Almohadillas de grasa mammary descelularizantes: Derivando hidrogeles matrix extracelulares de almohadillas de grasa mammary

En primer lugar, coloque almohadillas de grasa mamaria o MFP en un plato con solución Trypsin-EDTA e incuba durante la duración deseada para romper las adherencias de la matriz celular. Lave los MFP con agua desionizada y colar a través de un colador. Coloque los tejidos en un vaso de precipitados con una barra de agitación y agregue Triton X-100. Revuelva para lilas sin afectar los factores de crecimiento de la matriz extracelular del tejido.

Colar los MFP y enjuagar con agua desionizada. Transfiera los tejidos al vaso de precipitados y agregue ácido desoxicólico para liar las células restantes. A continuación, colar los MFP y colocar en un vaso de precipitados que contenga agua desionizada con penicilina-estreptomicina para evitar la contaminación. Incubar el vaso de precipitados a 4 grados centígrados durante la noche.

Colar los MFP y colocarlos en un vaso de precipitados que contenga etanol y ácido peracético. El ácido peracético aumenta la rigidez de la matriz extracelular del tejido. Revuelva durante algún tiempo y repita el paso de esfuerzo. Lave los MFP con PBS y luego con agua desionizada. Transfiera los MFP tensados a un vaso de precipitados que contenga propano-1-ol.

Revuelva durante algún tiempo, colar el contenido y lavar los MFP con agua desionizada. Seque los MFP y guárdelo a menos 80 grados centígrados. En el siguiente protocolo, realizaremos la descelularización de las almohadillas de grasa mamaria murina.

En primer lugar, coloque los MFP en platos de seis centímetros con cinco mililitros de solución Trypsin-EDTA. Rocía y limpia los platos con un 70% de etanol e incuba a 37 grados Celsius durante una hora. Utilice coladores de 0,7 milímetros para lavar los MFP con agua desionizada vertiendo agua sobre el tejido tres veces. Utilice fórceps para masajear manualmente el tejido entre lavados.

A continuación, seque brevemente el tejido en una delicada toallita de tarea y sopese. Coloque los tejidos secos en un vaso de precipitados preautoclavado que contenga una barra de agitación de tamaño adecuado y cubra los tejidos con 60 mililitros de 3% de polietilenoeoxi-octilfenoxi por gramo de tejido. Revuelva durante una hora a temperatura ambiente. A continuación, volcar el contenido de los beakers en un colador.

Enjuague el vaso de precipitados con agua desionizada y vierta esto sobre los tejidos. Repita este proceso de enjuague dos veces más, asegurándose de utilizar fórceps para masajear manualmente el tejido entre enjuagues. Después de esto, seque brevemente el tejido en una delicada toallita de tarea y pesar. Coloque los tejidos y las barras de agitación de nuevo en los mismos beakers y cúbralos con 60 mililitros de 4% de ácido desoxicólico por gramo de tejido. Revuelva a temperatura ambiente durante una hora.

A continuación, volcar el contenido del vaso de precipitados en un colador de malla. Enjuague el vaso de precipitados con agua desionizada y vierta esto sobre los tejidos. Repita este proceso de enjuague dos veces más, asegurándose de utilizar fórceps para masajear manualmente el tejido entre enjuagues. Seque brevemente el tejido enjuagado en una delicada toallita de tarea y sopese.

Coloque los tejidos secos en el mismo vaso de precipitados junto con agua desionizada fresca complementada con 1% de estreptomicina de penicilina. Cubra bien el vaso de precipitados con película de parafina y déjelo a 4 grados centígrados durante la noche. Al día siguiente, escurrir el contenido del vaso de precipitados en un colador. Seque brevemente el tejido en una delicada toallita de tarea y sopese. A continuación, coloque los MFP en el mismo vaso de precipitados con una barra de agitación del tamaño adecuado.

Cubra el tejido con 60 mililitros de una solución que contenga 4% de etanol y 0.1% de ácido peracético por gramo de tejido. Revuelva a temperatura ambiente durante dos horas. Vuelque el contenido del vaso en un colador de 0,7 milímetros. Utilice fórceps para masajear manualmente el tejido y colocar el contenido de nuevo en el vaso de precipitados. Lave el tejido cubriéndolo con 60 mililitros de 1X PBS por gramo de tejido.

Revuelva a temperatura ambiente durante 15 minutos. Repita todo este proceso de lavado una vez más. A continuación, verter el contenido del vaso de precipitados en un colador de 0,7 milímetros. Con fórceps, masajee manualmente el tejido y vuelva a colocar el contenido en el vaso de precipitados. Lave el tejido cubriéndolo con 60 mililitros de agua desionizada por gramo de tejido.

Revuelva a temperatura ambiente durante 15 minutos. Repita todo este proceso de lavado una vez más. Seque brevemente el tejido lavado en una delicada toallita de tarea y sopese. Vuelque el tejido y el contenido en un colador y utilice fórceps para masajear manualmente el tejido. Coloque el contenido de nuevo en el vaso de precipitados y cubra los tejidos con 60 mililitros de 100% n-propanol por gramo de tejido.

Revuelva a temperatura ambiente durante una hora. Luego, seque brevemente el tejido en una delicada toallita de tarea y sopese. Vuelque el tejido y el contenido en un colador de 0,7 milímetros y utilice fórceps para masajear manualmente el tejido. Coloque el contenido de nuevo en el vaso de precipitados y lave el tejido cubriéndolo con 60 mililitros de agua desionizada por gramo de tejido.

Revuelva a temperatura ambiente durante 15 minutos. Repita este proceso de lavado tres veces. Después de esto, seque brevemente el tejido en una delicada toallita de tarea y sopese. Transfiera el tejido a un tubo etiquetado de 15 mililitros y congele a 80 grados celsius negativos durante la noche.