Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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첫째, 트립신-EDTA 용액을 사용하여 접시에 유방 지방 패드 또는 MPP를 배치하고 세포 매트릭스 접착을 끊기 위해 원하는 기간 동안 배양하십시오. 탈이온된 물로 MPP를 씻고 여과기를 통해 변형하십시오. 스티치를 스티스 바에 넣고 트리톤 X-100을 추가합니다. 조직의 세포 외 매트릭스의 성장 인자에 영향을 미치지 않고 세포를 lyse합니다.
MVP를 변형시키고 탈온화된 물로 헹구는 다. 조직을 비커로 다시 옮기고, 남은 세포를 lyse에 데옥시콜산을 추가합니다. 다음으로, MPS를 변형시키고 오염을 방지하기 위해 페니실린 연쇄 절제술과 함께 탈이온 수를 포함하는 비커에 놓습니다. 하룻밤 사이에 4도에서 비커를 배양하십시오.
스트레인 MPP와 에탄올과 멸혈산을 함유한 비커에 넣습니다. 멸체 산은 조직의 세포 외 매트릭스의 강성을 증가시킵니다. 잠시 동안 저어서 긴장 단계를 반복합니다. PBS로 MP를 씻은 다음 탈온된 물로 씻으십됩니다. 프로판-1-올이 들어 있는 비커로 변형된 MPPs를 전송합니다.
잠시 동안 저어서 내용물을 변형시키고, MVP를 탈수로 씻으시다. 의원을 건조하고 영하 80도에서 저장합니다. 다음 프로토콜에서, 우리는 뮤린 유방 지방 패드의 탈세포화를 수행 할 것입니다.
먼저, 트립신-EDTA 솔루션 5밀리리터와 함께 6센티미터 요리에 MVP를 배치합니다. 스프레이와 70% 에탄올로 접시를 닦고 1시간 동안 섭씨 37도에서 배양합니다. 0.7 밀리미터 스트레이너를 사용하여 조직에 물을 세 번 부어 탈이온 된 물로 MPP를 씻으세요. 집게를 사용하여 세차 사이에 조직을 수동으로 마사지하십시오.
다음으로, 섬세한 작업 닦아에 조직을 간단히 말리고 무게를 측정합니다. 건조된 조직을 적절한 크기의 교반 바를 포함하는 사전 오토클레이브 비커에 넣고 조직 1그램당 3% t-옥티펜시 폴리에톡시에탄올의 60밀리리터로 조직을 덮습니다. 실온에서 1시간 동안 저어줍니다. 그런 다음 비커 내용을 여조기에 덤프합니다.
비커를 탈온화된 물로 헹구고 조직에 부어 넣습니다. 이 헹기 과정을 두 번 더 반복하여 집게를 사용하여 헹도 사이에 조직을 수동으로 마사지하십시오. 그 후, 섬세한 작업 닦아 무게에 조직을 간단히 건조. 조직과 교반 바를 같은 비커에 다시 넣고 조직 그램당 4% 데옥시콜산60 밀리리터로 덮습니다. 실온에서 1시간 동안 저어줍니다.
다음으로 비커의 내용을 메쉬 스트레이너에 넣습니다. 비커를 탈온화된 물로 헹구고 조직에 부어 넣습니다. 이 헹기 과정을 두 번 더 반복하여 집게를 사용하여 헹도 사이에 조직을 수동으로 마사지하십시오. 간략하게 섬세한 작업 닦아에 헹구는 조직을 건조하고 무게.
말린 조직을 동일한 비커에 넣고 1% 페니실린 연쇄절제술을 보충한 신선한 탈이온수에 넣습니다. 비커를 파라핀 필름으로 단단히 덮고 하룻밤 사이에 섭씨 4도에 둡니다. 다음 날, 비커 내용을 여과기에 빼넣습니다. 섬세한 작업 닦아에 조직을 간단히 말리고 무게를 측정합니다. 그런 다음 적절한 크기의 교반 바를 가진 동일한 비커에 MVP를 배치합니다.
조직에 포함 된 용액의 60 밀리 리터와 조직을 커버 4% 에탄올과 0.1% 조직의 그램 당 peracetic 산. 실온에서 2시간 동안 저어줍니다. 비커의 내용을 0.7mm 여조로 덤프합니다. 집게를 사용하여 조직을 수동으로 마사지하고 내용물들을 비커에 다시 넣습니다. 조직을 1그램당 1X PBS 60밀리리터로 덮어 조직을 씻으시면 됩니다.
실온에서 15분간 저어줍니다. 이 전체 세탁 과정을 한 번 더 반복하십시오. 다음으로 비커의 내용을 0.7mm 스트레이너로 덤프합니다. 집게를 사용하여 조직을 수동으로 마사지하고 내용내용을 비커에 다시 넣습니다. 조직을 1그램당 60밀리리터의 탈온수로 덮어 조직을 씻으시면 됩니다.
실온에서 15분간 저어줍니다. 이 전체 세탁 과정을 한 번 더 반복하십시오. 세척된 조직을 섬세한 작업 닦아내고 무게를 닦으십시오. 조직과 내용기를 여조기에 버리고 집게를 사용하여 조직을 수동으로 마사지하십시오. 내용물들을 비커에 다시 넣고 조직 1그램당 100% n-propanol의 60밀리리터로 조직을 덮습니다.
실온에서 1시간 동안 저어줍니다. 그런 다음, 섬세한 작업 닦아에 조직을 간단히 건조하고 무게를. 조직과 내용기를 0.7mm 여조로 덤프하고 집게를 사용하여 조직을 수동으로 마사지하십시오. 내용물을 비커에 다시 넣고 조직 1그램당 60밀리리터의 탈온화된 물로 덮어 조직을 씻으시다.
실온에서 15분간 저어줍니다. 이 세척 과정을 세 번 반복하십시오. 그 후, 섬세한 작업 닦아에 조직을 간단히 말리고 무게를 측정합니다. 표시 된 15 밀리 리터 튜브에 조직을 전송 하 고 부정적인에서 동결 80 섭씨 하룻밤.
