Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
أولا، ضع منصات الدهون الثديية أو MFPs في طبق مع حل تريبسين-EDTA واحتضان لمدة المرجوة لكسر الالتصاقات مصفوفة الخلية. غسل MFPs مع الماء deionized وسلالة من خلال مصفاة. وضع الأنسجة في كوب مع شريط اثارة وإضافة تريتون X-100. يحرك المزيج إلى خلايا الليس دون التأثير على عوامل النمو في مصفوفة الأنسجة خارج الخلية.
سلالة MFPs وشطف مع الماء deionized. نقل الأنسجة مرة أخرى إلى الكأس، وإضافة حمض ديوكسيكوليك لإليزيه الخلايا المتبقية. بعد ذلك، سلالة MFPs ومكان في كوب يحتوي على المياه deionized مع البنسلين-streptomycin لمنع التلوث. احتضان الكأس في 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها.
سلالة MFPs ووضعها في كوب يحتوي على الإيثانول وحمض البيرسيت. يزيد حمض العلل من صلابة مصفوفة الأنسجة خارج الخلية. اثارة لبعض الوقت وتكرار الخطوة المجهدة. غسل MFPs مع برنامج تلفزيوني ومن ثم مع المياه deionized. نقل MFPs المتوترة إلى كوب يحتوي على البروبان-1-رأ.
اثارة لبعض الوقت، سلالة محتويات، وغسل MFPs مع الماء deionized. تجفيف MFPs وتخزينها في ناقص 80 درجة مئوية. في البروتوكول التالي، سوف نقوم بإجراء decellularization من منصات الدهون الثديية مورين.
أولا ، ضع MFPs في أطباق ستة سنتيمترات مع خمسة ملليلترات من محلول Trypsin-EDTA. رش ومسح الأطباق مع الإيثانول 70٪ واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. استخدام 0.7 ملليمتر مصفاة لغسل MFPs مع الماء deionized عن طريق صب الماء على الأنسجة ثلاث مرات. استخدام ملقط لتدليك الأنسجة يدويا بين يغسل.
بعد ذلك ، قم بتجفيف الأنسجة لفترة وجيزة على مسح مهمة حساسة ووزنها. ضع الأنسجة المجففة في كوب ما قبل الاوتوسلاف يحتوي على شريط تحريك مناسب الحجم ، وغط الأنسجة ب 60 ملليلتر من 3٪ t-octylphenoxy polyethoxyethanol لكل غرام من الأنسجة. يحرك المزيج لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ثم، تفريغ محتويات الأكواب في مصفاة.
شطف الكأس بالماء deionized وصب هذا على الأنسجة. كرر عملية الشطف هذه مرتين أخريين ، مع التأكد من استخدام ملقط لتدليك الأنسجة يدويا بين الشطف. بعد ذلك، تجفيف الأنسجة لفترة وجيزة على مسح مهمة حساسة ووزنها. وضع الأنسجة والحانات اثارة مرة أخرى إلى نفس الأكواب وتغطيتها مع 60 ملليلتر من حمض ديوكسيكوليك 4٪ لكل غرام من الأنسجة. يحرك المزيج في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة.
بعد ذلك ، تفريغ محتويات الكأس في مصفاة شبكة. شطف الكأس بالماء deionized وصب هذا على الأنسجة. كرر عملية الشطف هذه مرتين أخريين ، مع التأكد من استخدام ملقط لتدليك الأنسجة يدويا بين الشطف. تجفيف لفترة وجيزة الأنسجة المشطفة على مسح مهمة حساسة ووزنها.
وضع الأنسجة المجففة في نفس الكأس جنبا إلى جنب مع المياه الديوينية الطازجة تكملها 1٪ من العقديات البنسلين. تغطية الكأس بإحكام مع فيلم البارافين وترك في 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها. في اليوم التالي، استنزاف محتويات الكأس في مصفاة. تجفيف الأنسجة لفترة وجيزة على مسح مهمة حساسة ووزنها. ثم ضع MFPs في نفس الكأس مع شريط تحريك مناسب الحجم.
تغطية الأنسجة مع 60 ملليلتر من محلول يحتوي على 4٪ الإيثانول و 0.1٪ حمض البيرسيت لكل غرام من الأنسجة. يحرك المزيج في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. تفريغ محتويات الكأس في مصفاة 0.7 ملليمتر. استخدام ملقط لتدليك الأنسجة يدويا ووضع محتويات مرة أخرى في الكأس. غسل الأنسجة عن طريق تغطيتها مع 60 ملليلتر من برنامج تلفزيوني 1X لكل غرام من الأنسجة.
يحرك المزيج في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. كرر عملية الغسيل هذه مرة أخرى. بعد ذلك ، تفريغ محتويات الكأس في مصفاة 0.7 ملليمتر. باستخدام ملقط، تدليك يدويا الأنسجة ووضع محتويات مرة أخرى في الكأس. غسل الأنسجة عن طريق تغطيتها مع 60 ملليلتر من الماء deionized لكل غرام من الأنسجة.
يحرك المزيج في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. كرر عملية الغسيل هذه مرة أخرى. تجفيف الأنسجة المغسولة لفترة وجيزة على مسح مهمة حساسة ووزنها. تفريغ الأنسجة والمحتويات في مصفاة واستخدام ملقط لتدليك الأنسجة يدويا. وضع محتويات مرة أخرى في الكأس وتغطية الأنسجة مع 60 ملليلتر من 100٪ ن بروبانول لكل غرام من الأنسجة.
يحرك المزيج في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. ثم، تجفيف الأنسجة لفترة وجيزة على مسح مهمة حساسة ووزنها. تفريغ الأنسجة والمحتويات في مصفاة 0.7 ملليمتر واستخدام ملقط لتدليك الأنسجة يدويا. ضع المحتويات مرة أخرى في الكأس وغسل الأنسجة عن طريق تغطيتها ب 60 ملليلتر من الماء المؤين لكل غرام من الأنسجة.
يحرك المزيج في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. كرر عملية الغسيل هذه ثلاث مرات. بعد ذلك، تجفيف الأنسجة لفترة وجيزة على مسح مهمة حساسة ووزنها. نقل الأنسجة إلى أنبوب المسمى 15 ملليلتر وتجميد في 80 درجة مئوية سلبية بين عشية وضحاها.
