Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
İlk olarak, meme yağ pedlerini veya MFP'leri Tripsin-EDTA çözeltisi içeren bir yemeğe yerleştirin ve hücre matrisi yapışıklıklarını kırmak için istenen süre boyunca kuluçkaya yatırın. MFP'leri deiyonize suyla yıkayın ve bir süzgeçten süzün. Mendilleri bir karıştırma çubuğu ile bir kabın içine yerleştirin ve Triton X-100 ekleyin. Dokunun hücre dışı matrisinde büyüme faktörlerini etkilemeden lyse hücrelerine karıştırın.
MFP'leri süzün ve deiyonize suyla durulayın. Dokuları kabın içine geri aktarın ve kalan hücreleri izamak için deoksikolik asit ekleyin. Daha sonra, MFP'leri süzün ve kirlenmeyi önlemek için penisilin-streptomisinin deiyonize su içeren bir behere yerleştirin. Beheri bir gecede 4 santigrat derecede kuluçkaya yatırın.
MFP'leri süzün ve etanol ve perasetik asit içeren bir beherin içine yerleştirin. Perasetik asit, dokunun hücre dışı matrisinin sertliğini arttırır. Bir süre karıştırın ve süzme adımını tekrarlayın. MFP'leri PBS ile ve ardından deiyonize suyla yıkayın. Gerilen MFP'leri propan-1-ol içeren bir behere aktarın.
Bir süre karıştırın, içeriği süzün ve MFP'leri deiyonize suyla yıkayın. MFP'leri kurutun ve eksi 80 santigrat derecede saklayın. Aşağıdaki protokolde, murine meme yağ pedlerinin deselülarizasyonunu gerçekleştireceğiz.
İlk olarak, MFP'leri beş mililitre Trypsin-EDTA çözeltisi ile altı santimetrelik yemeklere yerleştirin. Bulaşıkları% 70 etanol ile püskürtün ve silin ve bir saat boyunca 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. MFP'leri üç kez dokunun üzerine su dökerek deiyonize suyla yıkamak için 0,7 milimetre süzgeç kullanın. Yıkamalar arasında dokuya manuel olarak masaj yapmak için tokalar kullanın.
Daha sonra, dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısa bir süre kurulayın ve tartın. Kurutulmuş dokuları uygun büyüklükte bir karıştırma çubuğu içeren önceden otoklavlanmış bir kabın içine yerleştirin ve dokuları gram doku başına% 3 t-octylfenoxy polyethoxyethanol 60 mililitre ile örtün. Oda sıcaklığında bir saat karıştırın. Daha sonra, beher içeriğini bir süzgeçe dökin.
Kabı deiyonize suyla durulayın ve bunu dokulara dökün. Bu durulama işlemini iki kez daha tekrarlayın, durulamalar arasındaki dokuya manuel olarak masaj yapmak için tokmak kullandığınızdan emin olun. Bundan sonra, dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısa bir süre kurulayın ve tartın. Dokuları ve karıştırma çubuklarını aynı gagalara geri yerleştirin ve gram doku başına% 4 deoksikolik asitin 60 mililitresi ile örtün. Oda sıcaklığında bir saat karıştırın.
Daha sonra, kabın içeriğini bir ağ süzgecine dökin. Kabı deiyonize suyla durulayın ve bunu dokulara dökün. Bu durulama işlemini iki kez daha tekrarlayın, durulamalar arasındaki dokuya manuel olarak masaj yapmak için tokmak kullandığınızdan emin olun. Durulanmış dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısa bir süre kurulayın ve tartın.
Kurutulmuş dokuları% 1 penisilin streptomisin ile desteklenmiş taze deiyonize su ile birlikte aynı kabın içine yerleştirin. Beheri parafin filmi ile sıkıca örtün ve bir gecede 4 santigrat derecede bırakın. Ertesi gün, beher içeriğini bir süzgeç içine boşaltın. Dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısa bir süre kurulayın ve tartın. Ardından, MFP'leri uygun büyüklükte bir karıştırma çubuğu ile aynı behere yerleştirin.
Dokuyu% 4 etanol ve% 0.1 perasetik asit içeren bir çözeltinin 60 mililitresi ile örtün. oda sıcaklığında iki saat karıştırın. Kabın içindekileri 0.7 milimetrelik bir süzgeçe dök. Dokuya manuel olarak masaj yapmak ve içeriği tekrar kabın içine yerleştirmek için tokalar kullanın. Dokuyu gram doku başına 60 mililitre 1X PBS ile kaplayarak yıkayın.
Oda sıcaklığında 15 dakika karıştırın. Tüm bu yıkama işlemini bir kez daha tekrarlayın. Daha sonra, kabın içeriğini 0.7 milimetrelik bir süzgeçe dök. Yaban arılarını kullanarak dokuya manuel olarak masaj yapın ve içeriği tekrar kabın içine yerleştirin. Dokuyu gram doku başına 60 mililitre deiyonize su ile kaplayarak yıkayın.
Oda sıcaklığında 15 dakika karıştırın. Tüm bu yıkama işlemini bir kez daha tekrarlayın. Yıkanmış dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısa bir süre kurulayın ve tartın. Dokuyu ve içeriği bir süzgeçe dökun ve dokuya manuel olarak masaj yapmak için tokmak kullanın. İçeriği tekrar kabın içine yerleştirin ve dokuları gram doku başına% 100 n-propanol 60 mililitre ile örtün.
Oda sıcaklığında bir saat karıştırın. Ardından, dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısa bir süre kurulayın ve tartın. Dokuyu ve içeriği 0,7 milimetrelik bir süzgeçe dökün ve dokuya manuel olarak masaj yapmak için tokmak kullanın. İçeriği tekrar kabın içine yerleştirin ve dokuyu gram doku başına 60 mililitre deiyonize su ile kaplayarak yıkayın.
Oda sıcaklığında 15 dakika karıştırın. Bu yıkama işlemini üç kez tekrarlayın. Bundan sonra, dokuyu hassas bir görev mendili üzerinde kısa bir süre kurulayın ve tartın. Dokuyu etiketli 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve bir gecede negatif 80 santigrat derecede dondurun.
