens. Undersøke Ao press bølgeform slik det er ingen Ao insuffisiens.
  2. Vurdering av preload Rekrutterbare strek (PRSW)
    Merk: PRSW er lineær forholdet mellom ende-diastolisk volum og LV slag arbeid (LVSW) og representerer en indeks for vurdering av ventrikkel funksjon, uavhengig av preload, afterload og størrelsen på ventrikkel18,19. PRSW kan måles med dette systemet i en ikke-invasiv måte som beskrevet under13.
    1. Fjerne pigtail kateter fra LV, siden kateter kan indusere arytmi under PRSW analyse som negativt påvirker nøyaktigheten av resultatene.
    2. På hovedsiden, i delen "Fange PVL" justere det ønskede rate av fall i LA pumpen fart under analysen (vanligvis 100-200 RPM) og ønsket tid der analysen finner sted (vanligvis 10-12 s) (Figur 4).
    3. Etter utfører innstillingene ovenfor, klikker du på "Post PVL". Programvaren vil automatisk exit arbeidsmodus og gradvis redusere LA pumpen RPM mens den samtidig tar LVSW og LA press. Ved avslutningen av datainnsamling utfører programvaren lineær regresjon på den nyervervede datasettet å gi PRSW. Når ESHP programvaren har fullført analysen, vises en melding på hovedsiden, viser korrelasjonskoeffisienten til analysen. Trykk "OK" Hvis koeffisient (r-verdi) er ønskelig (vanligvis > 0,95). Analyseresultatene PRSW registreres.
    4. Etter analyse, å gå tilbake til perfusjon i arbeidsmodus, klikk på "Trykk Start arbeider modus;" ellers programvaren vil fortsette i Langendorff (ikke fungerer) modus. Den grå knappen slår til green indikerer en tilbakevending til arbeidsmodus. Hvis gjentatt PRSW analyse er nødvendig, før hvert nye forsøk sikre at LA press/flyt verdiene tilbake til forrige steady state verdiene.

9. metabolske vurdering av Ex-Situ Perfused hjertet

  1. Vurdere metabolske hjertet og perfusate under ESHP, ved hjelp av informasjonen fra blod gass analyse av de perfusate prøvene samlet fra både Ao (arteriell) og PA (venøs) linjer hver 1-2 h.
  2. Utføre blod gass analyse (hver 1-2 h) for å overvåke gass og ioniske delstaten i perfusate. Justere gass sammensetningen (O2 og CO2) og feie hastighet for å opprettholde en pH på 7.35-7.45, Pão2 av 100-150 mmHg og paCO2 av 35-45 mmHg. Justere og vedlikeholde perfusate ioniske konsentrasjonen av kalium og kalsium i fysiologiske området under perfusjon (f.eks ved tillegg av veisalt hvis nødvendig).
  3. Bruk informasjonen fra blod gass analyse og koronar blodstrøm beregne metabolske parametere. For eksempel beregne hjerteinfarkt oksygenforbruk (MVO2) og LV mekanisk effektivitet (meg) som følger:
    1. Bestemme MVO2 (mL O2 · min-1 · 100 g-1) koronar blodstrøm (CBF) multipliseres med arteriell-venøs forskjellen i oksygeninnhold (CaO2 -CvO2).
      MVO2 = [CaO2 - CvO2 (mL O2 · 100 mL-1)] × CBF (mL. min-1 . 100 g hjerte masse), hvor;
      Arterial oksygeninnhold (CaO2) = [1,34 (mL O2 . g Hb-1) × Hb konsentrasjon (g · 100 mL-1) × oksygenmetning (%)] + [0.00289 (mL O2 · mm Hg-1 · 100 mL-1) × Pão2 (mm Hg)]
      Venøse oksygeninnhold (CvO2) = [1.34 (mL O2 · g Hb-1) × Hb konsentrasjon (g · 100 mL-1) × oksygenmetning (%)] + [0.00289 (mL O2 · mm Hg-1 · 100 mL-1) × PvO2 (mm Hg)]
    2. Beregne LV mekanisk effektivitet (meg) som følger:
      MEG = LVSW (J. slå-1) / MVO2 (J. slå-1) der
      Hjerneslag arbeid = {mener arteriell trykk (mmHg) - LA Press (mmHg)} × {LA flyt (mL. min-1) / puls (slår. min-1)} × 0.0001334 (J. mL-1 . mmHg-1), og
      MVO2 (J. slå-1) = {MVO2 (mL. min-1) / puls (slår. min-1)} × 20 (joule. mL-1)

10. fjerne hjertet fra ESHP apparatet på slutten av perfusjon

  1. Gå ut av arbeidsmodus. Bringe LA pumpen RPM til null.
  2. Reduser på Ao pumpen RPM til null.
  3. Fjern pigtail og hylser.
  4. Raskt fjerne alle vedleggene til hjertet.
  5. Veie tom hjertet for å fastslå graden av hjerteinfarkt ødem dannelse.
  6. Ta raskt vevsprøver riktig størrelse fra venstre og høyre ventriklene og plassere dem i optimal kutte temperatur (OCT) gel, formalin og/eller fest fryse dem i flytende nitrogen. Lagre prøvene for fremtidige undersøkelser (OCT og snapper frosne prøvene i-80 ° C fryser, formalin lagret eksemplene i riktig lukket beholder ved romtemperatur).
  7. Lukk programmet; alle de innspilte dataene lagres.
  8. Forkaste gjenværende vev, blod, bioaktive materialer og brukte ESHP apparater komponenter etter institusjonelle protokoller.
  9. Rengjør ESHP handlekurv med en desinfiserende hard overflate renere (f.eks 70% etanol) grundig.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Ved starten av perfusjon (som ikke fungerer) igjen hjertet normalt en sinus rytme når temperaturen på systemet og perfusate nærmer seg normothermia. Når du angir arbeidsmodus, som LA presset nærmer ønskede verdier, utstøting Ao press sporing observeres og LA strømmen (en refleksjon av cardiac output) bør øke gradvis. I en Yorkshire gris modell (35-50 kg) og en hjertet startvekt på 180-220 gram, første LA strømmen blir ~ 2000 mL/min, og dette vil vanligvis tilnærming ~ 2750 mL/min under den første timen av perfusjon i arbeidsmodus. Figur 7 viser trender i Ao trykk (A) så vel som LA og pulmonal arteriell flyt (B) over 12 timer med perfusjon.

Under ESHP i fysiologiske arbeidsmodus er ulike metabolske vurderinger av hjertet også mulig. Blod gass analyse/metabolske vurderinger på perfusate prøver innhentet under ESHP gir omfattende informasjon om hjertet metabolske status over tid (tabell 1 og 2) og (figur 8A, B)20 . I tillegg til blod gass analyse, perfusate prøver kan bli samlet og vurdert for ulike biomarkers som hjernen natriuretisk peptid og troponin-I; Det bør imidlertid bemerkes at ESHP oppstår i et lukket system, med ingen utveksling av perfusate løsning. I fravær av organer som naturlig metabolismer/fjerne disse faktorer (f.eks nyrer), er akkumulering av biomarkers over tid i perfusate løsningen vanligvis observert (figur 9).

Funksjonell vurdering av hjertet denne plattformen kan inneholde både Last-avhengige parametere [inkludert hjerteinfarkt resultater (hjerte index, CI), LVSW, maksimum og minimum priser press endring (dp/dt max og min)], og uavhengig av Last parametere ( PRSW) (tabell 3). Figur 10 viser evalueringen av LV PRSW under en datastyrt lineær reduksjon i LA press13. Vår erfaring med ESHP av > 200 svin hjerter og > 10 menneskenes hjerter, bruk av en automatisert ESHP-program har vært i samarbeid med utvikling av standard operasjonsprosedyrer resulterer i minimal inter - og intra-Community operatører variasjon i de funksjonelle parameterne. ESHP apparater og programvare systemet brukes her er utviklet for å opprettholde ønsket presset og samle funksjonelle parametere med minimalt behov for manuelle justeringer, og vi har observert en interclass korrelasjonskoeffisienten (ICC) ≥0.9 for alle vurdert parametrene (f.eks LVSW, og dP/dt max og min) som står for utmerket mellom rater, intra-rater og test-retest pålitelighet. I dette systemet, kan electrocardiographic overvåking av hjertet under perfusjon også skje med to elektroder som beskrevet i protokollen, gir informasjon om hjertefrekvens og rytme under perfusjon (Figur 4).

Vurdering av hjertet under ESHP kan utvides til ulike modaliteter for bildebehandling. Echocardiography under ESHP kan gi tilleggsinformasjon om hjerteinfarkt funksjon (f.eks ventrikkel utstøting brøkdel) og anatomisk parametere (Figur 11 og Figur 12). Videre er en vurdering av koronar blodkar mulig med angiographic tenkelig21.

Utføre en lineær regresjonsanalyse identifiserer hvilke parametere beste korrelert med hjerteinfarkt ytelse (hjerte indeks: mL·min-1·g-1) under ESHP. Vi viste tidligere at til tross for significant variasjonen i muligheten av de målte funksjonelle parametrene å forutsi hjerteinfarkt ytelse, total, funksjonelle parametere viser en høy korrelasjon med cardiac utgang. De beste funksjonelle Prediktorer inkludert systolisk slag arbeid [bestemmelseskoeffisient (R2) = 0.759], systolisk funksjon, og minimum dP/dt, (R2 = 0.738) for diastolisk funksjon. Interessant, metabolske parametere alene viser en svært begrenset evne til å forutsi hjerteinfarkt ytelse (oksygenforbruk: R2 = 0.28; koronar vascular motstand: R2 = 0,20; laktat konsentrasjon: R2 = 0,02). 13 perfusjon hjertet i en normothermic arbeidsmodus tilbyr muligheten til å få omfattende metabolske og funksjonelle vurderinger av hjertet under orgel bevaring. En klinisk ESHP enhet med muligheten til å støtte hjertet i arbeidsmodus gir helsetjenester laget med muligheten til å gjort beslutninger om orgel levedyktighet basert på objektive data før transplantasjon.

Figure 1
Figur 1: silikon støtte membranen for hjertet. Støtte membran avbildet med integrert aorta kanyle (A), venstre atrial kanyle (B) og lungearterien kanyle (C). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2: The ESHP krets. (A) skjematisk figur av ESHP krets. (B) ESHP apparater i våre omgivelser. A = orgel kammer og silikon støtte membran, B = reservoaret, C = arteriell line filter, D = venstre atrial pumpe, E = aorta pumpe, F = membran oxygenator og varmeveksler, G = gass blandebatteri, H = tube flowsensoren, jeg = trykksensor, J = stopcock/luer-lock. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3: de lufting pumpene ved å plassere pumpen uttaket til et høyere nivå. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 4
Figur 4: skjermdump fra kjører ESHP programmet viser cardiac funksjonelle parametere. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 5
Figur 5: skjermdump fra initialisert ESHP programmet. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 6
Figur 6: den magnetiske venstre atrial kanyle sikret til bakre del av venstre atrium. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 7
Figur 7: overvåke trykk og renn under perfusjonen. (A) trender i aorta trykket under 12 timer med ESHP. (B) trender i venstre atrial og lungearterien flyter under 12 timer med ESHP Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 8
Figur 8: trender over tid. (A) Myocardial oksygenforbruk og (B) venøse laktat konsentrasjon under 12 h av ESHP Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 9
Figur 9: trender over tid i perfusate konsentrasjon av cardiac troponin-jeg under 12 h ESHP. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 10
Figur 10: vurdering av preload Rekrutterbare slag arbeide et dårlig fungerende hjerte (grå) mot et velfungerende hjerte (svart). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 11
Figur 11: representant todimensjonal echocardiographic bilder. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 12
Figur 12: representant M-echocardiographic bilder. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Aorta (arteriell) parametere PA (venøs) parametere
T1 T5 T11 T1 T5 T11
Blod gass verdier
pH 7.28 7.44 7.33 7.25 4,42 7,30
pO2 (mmHg) 123.00 149.00 141.00 44.00 55.40 57.80
pCO2 (mmHg) 38.00 33.90 42.50 43,00 37.10 46.10
Oximetry verdier
HB (g/dL) 4.20 4.10 3,90 4.20 4.10 3,90
2 (%) 100,00 100,00 100,00 64.00 95.50 92.00
Elektrolytt verdier
K+ (mmol/L) 4.20 4.60 5,20 4.20 4.60 5,20
Na+ (mmol/L) 142.00 144.00 149.00 142.00 144.00 149.00
Ca2 + (mmol/L) 1.02 1.20 1.40 1.02 1.20 1.40
CL- (mmol/L) 107.00 109.00 114.00 107.00 109.00 114.00
OSM (mmol/kg) 291.30 292.50 302.40 291.90 292.90 302.40
Metabolitten verdier
Glukose (mmol/L) 7.00 5.30 5.10 7.00 5,20 5.00
Laktat (mmol/L) 3,00 2.30 2.00 3.10 2,40 1,90
Syre-Base status
Hco3- (mmol/L) 17.60 23.10 21.90 18.50 23.70 22.40

Tabell 1: et tilfelle av blod gass analyse utført under ex situ hjertet perfusjon. Ca2 +, kalsium ion; CL-, klorid ion; HB, hemoglobin; HCO3-, bikarbonat ion; K+, kalium ion; Na+, natrium ion; OSM, osmolaritet; paCO2, arteriell delvis presset av karbondioksid; Pão2, arteriell delvis trykket av oksygen; Så2, oksygenmetning; T1, 1 h ex situ perfusjon (tidlig perfusjon); T5, 5 h ex situ perfusjon (midten av perfusjon); T11, 11 h ex situ perfusjon (sent perfusjon)

Tid
Metabolsk parametere T1 T5 T11
MVO2 mL/min/100 g 6.68 2.44 1,77
Venøse laktat mmol/L 3.1 2.4 1.9
Venøse - Arterial laktat forskjellen mmol/L 0,1 0,1 -0.1
Glukose utnyttelse g/h 1.23 0,6 1.14

Tabell 2: metabolske parametere beregnet med blod gass analyse dataene. MVO2, hjerteinfarkt oksygenforbruk; T1, 1 h ex situ perfusjon (tidlig perfusjon); T5, 5 h ex situ perfusjon (midten av perfusjon); T11, 11 h ex situ perfusjon (sent perfusjon)

Tid
Funksjonelle parametere T1 T5 T11
CI (mL/min/g) 10,26 9.66 7,50
SW (mmHg * mL) 2253 1965 1323
dP/dT max (mmHg/s) 1781 1783 1482
Sys p (mmHg) 128 121 91
MEG (%) 6.69 16.85 21.68
PRSW 399 348.38 248.63
dP/dT min (mmHg/s) -1444 -2350 -844

Tabell 3: et tilfelle av venstre ventrikkel funksjonelle parametere vurderes under ex situ hjertet perfusjon. CI, hjerte index; dP/dT max, maksimal hastighet på press endring; dP/dT min, laveste satsen av press endring; MEG, mekanisk effektivitet; PRSW, preload Rekrutterbare slag arbeid; SW, hjerneslag arbeid; Sys p, systolisk trykk; T1, 1 h ex situ perfusjon (tidlig perfusjon); T5, 5 h ex situ perfusjon (midten av perfusjon); T11, 11 h ex situ perfusjon (sent perfusjon).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Vellykket perfusjon er definert i henhold til målene med studier; Dette bør imidlertid inkludere uavbrutt ESHP for ønsket mengde tid og komplett samling av data på hjertefunksjon under perfusjonen. For dette formålet etterfølges noen viktige skritt i protokollen.

Hjertet er et organ med høy oksygen og energi, og minimere iskemiske tid før cannulation og perfusjon er et viktig prinsipp som må følges. Prosessen med innkjøp, montering hjertet på ESHP apparatet og starte perfusjonsmåling skal ikke overstige 20-30 min.

For effektiv perfusjon og pålitelig funksjonell vurdering bærer prosessen med montering hjertet på apparatet avgjørende betydning. Riktig anatomisk justering av stor fartøyene spiller en viktig rolle i denne forbindelse. Hjertet skal innhentes med en tilstrekkelig lengde på PA og Ao arch grener slik at disse fartøyene ikke er strukket knyttet til representant cannulae. Fra starten av perfusjonen spiller effektiv koronar perfusjon en avgjørende rolle i å beskytte hjertet under ex situ perfusjon. Etter igangsetting av perfusjonen i ikke-arbeidstid-modus, bør Ao trykket være overvåket og justert på minst 30 mmHg støtte av koronar perfusjon effektivt. Utseendet til en mørk deoxygenated perfusate i PA linje er en reflektor av reetablering av koronar flyt. Etter bytte til arbeidsmodus, skal Ao trykket justeres til 40 mmHg å gi tilstrekkelig koronar perfusjon press for arbeider hjertet.

Deairing i kamre av hjertet og Ao er avgjørende for vellykket ESHP. Ved feste LA kanyle, vil klemme chambers hjelpe i deairing hjertet. Noen luft i LV som mates bør recirculate gjennom purge linjen i truncus brachiocephalicus, som reduserer risikoen for koronar air embolism. Men hvis betydelige air forblir i venstre hjertet ved bytte til arbeidsmodus, er koronar air embolism mulig fører til en betydelig nedgang i hjerteinfarkt funksjon.

Målet med presentert tilnærming er å gi en reproduserbar og pålitelig plattform for eksperimentell ESHP studier i store pattedyr modeller. Et slikt system gir mulighet for perfusjon i en fysiologiske arbeidsmodus og omfattende evaluering av perfused hjertet. Dette gir en mulighet til å vurdere Kardioprotektive-protokoller som er rettet mot gjenopplivd dysfunksjonelle donor organer. Dette systemet muliggjør enkel og reproduserbar vurderinger av cardiac funksjonelle parametere sammen med metabolske parametere under ESHP, gir objektive data som kan brukes til å identifisere levedyktig organer til transplantasjon. Slike en helhetlig vurdering er spesielt viktig når vurderer utvidet kriterier donert hjerter og hjerter donert etter sirkulasjonssystemet. Videre, ifølge våre observasjoner i innstillingen av eksperimentell ESHP, hjerter parfyme i en arbeidsmodus vise overlegen bevaring av systolisk og diastolisk funksjonen over tid i forhold til hjerter bevart i Langendorff modus og kan bidra til å utvide trygg bevare tid.

ESHP i en arbeidsmodus er en effektiv metode for å bevare donert hjertet og vurdere sin levedyktighet, men det er en kunstig innstilling mangler mange av fysiologiske aspekt av kroppen (sanntid hormonelle og ernæringsmessig balanse/support, og frie radikaler scavenging systemer). Hjertet er et organ med sofistikert energi/metabolsk krav. Dermed er gir konsekvent og effektiv metabolske støtte til hjertet parfyme kritisk viktig. Vi har observert en nedgang i funksjonen for ex situ perfused hjerte, spesielt under utvidet perfusjon ganger22. Det kan hende at slik en nedgang fra metabolske ineffektivitet påvirker funksjon arbeider modus-perfused hjertet. Flere studier er garantert for å karakterisere optimal metabolske støtte for hjertet under ESHP. En ekstra utfordring er kompleksiteten av arbeider modus hjertet perfusjon. Til tross for forbedret enkelhet av ESHP i dette systemet, bør fungerer modus perfusjon utføres av godt opplært personale.

ESHP apparatet med kapasitet til å utføre en omfattende funksjonelle og metabolske vurdering av hjerter i store pattedyr modell, tilbyr stort potensial til å utvikle translasjonsforskning terapeutisk for å forbedre dysfunksjonelle/suboptimal donert hjerter . ESHP kan tjene som en plattform for å administrere terapeutiske tiltak rettet mot et bredt spekter av betingelser (f.eks iskemi reperfusion skade), og vurdere deres effekter på metabolske og funksjonelle parametere av parfyme hjertet12. Videre kan arbeidsmodus ESHP lette utvidelsen av sikker bevaring intervallet, som kan bidra til å overvinne geografiske begrensninger av orgel donasjon og tilrettelegge bedre fordeling av donert hjerter.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

DHF har patenter på ex situ organ perfusjon teknologi og metoder. DHF og JN er grunnleggerne og store aksjonærer i Tevosol, Inc.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av stipend fra Canadian National transplantasjon Research Program. SH er mottakeren av en fakultet og odontologi Motyl Graduate Studentship i enkelte fag. DHF er en mottaker av et samarbeidsprosjekt forskning prosjekter (CHRP) stipend bistand fra National Sciences og Engineering Research Council og kanadiske institutter for helseforskning.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Debakey-Metzenbaum dissecting scissors Pilling 342202
MAYO dissecting scissors Pilling 460420
THUMB forceps Pilling 465165
Debakey straight vascular tissue forceps  Pilling 351808
CUSHING Gutschdressing forceps Pilling 466200
JOHNSON needle holder Pilling 510312
DERF needle holder Pilling 443120
Sternal saw Stryker 6207
Sternal retractor Pilling 341162
Vorse tubing clamp Pilling 351377
MORRIS ascending aorta clamp Pilling 353617
Surgical snare (tourniquet) set Medtronic CVR79013
2-0 SILK black 12" x 18" strands ETHICON A185H
3-0 PROLENE blue 18" PS-2 cutting ETHICON 8687H
Biomedicus pump drive (modified) Medtronic 540 Modified to allow remote electronic control of pump speed
Biomedicus pump Maquet BPX-80
Membrane oxigenator D 905 SORIN GROUP 50513
Tubing flow module   Transonic Ts410
PXL clamp-on flow sensor Transonic ME9PXL-BL37SF
TruWave pressure transducer Edwards VSYPX272
Intercept tubing 3/8" x 3/32" xX 6' Medtronic 3506
Intercept tubing 1/4" x 1/16" x 8' Medtronic 3108
Heated/Refrigerated Bath Circulator  Grant TX-150
ABL 800 FLEX Blood Gas Analyzer Radiometer 989-963
DLP cardioplegia cannula (aortic root cannula) Medtronics 20613994495406
5F Ventriculr straight pigtail cathter CORDIS 534550S
5F AVANTI+ Sheath Introducer CORDIS 504605A
Emerald Amplatz Guidewire CORDIS 502571A
Dual chamber pace maker Medtronic 5388
Defibrilltor CodeMaster M1722B
Infusion pump Baxter AS50
Surgical electrocautery device Kls Martin ME411
Gas mixer SECHRIST 3500 CP-G
Medical oxygen tank praxair 2014408
Cabon dioxide tank praxair 5823115
Bovine serum albumin MP biomedicals 218057791

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ardehali, A., et al. Ex-vivo perfusion of donor hearts for human heart transplantation (PROCEED II): a prospective, open-label, multicentre, randomised non-inferiority trial. Lancet. 385, (9987), 2577-2584 (2015).
  2. Collins, M. J., Moainie, S. L., Griffith, B. P., Poston, R. S. Preserving and evaluating hearts with ex vivo machine perfusion: An avenue to improve early graft performance and expand the donor pool. European Journal of Cardiothoracic Surgery. 34, (2), 318-325 (2008).
  3. Freed, D. H., White, C. W. Donor heart preservation: Straight up, or on the rocks? Lancet. 385, (9987), 2552-2554 (2015).
  4. Guibert, E. E., et al. Organ preservation: Current concepts and new strategies for the next decade. Transfusion Medicine and Hemotherapy. 38, (2), 125-142 (2011).
  5. Collins, M. J., et al. Use of diffusion tensor imaging to predict myocardial viability after warm global ischemia: Possible avenue for use of non-beating donor hearts. Journal of Heart and Lung Transplantation. 26, (4), 376-383 (2007).
  6. White, C. W., et al. A cardioprotective preservation strategy employing ex vivo heart perfusion facilitates successful transplant of donor hearts after cardiocirculatory death. Journal of Heart and Lung Transplantation. 32, (7), 734-743 (2013).
  7. Iyer, A., et al. Normothermic ex vivo perfusion provides superior organ preservation and enables viability assessment of hearts from DCD donors. American Journal of Transplantation. 15, (2), 371-380 (2015).
  8. Peltz, M., et al. Perfusion preservation maintains myocardial ATP levels and reduces apoptosis in an ex vivo rat heart transplantation model. Surgery. 138, (4), 795-805 (2005).
  9. Liao, R., Podesser, B. K., Lim, C. C. The continuing evolution of the Langendorff and ejecting murine heart: New advances in cardiac phenotyping. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 303, (2), H156-H167 (2012).
  10. Rivard, L., Gallegos, R., Ogden, I., Bianco, R. Perfusion Preservation of the Donor Heart: Basic Science to Pre-Clinical. Journal of Extra Corporeal Technology. 41, (3), 140-148 (2009).
  11. Dhital, K. K., et al. Adult heart transplantation with distant procurement and ex vivo preservation of donor hearts after circulatory death: A case series. Lancet. 385, (9987), 2585-2591 (2015).
  12. Messer, S., Ardehali, A., Tsui, S. Normothermic donor heart perfusion: Current clinical experience and the future. Transplant International. 28, (6), 634-642 (2015).
  13. White, C. W., et al. Assessment of donor heart viability during ex vivo heart perfusion. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 93, (10), 893-901 (2015).
  14. Messer, S. J., et al. Functional assessment and transplantation of the donor heart after circulatory death. Journal of Heart and Lung Transplantation. 35, (12), 1443-1452 (2016).
  15. Hatami, S., et al. Endoplasmic reticulum stress in ex vivo heart prfusion: A comparison between working vs non-working modes. Canadian Journal of cardiology. 33, (10), (2017).
  16. White, C. W., et al. Ex vivo perfusion in a loaded state improves the preservation of donor heart function. Canadian Journal of cardiology. 31, (10), s202 (2015).
  17. White, C. W., et al. A wholeblood-based perfusate provides superior preservation of myocardial function during ex vivo heart perfusion. Journal of Heart and Lung Transplantation. (14), (2014).
  18. Lips, D. J., et al. Left ventricular pressure-volume measurements in mice: comparison of closed-chest versus open-chest approach. Basic Research in Cardiology. 99, (5), 351-359 (2004).
  19. Morita, S. Is there a crystal ball for predicting the outcome of cardiomyopathy surgery? Preload recruitable stroke work, may be a possible candidate. Journal of Cardiology. 71, (4), 325-326 (2018).
  20. Hatami, S., et al. Canadian Society for Transplantation. Halifax. (2017).
  21. Anthony, C., et al. Ex vivo coronary angiographic evaluation of a beating donor heart. Circulation. 130, (25), e341-e343 (2014).
  22. Sandha, J. K., et al. Steroids Limit Myocardial Edema During Ex vivo Perfusion Of Hearts Donated After Circulatory Death. Annals of Thoracic Surgery. (2018).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics