Tidsmæssig analyse af nukleare til cytoplasmatisk omplantning af en Herpes Simplex Virus 1 Protein af immunfluorescent konfokalmikroskopi

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

ICP0 gennemgår nukleare til cytoplasmatisk translokation under HSV-1 infektion. Den molekylære mekanisme af denne begivenhed er ikke kendt. Her beskriver vi brugen af Konfokal mikroskop som et redskab til at kvantificere ICP0 bevægelse i HSV-1 infektion, der lægger fundamentet for kvantitativt analysere ICP0 omplantning i fremtidige Mekanistiske undersøgelser.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Samrat, S. K., Gu, H. Temporal Analysis of the Nuclear-to-cytoplasmic Translocation of a Herpes Simplex Virus 1 Protein by Immunofluorescent Confocal Microscopy. J. Vis. Exp. (141), e58504, doi:10.3791/58504 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Inficerede celle protein 0 (ICP0) af herpes simplex virus 1 (HSV-1) er en umiddelbar tidlige protein som indeholder en RING-type E3 ubiquitin ligase. Det er ansvarlig for proteasomal nedbrydningen af vært begrænsende faktorer og den efterfølgende viral genaktivering. ICP0 indeholder en kanonisk nukleare lokalisering sekvens (NLS). Det træder kernen umiddelbart efter de novo syntesen og udfører sin anti-værten forsvar funktioner hovedsagelig i kernen. Men, senere i infektion findes ICP0 udelukkende i cytoplasma, tyder på forekomsten af en nuklear til cytoplasmatisk translokation under HSV-1 infektion. Formentlig ICP0 translokation gør det muligt for ICP0 at modulere dens funktioner efter sin subcellulært steder på forskellige infektion faser. For at afgrænse biologiske funktion og regulerende mekanisme af ICP0 nukleare til cytoplasmatisk translokation, har vi ændret en immunfluorescent mikroskopi metode til at overvåge ICP0 handel under HSV-1 infektion. Denne protokol omfatter immunfluorescent farvning, Konfokal mikroskop billedbehandling og nukleare vs cytoplasmatisk distribution analyse. Målet med denne protokol er at tilpasse steady state Konfokal billeder taget i et tidsforløb i en kvantitativ dokumentation af ICP0 bevægelse i hele lytisk infektionen. Vi foreslår, at denne metode kan generaliseres til at analysere kvantitativt nukleare vs cytoplasmatisk lokalisering af andre virale eller cellulære proteiner uden at involvere live imaging-teknologi.

Introduction

Herpes simplex virus 1 (HSV-1) forårsager en bred vifte af mild til svær herpetisk sygdomme herunder herpes labialis, genital herpes, stromale keratitis og hjernebetændelse. Når smittet, etablerer virus en livslang latent infektion i ganglier neuroner. Lejlighedsvis, kan virussen genaktiveres af forskellige årsager såsom feber, stress og immunsuppression1, fører til tilbagevendende herpes-infektion. Inficerede celle protein 0 (ICP0) er en nøglen viral regulator afgørende for både lytisk og latent HSV-1 infektion. Det transactivates downstream virus gener via modvirke vært iboende/iboende antiviral forsvar2,3. ICP0 har en E3 ubiquitin ligase aktivitet, som er rettet mod flere celle faktorer for proteasom-afhængige nedbrydning3. Det interagerer også med forskellige celle veje til at regulere deres aktiviteter og efterfølgende at udligne vært antiviral restriktioner3. ICP0 er kendt for at finde på forskellige subcellulært rum som infektionen provenuet3,4,5. Proteinet har en lysin/arginin-rige nukleare lokalisering signal (NLS) beliggende på rester 500 til 5066. Efter de novo syntesen på tidlige HSV-1 infektion importeres ICP0 straks til kernen. Det er første gang de registreres på en dynamisk nuklear struktur kaldes nukleare område 10 (ND10)7. E3 ubiquitin ligase aktivitet af ICP0 udløser nedbrydningen af ND10 organizer proteiner, promyelocyt leukæmi (PML) protein og plettet protein 100 kDa (Sp100)8,9,10. Efter tabet af organizer proteiner, ND10 nukleare organer er spredt og ICP0 er diffust for at fylde hele kernen4,11.

Interessant, efter udbrud af viral DNA replikation forsvinder ICP0 fra kernen. Det er udelukkende fundet i cytoplasma, hvilket tyder på forekomsten af en nuklear til cytoplasmatisk translokation sent i HSV-1 infektion4,12. Kravet om DNA-replikation indebærer potentielle inddragelse af en sene viral de(n) i lette cytoplasmatisk omplantning af HSV-1 ICP04,12. Tilsyneladende ICP0 handel mellem forskellige rum under infektion giver ICP0 til at modulere dens interaktioner til forskellige cellulære veje i en rumlig-temporal mode, og derfor koordinere sine flere funktioner til fine tune balance mellem lytisk og latent HSV-1 infektion13. For bedre at forstå ICP0 multifunktionalitet og koordinering af ICP0 funktionelle områder i hele den lytisk infektion, dissekeret vi omhyggeligt det molekylære grundlag af den dynamiske ICP0 translokation12. For at gennemføre de Mekanistiske undersøgelser tidligere rapporteret12, har vi anvendt en immunfluorescent farvnings-metode for at visualisere ICP0 subcellulært lokalisering på forskellige infektion status under Konfokal mikroskop. Vi har også udviklet en kvantitativ protokol for at analysere den nukleare vs cytoplasmatisk distribution af ICP0 ved hjælp af en Konfokal software. Befolkningen i HSV-1-inficerede celler var tabuleres i hele infektion faser og tendenser ICP0 bevægelighed blev analyseret, under forskellige biokemiske behandlinger12. Her beskriver vi de detaljerede protokollen at dokumenter ICP0 omplantning i HSV-1 infektion. Vi foreslår, at denne metode kan vedtages som en generel metode til at studere den nukleare vs cytoplasmatisk translokation for andre virale eller cellulære proteiner, der kan tjene som et alternativ til live imaging når den live imaging teknik er uanvendelig grund problemer såsom mærkning metode, signal intensitet eller protein overflod.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. celle såning og virusinfektion

  1. På 20-24 timer før i virusinfektion, frø 5 x 104 af menneskelige embryonale lunge (HEL) fibroblastceller eller andre celler undersøges på et 4-godt 11 mm forskudt dias i vækstmediet (Dulbeccos modificerede Eagle Medium (DMEM) suppleret med 10% føtal kvæg serum (FBS)). Inkuber celler ved 37 ° C med 5% kuldioxid (CO2).
    Bemærk: Hver godt bør have 70-80% celle confluency på tidspunktet for infektion.
  2. Den næste dag, fjerne vækstmediet og inficere celler med virus i Medium-199 ved en række 4-10 pfu/celle. Inkuber virus-inficerede celler i 1 timer ved 37 ° C. Holde ryste diasset under inkubationstiden.
  3. Efter inkubationen 1 h fjerne Medium-199 og supplere med vækstmediet.
    Bemærk: Narkotika, der interfererer med forskellige infektion faser kan tilføjes på dette trin eller forud for viral absorption.
  4. Inkuber de virus-inficerede celler ved 37 ° C med 5% CO2 for forskellige længder af infektion periode.

2. fiksering og Permeabilization

  1. På ordentlig infektion tid, hurtigt vaske de inficerede celler med fosfatbufferet saltopløsning (PBS) 3 gange og tilsæt 200 μl af 4% PARAFORMALDEHYD frisklavet i PBS. Inkuber celler med PARAFORMALDEHYD for 8-10 min. ved stuetemperatur til at fastsætte cellerne i hver brønd.
  2. Opsug PARAFORMALDEHYD og brøndene vaskes med 200 μl af PBS for 3 gange. Helt Aspirér PBS efter 3rd vask.
  3. Tilsæt 100 μL af 0,2% nonionisk overfladeaktivt stof til hver brønd permeabilize celler i 5-10 min.
  4. Opsug det nonioniske overfladeaktive stof og brøndene vaskes med 200 μl af PBS for 3 gange.

3. immunfluorescent farvning

  1. Helt Aspirér PBS og tilføje 200 μl blokerende buffer (1% bovint serumalbumin (BSA) og 5% hest serum i PBS) i hver brønd og Inkuber ved stuetemperatur i 1 time eller ved 4 ° C natten over.
  2. Tilføje eksperimentelt bestemte koncentration af primære antistof (kanin anti-ICP0 polyklonale antistof12) i blokerende buffer, og der inkuberes primære antistof ved stuetemperatur i 2 timer eller ved 4 ° C natten over.
  3. Vask med blokerende buffer 3 gange med 10 min inkubation. Tilføje Alexa 594-konjugeret gede anti-kanin sekundær antistof (1: 400 fortyndet i blokerende buffer) og glassene inkuberes ved stuetemperatur i 1 time. Derefter vaskes dias 3 gange med blokerende buffer på 10 min interval.
  4. Endelig vaske diaset én gang med PBS til at fjerne resterende BSA og hest serum.
  5. Tilføj en dråbe af antifade montering medium med 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) til mount diaset og forsegle det med coverslip ved hjælp af gennemsigtige neglelak.

4. Konfokal Imaging

  1. Med en Konfokal mikroskop, bølgelængden på 590 – 650 nm for Alexa 594 og 410-520 nm for DAPI. Vælg billedformat på 1024 x 1024 og linje gennemsnit af 8 at erhverve billeder i høj opløsning.
  2. Analysere hver brønd på 4-godt slide under Konfokal mikroskop. Erhverve repræsentative celle billeder under målet om 100 X, som vist i figur 1 og figur 2.
  3. Til optælling af stort antal celler, tage billeder af på hinanden følgende felter under målet om 40 X.
    Bemærk: Det kræver 5-10 billeder at akkumulere over 200 inficerede celler fra hvert tidspunkt af hver infektion.
  4. I hvert forsøg, tage billeder med konstant Konfokal parametre for alle prøver skal sammenlignes.

5. analysere nukleare vs cytoplasmatisk Distribution

  1. Åbn projektet med Konfokal applikationsprogrammel. Vælg et billede, hvorfra cellerne behøver for at være i tabelform for nukleare vs cytoplasmatisk fordeling af ICP0.
  2. Klik på fanen "Mængde" fra topmenuen og vælg "sortere ROIs" fra menuen Funktioner.
  3. Trække en langsgående linje på tværs af cellen skal analyseres ved valg af "Tegne streg" fra øverste menu.
    Bemærk: Histogrammet vises viser fluorescens-intensiteten langs linjen for både ICP0 og DAPI. I histogrammet, blå linje repræsenterer DAPI pixels og markerer grænsen af kernen, mens den røde linje repræsenterer ICP0 pixel.
  4. Baseret på baggrunden farvning, angive en konstant tærskel for ICP0 intensitet til at analysere ICP0 subcellulært distribution i hvert forsøg.
    1. Som eksemplificeret i figur 2, hvis røde signal i gennemsnit ligger under tærsklen for det nukleare område men er tærskel ud over den blå grænse, kategorisere det røde signal som overvejende ligger i cytoplasmaet.
    2. Hvis den røde signal over tærsklen i hele kernen og ud over grænsen for blå signal, gruppere det røde signal som kernen plus cytoplasmatisk lokalisering.
    3. Hvis det røde signal er tærskel i kernen men gennemsnitligt er lavere end det uden det blå signal, gruppere det røde signal som nukleare lokalisering.
  5. Tabulate mere end 200 inficerede celler fra hver prøve på forskellige infektion tid og plot i søjlediagram til at illustrere ICP0 bevægelse efter tid (figur 3).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

For at forstå de molekylære grundlag og biologiske funktion af ICP0 menneskehandel under HSV-1 infektion, bruger vi en immunfluorescent mikroskopi metode til at analysere ICP0 subcellulært fordeling på forskellige infektion faser. Figur 1 viser de repræsentative celler med karakteristisk ICP0 lokalisering som infektion skrider frem. For at opgøre nukleare til cytoplasmatisk omplantning af ICP0, vi analyserer ICP0 fordeling i forhold til kernen af kategorisering inficerede celler i tre grupper: nukleare lokalisering, cytoplasmatisk lokalisering og nukleare plus cytoplasmatisk lokalisering ( Figur 2). For at forstå elementer, som kræves til ICP0 handel under infektion, spore vi ICP0 bevægelser i vildtype eller mutant HSV-1 på forskellige infektion faser. Figur 3 viser et eksempel på opgørelsen resultater for subcellulært fordeling af ICP0 for forskellige tidspunkt af infektion.

Figure 1
Figur 1: dynamisk handel med ICP0 under HSV-1 infektion. HEL celler dyrkes på 4-godt dias var smittet med prototype HSV-1 (stamme F) på 10 pfu/celle. På 1, 5 og 9 h efter infektion (hpi), var celler fast permeabilized, og reageret på kanin anti-ICP0 og mus anti-PML primære antistoffer og derefter reagerede Alexa 594-konjugerede anti-kanin og Alexa 488-cojugated anti-mus sekundære antistoffer for Imaging under 100 X mål. Promyelocyt leukæmi (PML) protein tjener som en markør protein for ND10 nukleare kroppe, der forsvinder på 5 og 9 hpi på grund af PML nedbrydning i infektion. Skalalinjen = 10 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2: analyse af ICP0 subcellulært distribution. Venstre panel: med en Konfokal mikroskop, repræsentative celler blev udvidet til at vise den langsgående linje på tværs af den celle, der definerer regionen af interesse (ROI). Højre panel: fluorescens pixel støtteintensiteter i ROI var tal for både ICP0 og DAPI i enkelte celler og illustreret som histogrammer af Konfokal overførelse programmel. En vilkårlig grænse (grøn linje) blev sat til at afspejle den baggrund farvning. Skalalinjen = 10 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3: procentdel af subcellulært distribution for wild-type og C-terminale afkortet ICP0. HEL celler blev smittet af rekombinant vira der indeholder wild-type ICP0 (ICP0 WT) eller C-terminale afkortet ICP0 (ICP0 C-trunkering) på 4 pfu/celle. På angivne tidspunkter, blev celler farves og analyseret som beskrevet ovenfor. Over 200 celler var i tabelform for ICP0 placering. Procentdel af celler, der indeholder nukleare, cytoplasmatisk eller nukleare + cytoplasmatisk ICP0 var afbildet med en regneark beregning software. Dette er en eksemplarisk eksperiment for at vise, at du bruger denne metode, har vi identificeret ICP0 C-terminus som et domæne, der er nødvendige for ICP0 nukleare til cytoplasmatisk translokation. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Denne protokol er blevet brugt til at studere atomare til cytoplasmatisk omplantning af HSV-1 ICP0. ICP0 gennemgår subcellulært handel under HSV-1 infektion (figur 1). Sandsynligt, ICP0 interagerer med forskellige celle veje til at udføre forskellige opgaver på forskellige steder. Dette gør det muligt for ICP0 at finjustere sin flere funktioner i tovtrækkeri med menneskelig vært13. Men, hvordan ICP0 koordinerer den mangfoldig funktioner i en rumlig-temporale måde er ikke blevet godt undersøgt. Med fluorescerende mikroskopi protokollen beskrevet ovenfor, begyndte vi at analysere det molekylære grundlag af ICP0 nukleare til cytoplasmatisk translokation. Nu har vi identificeret ICP0 C-terminale 35 aminosyrer som et nødvendigt element vigtigt for denne translokation. I mangel af C-terminus er ICP0 tilbageholdende i kernen i hele infektion (figur 3). Vi har også konstateret, at en ICP0 E3 ligase-afhængige nukleare fastholdelse kraft forsinkelser den nukleare-til-cytoplasmatisk omplantning i U2OS celler12. Desuden har vi opdaget at ICP0 C-terminus og udtryk for sent virusproteiner samarbejde om at overvinde den nukleare fastholdelse og lette cytoplasmatisk translokation12. I øjeblikket vi bruger denne protokol til skærmen for de sene virale proteiner involveret i ICP0 nukleare til cytoplasmatisk omplantning.

Protokollen blev oprindeligt udviklet for at studere det dynamiske handel med ICP0 i HSV-1 infektion. Som vist i figur 1, tidligt i HSV-1 infektion, colocalized ICP0 med ND10, hvor flere centrale komponenter af cellulære begrænsende faktorer og ND10 komponenter såsom PML og Sp1008, er nedbrudt. Efter nedværdigende ND10 vigtigste bestanddele, ICP0 diffunderer hele kernen og sent i infektionen, ICP0 er omplantes til cytoplasma. Fordi ICP0 gennemgår de novo syntesen efter infektion, den oprindelige protein overflod er meget lav og derefter en robust viral syntese vil hurtigt overskygge den bevægelighed for alle enkelte molekyler, som gør det vanskeligt at spore et enkelt molekyle ved hjælp af Live imaging-teknologi. Derfor, vi bevidst valgte ikke at bruge live imaging. I stedet, vi vedtog den ovennævnte protokol for at studere steady state ICP0 lokaliseringen på forskellige infektion punkter, der tjente os godt i sporing af ICP0 tidsmæssige bevægelser i en population af HSV-1-inficerede celler.

For et højt signal til baggrund forhold i Konfokal analyse er to kritiske trin bemærkelsesværdige i den våde-bænk del af denne protokol. Først, de 4-godt forskudt dias tillade flere prøver skal håndteres på et enkelt dias. Det sparer meget brugen af dyrebare reagenser som virus og antistoffer. Men fordi afholdt i hver brønd er så lille, resterende buffer ikke helt ryddet under buffer ændringer kan interferere med den efterfølgende reagens. Derfor, i hver buffer switch, en grundig aspiration er nødvendig før du tilføjer en ny buffer. Anden, baseret på vores erfaringer, omfanget af celle crosslinking og membran permeabilitet er vigtigt for klarheden af fluorescens signaler. Vi har sat en empirisk antal 10 min for både PARAFORMALDEHYD og nonionisk overfladeaktivt behandlinger. Vi fandt dengang meget længere eller kortere end 10 min kan falde signal til baggrund forholdet. Som vist i figur 1 og figur 2, samt i en tidligere undersøgelse12, er billeder fås i vores eksperimenter krystalklar. Den fremtrædende blå signal, der klart skitserer den nukleare grænse er afgørende for at subcellulært fordelingen af ICP0. I den beregningsmæssige del af denne protokol er et afgørende skridt til at indstille en konstant grænse til at fjerne baggrunden. En vellykket farvning med højt signal til baggrund forhold er nøglen til en lavere tærskel linje og bedre signal kontrast. At holde en konstant tærskel for alle prøver i det samme eksperiment, dog er grundlaget for den kvantitative dokumentation af ICP0 (figur 2 og figur 3).

Protokollen kan også tjene som et generelt redskab til at studere subcellulært handel for andre virale eller cellulære proteiner når en egnet live billedbehandling metode mangler. Live imaging teknik holdes celler på optimal fysiologiske miljø til at opretholde celle metaboliske status14,15. En grundlæggende forudsætning for en levende celle imaging er fluorescently etiketten target proteinet, som kan opnås ved at fusionere target proteinet med en fluorescerende tag16, eller til at levere en fluorophore konjugeret molekyle specifikke for target proteinet17 . I begge tilfælde kan problemer stige hvis fusion af fluorescerende tag ændrer destinationsegenskab protein eller fluorophore konjugeret molekyle har svært ved at krydse cellemembranen. Photobleaching, der forårsager celleskader i processen er en yderligere bekymring i live imaging18. Derfor, nye strategier til at overvinde begrænsningen af live imaging fortsat være grænsen for teknologiudvikling. Protokollen beskrev vi her giver tidsmæssige analyse af steady state Konfokal billeder, som kan tjene som en alternativ værktøj, når en ordentlig live billedbehandling metode er ikke tilgængelig. Metoden er nem og pålidelig. Det giver klar påvisning af protein subcellulært lokalisering med minimum baggrund. Brug Konfokal software, er vi købedygtig kvantitativt analysere procentdelen af celler med forskellige distributioner af target proteinet i en celle population og dokumentere bevægelse af target protein på forskellige celle faser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgements

Vi takker økonomisk støtte fra en NIH tilskud (RO1AI118992) tildeles Haidong Gu. Vi takker mikroskopi, Imaging & flowcytometri ressourcer (MICR) Core facilitet på Wayne State University teknisk support.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cells and viruses
Human Embryonic Lung fibroblasts (HEL Cells) Dr. Thomas E. Shenk (Princeton University) HEL cells were grown in DMEM supplemented with 10% FBS
HSV-1 viral Stock (Strain F) Dr. Bernard Roizman Lab
Medium
Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) Invitrogen  11965-092
Fetal Bovine Serum (FBS) Sigma F0926-500ml
Medium-199 (10x) Gibco 11825-015
Reagents
4- well 11 mm staggered slide Cel-Line/Thermofisher Scientific  30-149H-BLACK
16% Paraformaldehyde solution(w/v) Methanol free Thermo Scientific 28908
Triton X-100 Fisher reagents BP151-1C0
Bovine Serum Abumin (BSA) Calbiochem CAS 9048-46-8
Horse Serum Sigma H1270
Phosphate Buffered Saline (PBS) (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, pH7.4) Dr. Haidong Gu lab
NaCl       Fisher Bioreagent BP358-212
KH2PO4             Fisher Bioreagent BP362-500
KCl              Fisher Scientific  BP366-500
Na2HPO4              Fisher Bioreagent BP332-500
Blocking buffer (PBS with 1% BSA and 5% Horse serum ) Dr. Haidong Gu lab
Rabiit Anti-ICP0 antibody Dr. Haidong Gu lab
PML (PG-M3)-Mouse monoclonal IgG santa Cruz Biotechnology SC-966
Alexa Fluor 594-goat anti-rabbit IgG invitrogen A11012
Alexa Fluor 488-goat anti-mouse IgG invitrogen A11001
Vectashield Mouting medium with DAPI Vector laboratories H-1200
Pasteur pipette Fisher Brand 13-678-20D
Nail Polish Sally Hansen
Equipment
Confocal Microscope Leica SP8
Confocal Software Leica LAS X Application suite
Excel software Microsoft Excel
HERAcell 150i CO2 incubator Thermo Scientific Order code 51026282

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Whitley, R., Kimberlin, D. W., Prober, C. G., et al. Pathogenesis and disease. Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis. Arvin, A., et al. Cambridge University Press. Cambridge, UK. (2007).
  2. Roizman, B., Knipe, D. M., Whitley, R. J., et al. Herpes simplex viruses. Fields' Virology. Knipe, D. M. 6th Edition, Lippincott-Williams & Wilkins. USA. 1823-1897 (2013).
  3. Gu, H. Infected cell protein 0 functional domains and their coordination in herpes simplex virus replication. World Journal of Virology. 5, (1), 1-13 (2016).
  4. Lopez, P., Van Sant, C., Roizman, B. Requirements for the nuclear-cytoplasmic translocation of infected-cell protein 0 of herpes simplex virus 1. Journal of Virology. 75, (8), 3832-3840 (2001).
  5. Kawaguchi, Y., Van Sant, C., Roizman, B. Herpes simplex virus 1 alpha regulatory protein ICP0 interacts with and stabilizes the cell cycle regulator cyclin D3. Journal of Virology. 71, (10), 7328-7336 (1997).
  6. Mullen, M. A., Ciufo, D. M., Hayward, G. S. Mapping of intracellular localization domains and evidence for colocalization interactions between the IE110 and IE175 nuclear transactivator proteins of herpes simplex virus. Journal of Virology. 68, (5), 3250-3266 (1994).
  7. Maul, G. G., Everett, R. D. The nuclear location of PML, a cellular member of the C3HC4 zinc-binding domain protein family, is rearranged during herpes simplex virus infection by the C3HC4 viral protein ICP0. Journal of General Virology. 75, (6), 1223-1233 (1994).
  8. Chelbi-Alix, M. K., de The, H. Herpes virus induced proteasome-dependent degradation of the nuclear bodies-associated PML and Sp100 proteins. Oncogene. 18, (4), 935-941 (1999).
  9. Zheng, Y., Samrat, S. K., Gu, H. A Tale of Two PMLs: Elements Regulating a Differential Substrate Recognition by the ICP0 E3 Ubiquitin Ligase of Herpes Simplex Virus 1. Journal of Virology. 90, (23), 10875-10885 (2016).
  10. Lanfranca, M. P., Mostafa, H. H., Davido, D. J. HSV-1 ICP0: An E3 Ubiquitin Ligase That Counteracts Host Intrinsic and Innate Immunity. Cells. 3, (2), 438-454 (2014).
  11. Zheng, Y., Gu, H. Identification of three redundant segments responsible for herpes simplex virus 1 ICP0 to fuse with ND10 nuclear bodies. Journal of Virology. 89, (8), 4214-4226 (2015).
  12. Samrat, S. K., Ha, B. L., Zheng, Y., Gu, H. Characterization of Elements Regulating the Nuclear-to-Cytoplasmic Translocation of ICP0 in Late Herpes Simplex Virus 1 Infection. Journal of Virology. 92, (2), e01673-e01617 (2018).
  13. Gu, H. What role does cytoplasmic ICP0 play in HSV-1 infection? Future Virology. 13, (6), (2018).
  14. Ettinger, A., Wittmann, T. Fluorescence live cell imaging. Methods Cell Biology. 123, 77-94 (2014).
  15. Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. Live-cell microscopy - tips and tools. Journal of Cell Science. 122, (6), 753-767 (2009).
  16. Chudakov, D. M., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. Fluorescent proteins as a toolkit for in vivo imaging. Trends in Biotechnology. 23, (12), 605-613 (2005).
  17. Teng, K. W., et al. Labeling proteins inside living cells using external fluorophores for microscopy. Elife. 5, e20378 (2016).
  18. Stephens, D. J., Allan, V. J. Light microscopy techniques for live cell imaging. Science. 300, (5616), 82-86 (2003).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics