Децеллюляризация молочных жировых колодок: вывод внеклеточных матричных гидрогелей из молочных жировых колодок

Во-первых, поместите молочные жирные прокладки или МПП в блюдо с раствором трипсин-ЭДТА и инкубировать в течение желаемого периода времени, чтобы сломать клей матрицы клеток. Вымойте MFPs с деионизированной водой и процедите через ситечко. Поместите ткани в стакан с баром для перемешивания и добавьте Triton X-100. Перемешать, чтобы лизировать клетки, не влияя на факторы роста в внеклеточной матрицы ткани.

Процедить MFPs и промыть деионизированной водой. Передача тканей обратно в стакан, и добавить дезоксихолевая кислота, чтобы подлить оставшиеся клетки. Затем процедите МПП и поместите в стакан, содержащий деионизированную воду с пенициллин-стрептомицином для предотвращения загрязнения. Инкубировать стакан при 4 градусах по Цельсию на ночь.

Процедить MFPs и поместить их в стакан, содержащий этанол и перацетической кислоты. Ператетическая кислота повышает жесткость внеклеточной матрицы ткани. Перемешать в течение некоторого времени и повторить напрягающий шаг. Вымойте MFPs с PBS, а затем с деионизированной водой. Перенесите натянутые MFPs в стакан, содержащий пропан-1-ol.

Перемешать в течение некоторого времени, процедить содержимое, и мыть MFPs с деионизированной водой. Высушите МФП и храните при температуре минус 80 градусов по Цельсию. В следующем протоколе мы будем выполнять децеллюляризацию мурин молочных жировых подушечек.

Во-первых, поместите MFPs в шестиметровой посуды с пятью миллилитров трипсина-ЭДТА решения. Спрей и протрите посуду 70% этанола и инкубировать при 37 градусов по Цельсию в течение одного часа. Используйте 0,7-миллиметровые ситечко для мытья МПП деионизированной водой, наливая воду на ткани три раза. Используйте типсы, чтобы вручную массировать ткани между моет.

Далее, кратко высушить ткань на деликатной задачей протрите и взвесить его. Поместите высушенные ткани в предварительно автоклавный стакан, содержащий соответствующий размер бар перемешать, и покрыть ткани с 60 миллилитров 3% т-octylphenoxy полиэтиленола на грамм ткани. Перемешать в течение одного часа при комнатной температуре. Затем сбросите содержимое стаканов в ситечко.

Промыть стакан деионизированной водой и залить его на ткани. Повторите этот процесс полоскания еще два раза, убедившись, что использовать типсы вручную массаж ткани между полосканиями. После этого, кратко высушить ткань на деликатной задачей протрите и взвесить. Поместите ткани и перемешать баров обратно в те же стаканы и покрыть их 60 миллилитров 4% дезоксихольной кислоты на грамм ткани. Перемешать при комнатной температуре в течение одного часа.

Затем сбросите содержимое стакана в сетчатый ситечко. Промыть стакан деионизированной водой и залить его на ткани. Повторите этот процесс полоскания еще два раза, убедившись, что использовать типсы вручную массаж ткани между полосканиями. Кратко высушите промытую ткань на деликатной задаче протрите и взвесите ее.

Поместите высушенные ткани в тот же стакан вместе со свежей деионизированной водой, дополненной 1% пенициллина стрептомицина. Обложка стакан плотно с парафиновой пленкой и оставить при 4 градусах по Цельсию на ночь. На следующий день слейте содержимое стакана в ситечко. Кратко высушите ткань на деликатной задаче протрите и взвесите ее. Затем поместите MFPs в тот же стакан с соответствующим размером перемешать бар.

Обложка ткани с 60 миллилитров раствора, содержащего 4% этанола и 0,1% перацевой кислоты на грамм ткани. Перемешать при комнатной температуре в течение двух часов. Сбросите содержимое стакана в 0,7-миллиметровый ситечко. Используйте типсы, чтобы вручную массировать ткани и поместить содержимое обратно в стакан. Вымойте ткань, покрыв ее 60 миллилитров 1X PBS на грамм ткани.

Перемешать при комнатной температуре в течение 15 минут. Повторите весь этот процесс стирки еще раз. Затем сбросите содержимое стакана в 0,7-миллиметровый ситечко. Используя типсы, вручную массируйте ткани и поместите содержимое обратно в стакан. Вымойте ткань, покрыв ее 60 миллилитров деионизированной воды на грамм ткани.

Перемешать при комнатной температуре в течение 15 минут. Повторите весь этот процесс стирки еще раз. Кратко высушите промытую ткань на деликатной задаче протрите и взвесите ее. Свалить ткани и содержимое в ситечко и использовать миппы для ручного массажа тканей. Поместите содержимое обратно в стакан и покройте ткани 60 миллилитров 100% n-пропанола на грамм ткани.

Перемешать при комнатной температуре в течение одного часа. Затем, кратко высушить ткань на деликатной задачей протрите и взвесить его. Сбросите ткань и содержимое в 0,7-миллиметровый ситечко и используйте типсы для ручного массажа тканей. Поместите содержимое обратно в стакан и мыть ткани, покрывая его 60 миллилитров деионизированной воды на грамм ткани.

Перемешать при комнатной температуре в течение 15 минут. Повторите этот процесс мытья три раза. После этого, кратко высушить ткань на деликатной задачей протрите и взвесить его. Перенесите ткань в помеченную 15 миллилитровую трубку и заморозьте при минус 80 градусах по Цельсию на ночь.