Временной анализ ядерных и цитоплазматических транслокации герпеса вирус 1 белок, Immunofluorescent конфокальная микроскопия

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

ICP0 подвергается ядерной и цитоплазматических транслокации во время инфекции HSV-1. Молекулярный механизм этого события не известна. Здесь мы описываем использование Конфокальный микроскоп как инструмент для количественной оценки ICP0 движения в инфекции HSV-1, которая закладывает основу для количественного анализа ICP0 транслокации в механистической будущих исследований.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Samrat, S. K., Gu, H. Temporal Analysis of the Nuclear-to-cytoplasmic Translocation of a Herpes Simplex Virus 1 Protein by Immunofluorescent Confocal Microscopy. J. Vis. Exp. (141), e58504, doi:10.3791/58504 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Инфицированная клетка белок 0 (ICP0) вируса простого герпеса (ВПГ-1) 1 является немедленное раннего белок, содержащий убиквитин лигаза КОЛЬЦЕВОГО типа E3. Это ответственность за ухудшение протеосомной пребывания ограничительных факторов и последующих вирусных генов активации. ICP0 содержит последовательность каноническое ядерной локализации (NLS). Он проникает в ядро сразу же после de novo синтеза и выполняет свои функции Анти принимающей обороны главным образом в ядре. Однако позже в инфекции, ICP0 находится исключительно в цитоплазме, предлагая возникновение ядерного в цитоплазматического транслокации во время инфекции HSV-1. Предположительно ICP0 транслокации позволяет ICP0 модулировать свои функции согласно его субцеллюлярные места на этапах различные инфекции. Для того, чтобы разграничить биологической функции и механизм регулирования ядерной и цитоплазматических ICP0 транслокации, мы изменили методом immunofluorescent микроскопии для мониторинга ICP0 людьми во время инфекции HSV-1. Этот протокол включает в себя immunofluorescent окрашивание, Конфокальный микроскоп изображений и ядерной против цитоплазмы анализ распределения. Цель настоящего Протокола заключается в адаптации устойчивого состояния конфокальный снимки, сделанные в времени курс в количественных документации ICP0 движения на протяжении всего литические инфекции. Мы предлагаем, что этот метод может быть обобщена количественно анализировать ядерной против цитоплазмы локализации других вирусных или клеточных белков без привлечения живой технологии визуализации.

Introduction

Вирус простого герпеса (ВПГ-1) 1 вызывает широкий спектр легкой до тяжелой герпетические заболевания, включая labialis герпеса, генитальный герпес, стромальный кератит и энцефалит. После заражения, вирус устанавливает пожизненными латентной инфекции в ганглиях нейронов. Иногда вирус может быть возобновлена по различным причинам, такие как лихорадка, стресс и подавление иммунной1, приводит к инфекции рецидивирующий герпес. Инфицированной клетки белки 0 (ICP0) является ключевым регулятором вирусный решающее значение для литические и латентной инфекции HSV-1. Она transactivates вниз по течению вирус гены через противодействие хост внутренней/врожденной противовирусное оборону2,3. ICP0 имеет действие убиквитин лигаза E3, которая ориентирована на несколько клеток факторов для протеасом зависимой деградации3. Он также взаимодействует с различных путей клеток регулировать их деятельность и впоследствии компенсировать хост противовирусное ограничения3. Известно, что ICP0 найти на различных внутриклеточных отсеков, как инфекция переходит в3,4,5. Белок имеет лизин/аргинин богатые ядерной локализации сигнал (NLS), расположенный на остатки 500 до 5066. После de novo синтеза в ранней инфекции HSV-1 ICP0 немедленно импортируется в ядро. Обнаруживается сначала на динамический ядерные структуры называют ядерной области 10 (ND10)7. E3 убиквитин лигаза активность ICP0 вызывает деградацию ND10 Организатор белки, белка promyelocytic лейкемия (PML) и крапинами белка 100 кДа (Sp100)8,9,10. После потери Организатор белков ND10 ядерных органы рассредоточены и ICP0 распространяется для заполнения всего ядро4,11.

Интересно, что после начала вирусной репликации ДНК, ICP0 исчезает из ядра. Он находится исключительно в цитоплазме, предлагая возникновение ядерного в цитоплазматического транслокации инфекции HSV-14,12в конце. Требование о репликации ДНК подразумевает потенциального участия конце вирусные белки в содействии цитоплазматических транслокации HSV-1 ICP04,12. Видимо ICP0 торговли людьми среди различных отсеках во время инфекции дает ICP0 чтобы модулировать его взаимодействия различных клеточных путей в пространственно временных моды, и поэтому координировать его несколько функций для тонкой настройки баланса между литических и латентных HSV-1 инфекции13. Чтобы лучше понять ICP0 многофункциональности и координации ICP0 функциональные домены на протяжении литические инфекции, мы тщательно расчлененный молекулярные основы динамических транслокации ICP012. Для проведения механистический исследований сообщалось ранее12, мы применили метод immunofluorescent окрашивание визуализировать субцеллюлярные локализации ICP0 на различные инфекции статуса согласно конфокального микроскопа. Мы также разработали количественный протокол для анализа ядерных против цитоплазмы распределения ICP0 с помощью конфокальной программного обеспечения. Популяция клеток инфицированных HSV-1 был рассчитанной на этапах инфекции и были проанализированы тенденции движения ICP0, в12различных биохимических методов лечения. Здесь мы описываем подробный протокол, что документы ICP0 транслокации инфекции HSV-1. Мы предлагаем, что этот метод может быть принят в качестве общего метода для изучения транслокации цитоплазмы ядерной против других вирусных или клеточных белков, которые могут служить альтернативой живых изображений когда живой Тепловизионная техника не применяется из-за такие проблемы, как маркировка метод, интенсивности сигнала или белков изобилия.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. клетки посева и вирусной инфекции

  1. В 20 – 24 ч до вирусной инфекции семян 5 х 104 клетки фибробластов человека эмбриональных легких (HEL) или другие клетки быть расмотренным на 11 мм 4-ну шахматном слайд в среднего роста (Дульбекко изменение Eagle среднего (DMEM) с 10% плода говядину сыворотка (ФБС)). Инкубируйте клетки при 37 ° C с 5% двуокиси углерода (CO2).
    Примечание: Каждый хорошо должен иметь 70-80% клеток confluency во время инфекции.
  2. На следующий день удалите среднего роста и заразить клетки с вирусами в средне-199 в диапазоне 4 – 10 ОРП/ячейки. Инкубировать инфицированные вирусом клетки в течение 1 ч при 37 ° C. Держите покачивая слайд во время инкубационного периода.
  3. После инкубации 1 h удалите средне-199 и дополнить с среднего роста.
    Примечание: Наркотики, которые мешают различные инфекции фазы могут быть добавлены на этот шаг или до вирусной поглощения.
  4. Инкубируйте инфицированные вирусом клетки при 37 ° C с 5% CO2 для различных длин период инфекции.

2. Фиксация и Permeabilization

  1. Во время надлежащего инфекции быстро мыть инфицированных клеток с фосфат амортизированное saline (PBS) 3 раза и добавить 200 мкл параформальдегида 4%, свежеприготовленный в PBS. Инкубируйте клетки с параформальдегида для 8-10 мин при комнатной температуре, чтобы исправить ячейки в каждой скважине.
  2. Аспирационная параформальдегида и промыть скважин с 200 мкл PBS для 3 раза. Полностью аспирационная PBS после стирки 3rd .
  3. Добавьте 100 мкл 0,2% неионные ПАВ в каждой скважине для разрушения клеток для 5 – 10 мин.
  4. Аспирационная неионных ПАВ и промыть скважин с 200 мкл PBS для 3 раза.

3. immunofluorescent окрашивание

  1. Полностью аспирационная PBS и добавить 200 мкл блокировки буфера (1% бычьим сывороточным альбумином (БСА) и 5% сыворотки крови лошади в PBS) в каждой скважине и инкубации при комнатной температуре в течение 1 ч или при температуре 4 ° C на ночь.
  2. Добавьте экспериментальным путем концентрации основного антитела (кролика polyclonal антитела анти ICP012) в блокирующем буфере и инкубировать основное антитело при комнатной температуре на 2 ч или при температуре 4 ° C на ночь.
  3. Промойте блокирующий буфер 3 раза с 10 минут инкубации. Добавить Alexa 594-конъюгированных коза анти кролик вторичное антитело (разводят в блокирующем буфере 1: 400) и инкубировать слайды при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем промойте слайды 3 раза с блокирующий буфер интервалом 10 мин.
  4. Наконец, мыть слайд один раз с PBS для удаления остаточного BSA и лошадь сыворотки.
  5. Добавьте одну каплю antifade монтажа среды с 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) смонтировать слайд и запечатать его с coverslip, с помощью прозрачный лак.

4. конфокальная томография

  1. С конфокального микроскопа установите волны 590 – 650 Нм для Alexa 594 и 410 – 520 Нм для DAPI. Выберите формат изображения 1024 x 1024 и линии в среднем 8 для получения изображений с высоким разрешением.
  2. Анализ каждой скважины на слайде 4-ну под конфокального микроскопа. Получение изображений представитель клеток под 100 X цели, как показано на рисунке 1 и на рисунке 2.
  3. Для подсчета большое количество клеток, принимать изображения подряд полей под 40 X цели.
    Примечание: Это требует 5 – 10 изображений, чтобы накопить более 200 инфицированных клеток от каждой точки время каждой инфекции.
  4. В каждом эксперименте сфотографироваться с постоянным конфокальный параметрами для всех образцов необходимо сравнить.

5. анализ ядерных против цитоплазмы распределения

  1. Открыть проект с конфокальный прикладного программного обеспечения. Выберите изображение, из которого нужно Табулированы ядерной против цитоплазмы распределения ICP0 клетки.
  2. Перейдите на вкладку «Количество» в верхнем меню и выберите «Сортировать ROIs» из меню Сервис.
  3. Нарисуйте продольной линии через ячейку, чтобы быть проанализированы, выбрав «Черту» из верхнего меню.
    Примечание: Гистограммы появится показаны интенсивности флуоресценции вдоль линии для ICP0 и DAPI. В гистограмме синяя линия представляет DAPI пикселей и обозначает границу ядра, в то время как красная линия представляет ICP0 пикселей.
  4. Основываясь на фоне окрашивание, создан постоянный порог для ICP0 интенсивности для анализа ICP0 субцеллюлярные распределения в каждом эксперименте.
    1. Примером в Рисунок 2, если красный сигнал в среднем ниже порога в регионе ядерных, но выше порога за пределами границы синий, классифицировать красный сигнал как преимущественно находятся в цитоплазме.
    2. Если красный сигнал выше порогового уровня ядра и за границу синего сигнала, Группа красный сигнал как ядро плюс цитоплазматических локализации.
    3. Если красный сигнал выше порога в ядре, но в среднем ниже вне границы синий сигнал, Группа красный сигнал как ядерной локализации.
  5. Табулирование более чем 200 инфицированных клеток от каждого образца в различные инфекции время и сюжет в столбчатую диаграмму для иллюстрации ICP0 движение по времени (рис. 3).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Чтобы понять молекулярные основы и биологические функции ICP0 торговли людьми во время инфекции HSV-1, мы используем метод immunofluorescent микроскопии для анализа ICP0 субцеллюлярные распределения на этапах различные инфекции. Рисунок 1 показывает представитель клетки с отличительные ICP0 локализации как инфекция прогрессирует. Для количественного определения ядерного в цитоплазматического транслокации ICP0, мы анализируем ICP0 распределение по отношению к ядро, разделив инфицированных клеток на три группы: ядерной локализации, цитоплазматических локализации и ядерной плюс цитоплазматических локализации ( Рисунок 2). Чтобы понять элементы, необходимые для ICP0 людьми во время инфекции, мы отслеживаем ICP0 движений в дикого типа или мутант HSV-1 на этапах различные инфекции. На рисунке 3 показан пример результатов подсчета для субцеллюлярные распределения ICP0 в разное время точке инфекции.

Figure 1
Рисунок 1: динамический торговлей ICP0 во время инфекции HSV-1. ХЕЛЬ клетки, выращенных на 4-ну слайды были инфицированы прототип HSV-1 (штамм F) на 10 ОРП/ячейки. В 1, 5 и 9 h пост инфекции (hpi) клетки фиксировали, permeabilized и отреагировали на кролика анти ICP0 и мышь анти ПМЛ первичных антител и затем отреагировали на Alexa 594-конъюгированных анти кролика и вторичные антитела анти мыши 488-cojugated Alexa для визуализации 100 X целей. Promyelocytic лейкемия (PML) белок служит маркер белка для ND10 ядерной органов, которая исчезает в 5 и 9 hpi вследствие деградации ПМЛ инфекции. Шкалы бар = 10 мкм. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 2
Рисунок 2: анализ распределения внутриклеточных ICP0. Левая панель: С конфокального микроскопа, представитель клетки были расширены чтобы показать продольная линия, нарисованная поперек ячейку, определяет область интереса (ROI). Правая панель: пиксель интенсивностью флюоресценции в ROI были количественно для ICP0 и DAPI в отдельных клетках и иллюстрируется конфокальный прикладного программного обеспечения как гистограммы. Произвольные порог (зеленая линия) был установлен для отражения окрашивания фона. Шкалы бар = 10 мкм. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 3
Рисунок 3: процент субцеллюлярные распределения для дикого типа и C-терминала усеченные ICP0. ХЕЛЬ клетки были заражены рекомбинантных вирусов, содержащих одичал типа ICP0 (ICP0 WT) или C-терминал обрезается ICP0 (ICP0 C-усечение) на 4 ОРП/ячейки. В назначенное время точках клетки были окрашенных и проанализированы как описано выше. Более 200 клеток были представлены для ICP0 места. Процент ячеек, содержащих ядерное, цитоплазмы, или ядерной + цитоплазматических ICP0 были нанесены с программным обеспечением вычисление таблицы. Это образцовое эксперимент, чтобы показать, что с помощью этого метода, мы определили ICP0 C-окончание как домена, необходимых для ICP0 ядерных и цитоплазматических транслокации. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Этот протокол был использован для изучения ядерной и цитоплазматических транслокации HSV-1 ICP0. ICP0 проходит, субцеллюлярные людьми во время инфекции HSV-1 (рис. 1). Вероятно ICP0 взаимодействует с различных клеток пути для выполнения различных функций в разных местах. Это позволяет ICP0 для тонкой настройки его несколько функций в перетягивание каната с человека-хозяина13. Однако как ICP0 координирует множество функций на пространственно временной основе не хорошо изучена. С протоколом флуоресцентной микроскопии, описанных выше мы начали анализировать молекулярные основы ICP0 ядерных и цитоплазматических транслокации. На сегодняшний день, мы определили ICP0 C-терминала 35 аминокислоты как необходимый элемент, важные для этого транслокации. В отсутствие C-отель terminus ICP0 сдержан в ядре течение инфекции (рис. 3). Мы также обнаружили, что ICP0 E3 лигаза зависимых ядерной удержания силой задержки ядерного в цитоплазматического транслокации в U2OS клетки12. Кроме того мы обнаружили, что ICP0 C-конечная и выражения позднего вирусных белков сотрудничать для преодоления ядерного удержания и облегчения цитоплазматических транслокации12. В настоящее время мы используем этот протокол к экрану для конца вирусных белков, участвующих в ядерной и цитоплазматических транслокации ICP0.

Протокол был первоначально разработан для изучения динамических торговлей ICP0 в инфекции HSV-1. Как показано на рисунке 1, в начале инфекции HSV-1, ICP0 colocalized с ND10, где ND10 компоненты например, PML и Sp1008и несколько ключевых компонентов клеточной ограничительных факторов деградации. После унижающего достоинство ND10 ключевых составляющих, ICP0 диффундирует в ядре и в конце инфекции, ICP0 перемещен в цитоплазму. Потому что ICP0 проходит de novo синтеза при инфекции, избыточностью первоначальный белка является очень низким, и затем надежный вирусный синтез быстро скроет движение любого отдельных молекул, что делает его трудно отслеживать с помощью одной молекулы живой технологии визуализации. Таким образом мы намеренно решили не использовать живой изображений. Вместо этого мы приняли выше протокол для изучения установившемся ICP0 локализации в точках различные инфекции, которые служили нам в отслеживания временных движения ICP0 в популяции клеток инфицированных HSV-1.

Для высоким соотношением сигнал фон в конфокальных анализа два важнейших шага отметить в мокрой скамейке части настоящего Протокола. Во-первых 4-хорошо шахматном слайды позволяют несколько образцов, чтобы быть обработаны на один слайд. Это значительно экономит использование драгоценных реагенты, такие как вирусы и антител. Однако потому что объем проведенных в каждой скважине настолько мал, остаточного буфера не полностью очищен во время изменения буфера может мешать последующих реагента. Таким образом в каждый буфер выключателя, тщательное стремление необходима перед добавлением нового буфера. Во-вторых основываясь на нашем опыте, степень проницаемости сшивки и мембраны клеток имеет важное значение для ясности флуоресценции сигналов. Мы установили эмпирические количество 10 мин для параформальдегида и неионогенных ПАВ лечения. Мы обнаружили, что время гораздо длиннее или короче, чем 10 минут может уменьшить соотношение сигнала к фон. Как показано на рисунке 1 и на рисунке 2, а также в предыдущем исследовании12, кристально четкие изображения, полученные в наших экспериментах. Известный синий сигнал, который четко излагаются ядерные границы является ключом к определения субцеллюлярные распределения ICP0. В вычислительной частью настоящего Протокола один важный шаг является постоянным порога для устранения фона. Успешный окрашивание с высоким соотношением сигнал фон является ключом к нижней линии порог и лучше сигнал контраст. Поддержание постоянной порог для всех образцов в том же эксперимента, однако, является основой для количественного документации ICP0 (рис. 2 и рис. 3).

Протокол также может служить общий инструмент для изучения субцеллюлярные людьми для других вирусных или клеточных белков, когда отсутствует подходящий метод живых изображений. В живых изображений технике клетки находятся в оптимальных физиологической среды для поддержания клеток метаболический статус14,15. Основное требование для живых клеток является дневно обозначить целевого белка, которое может быть достигнуто путем сплавления целевого белка с флуоресцентные метки16, или доставить Флюорофор конъюгированных специфические молекулы для целевого белка17 . В любом случае проблемы может возрасти, если слияние флуоресцентные метки изменения целевого белка свойства или конъюгированные Флюорофор молекула имеет трудно пересечь клеточной мембраны. Фотообесцвечивание, что вызывает повреждение клеток в процессе является дополнительную озабоченность в живых изображений18. Таким образом новые стратегии для преодоления ограничения живых изображений по-прежнему быть границы развития технологий. Протокол, который мы описали здесь обеспечивает временной анализ устойчивого состояния конфокальный изображений, которые может служить в качестве альтернативного средства при надлежащей живых изображений метод недоступен. Метод легко и надежно. Она обеспечивает четкое обнаружение внутриклеточных белков локализации с минимальным фоном. С помощью конфокальной программного обеспечения, мы имеем возможность количественно анализировать процент клеток с различными дистрибутивами целевого белка в популяции клеток и документ движения целевого белка в различных клеточных фаз.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

Мы благодарим финансовой поддержке гранта NIH (RO1AI118992) присуждена Хайдун ГУ. Мы благодарим микроскопии, изображений и Core цитометрии ресурсов (MICR) объекта в Уэйнском Государственном университете для технической поддержки.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cells and viruses
Human Embryonic Lung fibroblasts (HEL Cells) Dr. Thomas E. Shenk (Princeton University) HEL cells were grown in DMEM supplemented with 10% FBS
HSV-1 viral Stock (Strain F) Dr. Bernard Roizman Lab
Medium
Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) Invitrogen  11965-092
Fetal Bovine Serum (FBS) Sigma F0926-500ml
Medium-199 (10x) Gibco 11825-015
Reagents
4- well 11 mm staggered slide Cel-Line/Thermofisher Scientific  30-149H-BLACK
16% Paraformaldehyde solution(w/v) Methanol free Thermo Scientific 28908
Triton X-100 Fisher reagents BP151-1C0
Bovine Serum Abumin (BSA) Calbiochem CAS 9048-46-8
Horse Serum Sigma H1270
Phosphate Buffered Saline (PBS) (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, pH7.4) Dr. Haidong Gu lab
NaCl       Fisher Bioreagent BP358-212
KH2PO4             Fisher Bioreagent BP362-500
KCl              Fisher Scientific  BP366-500
Na2HPO4              Fisher Bioreagent BP332-500
Blocking buffer (PBS with 1% BSA and 5% Horse serum ) Dr. Haidong Gu lab
Rabiit Anti-ICP0 antibody Dr. Haidong Gu lab
PML (PG-M3)-Mouse monoclonal IgG santa Cruz Biotechnology SC-966
Alexa Fluor 594-goat anti-rabbit IgG invitrogen A11012
Alexa Fluor 488-goat anti-mouse IgG invitrogen A11001
Vectashield Mouting medium with DAPI Vector laboratories H-1200
Pasteur pipette Fisher Brand 13-678-20D
Nail Polish Sally Hansen
Equipment
Confocal Microscope Leica SP8
Confocal Software Leica LAS X Application suite
Excel software Microsoft Excel
HERAcell 150i CO2 incubator Thermo Scientific Order code 51026282

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Whitley, R., Kimberlin, D. W., Prober, C. G., et al. Pathogenesis and disease. Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis. Arvin, A., et al. Cambridge University Press. Cambridge, UK. (2007).
  2. Roizman, B., Knipe, D. M., Whitley, R. J., et al. Herpes simplex viruses. Fields' Virology. Knipe, D. M. 6th Edition, Lippincott-Williams & Wilkins. USA. 1823-1897 (2013).
  3. Gu, H. Infected cell protein 0 functional domains and their coordination in herpes simplex virus replication. World Journal of Virology. 5, (1), 1-13 (2016).
  4. Lopez, P., Van Sant, C., Roizman, B. Requirements for the nuclear-cytoplasmic translocation of infected-cell protein 0 of herpes simplex virus 1. Journal of Virology. 75, (8), 3832-3840 (2001).
  5. Kawaguchi, Y., Van Sant, C., Roizman, B. Herpes simplex virus 1 alpha regulatory protein ICP0 interacts with and stabilizes the cell cycle regulator cyclin D3. Journal of Virology. 71, (10), 7328-7336 (1997).
  6. Mullen, M. A., Ciufo, D. M., Hayward, G. S. Mapping of intracellular localization domains and evidence for colocalization interactions between the IE110 and IE175 nuclear transactivator proteins of herpes simplex virus. Journal of Virology. 68, (5), 3250-3266 (1994).
  7. Maul, G. G., Everett, R. D. The nuclear location of PML, a cellular member of the C3HC4 zinc-binding domain protein family, is rearranged during herpes simplex virus infection by the C3HC4 viral protein ICP0. Journal of General Virology. 75, (6), 1223-1233 (1994).
  8. Chelbi-Alix, M. K., de The, H. Herpes virus induced proteasome-dependent degradation of the nuclear bodies-associated PML and Sp100 proteins. Oncogene. 18, (4), 935-941 (1999).
  9. Zheng, Y., Samrat, S. K., Gu, H. A Tale of Two PMLs: Elements Regulating a Differential Substrate Recognition by the ICP0 E3 Ubiquitin Ligase of Herpes Simplex Virus 1. Journal of Virology. 90, (23), 10875-10885 (2016).
  10. Lanfranca, M. P., Mostafa, H. H., Davido, D. J. HSV-1 ICP0: An E3 Ubiquitin Ligase That Counteracts Host Intrinsic and Innate Immunity. Cells. 3, (2), 438-454 (2014).
  11. Zheng, Y., Gu, H. Identification of three redundant segments responsible for herpes simplex virus 1 ICP0 to fuse with ND10 nuclear bodies. Journal of Virology. 89, (8), 4214-4226 (2015).
  12. Samrat, S. K., Ha, B. L., Zheng, Y., Gu, H. Characterization of Elements Regulating the Nuclear-to-Cytoplasmic Translocation of ICP0 in Late Herpes Simplex Virus 1 Infection. Journal of Virology. 92, (2), e01673-e01617 (2018).
  13. Gu, H. What role does cytoplasmic ICP0 play in HSV-1 infection? Future Virology. 13, (6), (2018).
  14. Ettinger, A., Wittmann, T. Fluorescence live cell imaging. Methods Cell Biology. 123, 77-94 (2014).
  15. Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. Live-cell microscopy - tips and tools. Journal of Cell Science. 122, (6), 753-767 (2009).
  16. Chudakov, D. M., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. Fluorescent proteins as a toolkit for in vivo imaging. Trends in Biotechnology. 23, (12), 605-613 (2005).
  17. Teng, K. W., et al. Labeling proteins inside living cells using external fluorophores for microscopy. Elife. 5, e20378 (2016).
  18. Stephens, D. J., Allan, V. J. Light microscopy techniques for live cell imaging. Science. 300, (5616), 82-86 (2003).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics