脱細胞化乳脂肪パッド:乳腺脂肪パッドから細胞外マトリックスヒドロゲルを導出する

まず、トリプシン-EDTA溶液を含む皿に乳腺脂肪パッドまたはMFPを入れ、所望の持続時間インキュベートして細胞マトリックスの接着を断ち切る。脱イオン水でMfPsを洗浄し、ストレーナーを通してひずみます。攪拌バーとビーカーに組織を入れ、トリトンX-100を追加します。組織の細胞外マトリックスの成長因子に影響を与えずに細胞を溶かします。

MFPをひずみ、脱イオン水ですすいすいます。ビーカーに組織を戻し、残りの細胞を溶解するためにデオキシコール酸を加える。次に、MFPを歪め、デイオン化水を含むビーカーにペニシリンストレプトマイシンを入れて汚染を防ぎます。一晩で摂氏4度でビーカーをインキュベートします。

MFPをひずみ、エタノールと過酢酸を含むビーカーに入れます。過酢酸は、組織の細胞外マトリックスの剛性を増加させます.しばらくの間かき混ぜ、緊張ステップを繰り返します。PBSでMMPを洗い、次に脱イオン水で洗います。緊張したMMPをプロパン-1-olを含むビーカーに移します。

しばらくの間かき混ぜ、内容物をひずみ、脱イオン水でMMPを洗います。MFPを乾燥させ、マイナス80度で保管します。以下のプロトコルでは、マウス乳腺脂肪パッドの脱細胞化を行います。

まず、MMPを5ミリリットルのトリプシン-EDTA溶液で6センチメートルの皿に入れる。70%エタノールで皿をスプレーして拭き取り、摂氏37度で1時間インキュベートします。0.7ミリメートルのストレーナーを使用して、組織の上に3回水を注ぐことによって脱イオン水でMMPを洗浄します。鉗子を使用して、手動で、その間に組織をマッサージします。

次に、繊細なタスクワイプでティッシュを簡単に乾燥させ、それを計量します。乾燥組織を適切なサイズの攪拌棒を含むオートクレーブビーカーに入れ、組織1グラムあたり3%t-オクチルフェノキシポリエトキシエタノールの60ミリリットルで組織を覆う。室温で1時間かき混ぜます。その後、ビーカーの内容物をストレーナーにダンプします。

ビーカーを脱イオン水ですすいで、これを組織に注ぎます。このすすめプロセスをさらに2回繰り返し、鉗子を使用してリンスの間の組織を手動でマッサージしてください。この後、繊細なタスクワイプでティッシュを簡単に乾燥させ、重量を量る。組織と攪拌棒を同じビーカーに戻し、組織の1グラム当たり4%デオキシコール酸の60ミリリットルでそれらをカバーします。室温で1時間かき混ぜます。

次に、ビーカーの内容物をメッシュストレーナーにダンプします。ビーカーを脱イオン水ですすいで、これを組織に注ぎます。このすすめプロセスをさらに2回繰り返し、鉗子を使用してリンスの間の組織を手動でマッサージしてください。繊細なタスクワイプですすった組織を簡単に乾燥させ、重量を量ります。

乾燥した組織を同じビーカーに入れ、1%ペニシリンストレプトマイシンを補充した新鮮な脱イオン水と一緒に入れます。ビーカーをパラフィンフィルムでしっかりと覆い、一晩摂氏4度で放置します。翌日、ビーカーの内容物をストレーナーに排出します。繊細なタスクワイプでティッシュを簡単に乾燥させ、それを量ります。次に、適切なサイズのスターバーを持つ同じビーカーにMMPを入れてください。

4%エタノールと0.1%の過酢酸を含む溶液の60ミリリットルの組織を覆う。室温で2時間かき混ぜます。ビーカーの内容物を0.7ミリメートルのストレーナーにダンプします。鉗子を使用して、組織を手動でマッサージし、内容物をビーカーに戻します。組織のグラムあたり1X PBSの60ミリリットルでそれをカバーすることによって、組織を洗浄します。

室温で15分間かき混ぜます。この洗浄プロセス全体をもう一度繰り返します。次に、ビーカーの内容物を0.7ミリメートルのストレーナーにダンプします。鉗子を使用して、ティッシュを手動でマッサージし、ビーカーに戻す。組織のグラム当たり60ミリリットルの脱イオン水で覆うことによって組織を洗います。

室温で15分間かき混ぜます。この洗浄プロセス全体をもう一度繰り返します。繊細なタスクワイプで洗浄された組織を簡単に乾燥させ、それを量ります。組織と内容物をストレーナーにダンプし、鉗子を使用して手動で組織をマッサージします。内容物をビーカーに戻し、組織の1グラムあたり100%n-プロパノールの60ミリリットルで組織を覆います。

室温で1時間かき混ぜます。その後、繊細なタスクワイプでティッシュを短時間乾燥させ、重量を量ります。0.7ミリメートルのストレーナーに組織と内容物をダンプし、手動で組織をマッサージするために鉗子を使用しています。内容物をビーカーに戻し、組織のグラム当たり60ミリリットルの脱イオン水で覆って組織を洗います。

室温で15分間かき混ぜます。この洗浄プロセスを3回繰り返します。この後、繊細なタスクワイプでティッシュを簡単に乾燥させ、それを量ります。ラベル付き15ミリリットルチューブに組織を移し、一晩でマイナス80°Cで凍結します。