Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Börja med att placera en avlivad mus ventral sida upp på en kirurgisk säng och säkra djurets lemmar. Använd sax, skär längs mittlinjen genom revbensburen upp till salivkörtlarna. Placera en pipettspets under luftstrupen för att höja och isolera den. Rotera operationssängen 180 grader. Sätt in en sprutnål som innehåller en Indien-bläckfläck i luftstrupen och injicera bläcket i lungorna tills du känner motstånd.
Cancerceller utsöndrar en stor mängd mjölksyra som genererar en stark negativ laddning på cellytan. När dessa celler färgas med Indien bläck, en sur fläck, cellytan avvisa fläcken och förbli osedd.
Använd sax för att skära luftstrupen och skjut ett par pincett under lungorna. Dra försiktigt lungorna ur djurets kropp. Skölj lungorna i vatten och överför dem till en flaska som innehåller Feketes lösning för att avlägsna överflödig fläck och fixera vävnaden i en rökhuva. Tumör härdarna visas vit mot den mörka bakgrunden.
I följande protokoll kommer vi att utföra Indien bläck inflation teknik för att validera lung metastasering.
För att validera metastasering av den primära tumören till lungan, placera först musen i ryggposition på en polystyrenbräda och säkra benen för att säkerställa en fri tillgång till luftstrupen. Spraya musen med 70% etanol. Använd sedan en sax för att göra ett snitt längs mitten av mitten av musens mitt buk genom bröstkorgen och upp mot salivkörtlarna. Identifiera luftstrupen. Använd sedan tång för att ta bort de omgivande vävnaderna.
Håll sedan en pipettspets i ena handen, trä spetsen under luftstrupen och lyft försiktigt vävnaden upp och bort från kroppen. Håll luftstrupen förhöjd, rotera dissekeringsplattformen 180 grader. Sätt sedan in en halv cc 27-gauge tuberkulinspruta i luftstrupen och blås upp lungorna helt med Indien bläck tills ett starkt motstånd känns.
Skär sedan luftstrupen med hjälp av en sax. Håll musen på plats med en tång, sätt in en annan tång under lungorna och dra lungloberna ur musen. Skölj lungorna en kort stund i en bägare vatten och överför vävnaden till en rökhuva. Placera sedan lungorna i en glasscintillationsflaska som innehåller 3 milliliter Feketes lösning och kapa injektionsflaskan för att förhindra att lösningen avdunstar. Efter några minuter överför du lungorna till en petriskål och räknar antalet enstaka, vita, metastaserade tumörneudlar.
