Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
सबसे पहले, ट्रिप्सिन-ईडीटीए समाधान के साथ एक डिश में मैमेरी फैट पैड या एमएफपी रखें और सेल मैट्रिक्स आसंजन को तोड़ने के लिए वांछित अवधि के लिए इनक्यूबेट करें। एक छलनी के माध्यम से डिवोनाइज्ड पानी और तनाव के साथ एमएफपी धोएं। एक हलचल बार के साथ एक बीकर में ऊतकों प्लेस और ट्राइटन एक्स-100 जोड़ें। ऊतक के बाह्लू मैट्रिक्स में विकास कारकों को प्रभावित किए बिना कोशिकाओं को lyse करने के लिए हिलाओ।
एमएफपी को तनाव दें और पानी से कुल्ला करें। ऊतकों को वापस बीकर में स्थानांतरित करें, और शेष कोशिकाओं को lyse करने के लिए डिऑक्सीबोलिक एसिड जोड़ें। इसके बाद, एमएफपी को तनाव दें और संदूषण को रोकने के लिए पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ डिएक्रिनयुक्त पानी युक्त बीकर में रखें। रात भर 4 डिग्री सेल्सियस पर बीकर इनक्यूबेट।
एमएफपी को तनाव दें और उन्हें इथेनॉल और पेरासेटिक एसिड युक्त बीकर में रखें। पर्सेकेटिक एसिड टिश्यू के एक्सपेरिमेंटल मैट्रिक्स की अकड़न को बढ़ाता है। कुछ समय के लिए हिलाओ और तनाव कदम दोहराएं। एमएफपी को पीबीएस से धोएं और फिर डिवियोनाइज्ड वॉटर से धोएं। तनावपूर्ण एमएफपी को प्रोपेन-1-ओलिंपिक्स युक्त बीकर में स्थानांतरित करें।
कुछ समय के लिए हिलाओ, सामग्री को तनाव दें, और एमएफपी को डिओनाइज्ड पानी से धोएं। एमएफपी को सुखाकर माइनस 80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम मुरीन स्तन वसा पैड का डिसेल्युलराइजेशन करेंगे।
सबसे पहले, एमएफपी को छह सेंटीमीटर व्यंजनों में ट्राइप्सिन-ईडीटीए समाधान के पांच मिलीलीटर के साथ रखें। स्प्रे और 70% इथेनॉल के साथ व्यंजन पोंछ और एक घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट। तीन बार टिश्यू के ऊपर पानी डालकर एमएफपी को डिवोनाइज्ड वॉटर से धोने के लिए 0.7 मिलीमीटर छन्नी का इस्तेमाल करें। वॉश के बीच में ऊतक की मैन्युअल रूप से मालिश करने के लिए संदंश का उपयोग करें।
इसके बाद, एक नाजुक कार्य पर ऊतक को संक्षेप में सुखा लें और उसका वजन करें। सूखे ऊतकों को एक पूर्व-ऑटोक्लेवेड बीकर में रखें जिसमें एक उपयुक्त आकार का हलचल बार होता है, और ऊतकों के प्रति ग्राम 3% टी-ऑक्टिलफेनॉक्सी पॉलीऑक्सीथेलॉल के 60 मिलीलीटर के साथ ऊतकों को कवर करें। कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए हिलाओ । फिर, बीकर्स सामग्री को छलनी में डंप करें।
डीशनाइज्ड पानी के साथ बीकर कुल्ला और ऊतकों पर यह डालना। इस रिंसिंग प्रक्रिया को दो बार और दोहराएं, जिससे कुल्ला के बीच में ऊतक की मैन्युअल रूप से मालिश करने के लिए संदंश का उपयोग करना सुनिश्चित करें। इसके बाद, एक नाजुक कार्य पोंछ और वजन पर ऊतक को संक्षेप में सुखा लें। ऊतकों और हलचल सलाखों को एक ही बीकर्स में वापस रखें और उन्हें ऊतक के ग्राम प्रति 4% डिऑक्सीबोलिक एसिड के 60 मिलीलीटर के साथ कवर करें। एक घंटे के लिए कमरे के तापमान पर हिलाओ।
इसके बाद, बीकर की सामग्री को एक जाल छलनी में डंप करें। डीशनाइज्ड पानी के साथ बीकर कुल्ला और ऊतकों पर यह डालना। इस रिंसिंग प्रक्रिया को दो बार और दोहराएं, जिससे कुल्ला के बीच में ऊतक की मैन्युअल रूप से मालिश करने के लिए संदंश का उपयोग करना सुनिश्चित करें। संक्षेप में एक नाजुक कार्य पोंछ पर कुल्ला ऊतक सूखी और यह वजन।
सूखे ऊतकों को एक ही बीकर में रखें ताजा डिएकाइज्ड पानी के साथ 1% पेनिसिलिन स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक। बीच को पैराफिन फिल्म से कसकर ढकें और रात भर 4 डिग्री सेल्सियस पर छोड़ दें। अगले दिन, बीकर सामग्री को छलनी में छान लें। संक्षेप में एक नाजुक कार्य पोंछ पर ऊतक सूखी और यह वजन। फिर, एक उपयुक्त आकार हलचल बार के साथ एक ही बीकर में MFPs जगह है ।
ऊतक के प्रति ग्राम 4% इथेनॉल और 0.1% पेरासेटिक एसिड वाले समाधान के 60 मिलीलीटर के साथ ऊतक को कवर करें। दो घंटे के लिए कमरे के तापमान पर हिलाओ। बीकर की सामग्री को 0.7 मिलीमीटर छन्नी में डंप करें। ऊतक की मैन्युअल रूप से मालिश करने के लिए संदंश का उपयोग करें और सामग्री को वापस बीकर में रखें। ऊतक के प्रति ग्राम 1X पीबीएस के 60 मिलीलीटर के साथ इसे कवर करके ऊतक को धोएं।
15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर हिलाओ। इस पूरी धुलाई प्रक्रिया को एक बार और दोहराएं। इसके बाद, बीकर की सामग्री को 0.7 मिलीमीटर छलनी में डंप करें। संदंश का उपयोग करना, मैन्युअल रूप से ऊतक की मालिश करें और सामग्री को बीकर में वापस रखें। ऊतक के प्रति ग्राम डिएकोनाइज्ड पानी के 60 मिलीलीटर के साथ इसे कवर करके ऊतक को धोएं।
15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर हिलाओ। इस पूरी धुलाई प्रक्रिया को एक बार और दोहराएं। संक्षेप में एक नाजुक कार्य पोंछ पर धोया ऊतक सूखी और यह वजन। ऊतक और सामग्री को छलनी में डंप करें और ऊतक की मैन्युअल रूप से मालिश करने के लिए संदंश का उपयोग करें। सामग्री को वापस बीकर में रखें और ऊतकों के प्रति ग्राम 100% एन-प्रोपनॉल के 60 मिलीलीटर के साथ ऊतकों को कवर करें।
एक घंटे के लिए कमरे के तापमान पर हिलाओ। फिर, संक्षेप में एक नाजुक कार्य पर ऊतक को सुखा लें और उसका वजन करें। ऊतक और सामग्री को 0.7 मिलीमीटर छन्नी में डंप करें और ऊतक की मैन्युअल रूप से मालिश करने के लिए संदंश का उपयोग करें। सामग्री को वापस बीकर में रखें और ऊतक के प्रति ग्राम 60 मिलीलीटर डिएकोन्ड पानी के साथ कवर करके ऊतक को धोएं।
15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर हिलाओ। इस वॉश प्रोसेस को तीन बार दोहराएं। इसके बाद, एक नाजुक कार्य पर ऊतक को संक्षेप में सुखा लें और उसका वजन करें। ऊतक को एक लेबल 15 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें और रात भर नकारात्मक 80 डिग्री सेल्सियस पर फ्रीज करें।
