Name: 从手术标本的人类胰岛细胞激光显微切割的改进方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: 学习激光显微切割技术从手术标本中分离人类胰岛β细胞的方法。该方案优化了细胞自发荧光，提高了转录组研究的细胞采集效率，为糖尿病和代谢疾病研究提供可靠的技术支持。

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我们感谢所有同事在本项目各个阶段提供的帮助、建议和关键性意见。本视频文章的制作得到了IMIDIA基金的资助。<a href="http://www.imidia.org" target="_blank">http://www.imidia.org</a>），德国教育与研究部（BMBF）向德国糖尿病研究中心（DZD， <a href="http://www.dzd-ev.de" target="_blank">http://www.dzd-ev.de</a>）以及德累斯顿工业大学德累斯顿大学医院卡尔·古斯塔夫·卡鲁斯。本出版物所涉及的研究工作已获得创新药物计划联合企业（Innovative Medicines Initiative Joint Undertaking）在第 n 号资助协议下的支持 &deg; 155005（IMIDIA），其资源由欧盟第七框架计划（FP7/2007-2013）的财政资助以及欧洲制药工业协会联合会（EFPIA）企业提供的实物贡献组成。

1. 人胰腺组织的冷冻
<ol>
 <li>使用手术刀和镊子去除脂肪组织、血管、神经及非实质组织，将胰腺组织切成小块（约 0.5–1 cm 的立方体）。</li>
 <li>将一块胰腺组织置于冷冻模具中央，完全覆盖冰冷的 Tissue-Tek O.C.T. 包埋剂。将冷冻模具放入底部铺有预冷异戊烷（2-Methylbutane）的容器中，再在液氮中快速冷冻。将冷冻样品储存在 -80 °C 条件下。</li>
</ol>
2. 冷冻切片的制备
<ol>
 <li>所有步骤中均需佩戴手套，以避免RNA降解。 </li>
 <li>用冷的100%乙醇和RNase Away清洁冷冻切片机刀片、样本架和画笔。将冷冻组织放入冷冻切片机内。 </li>
 <li>等待组织、刀片和刷子温度降至 -20 &deg;C. 标记 SuperFrost Plus 载玻片，并在等待组织温度降至 -20 时将其预先冷却置于冷冻切片机腔室内 &deg;C. </li>
 <li>在样本托上涂抹Tissue-Tek O.C.T. 包埋剂，然后将冷冻组织置于其上。 </li>
 <li>待Tissue-Tek O.C.T. 包埋剂完全冻结后，用剃刀片修整冷冻组织块，并切除多余的Tissue-Tek O.C.T. 包埋剂。 </li>
 <li>总共连续切取40个10 &mu;从胰腺组织块中切取 m 片。此外，建议保留第一片和中间片，用于绘制胰腺切片的概览图，以在显微解剖过程中辅助识别各切片中的胰岛。 </li>
 <li>将切片从刀片转移至SuperFrost Plus载玻片中央，操作时用戴手套的手指轻触载玻片背面，仅使切片需粘附的区域受热。 </li>
 <li>在-20℃的冰冻切片机内干燥切片1-2分钟 &deg;C，然后将它们放入置于干冰上的载玻片盒中。在-80℃下保存切片 &deg;C. </li>
 <li>必要时，用纸巾和冷的100%乙醇清洁刀片。 </li>
</ol>
3. 冷冻切片的脱水
<ol>
 <li>准备试剂：将 30 ml 新鲜配制的 70% 乙醇、30 ml DEPC 处理水、2×30 ml 100% 乙醇和 30 ml 二甲苯分别倒入 50 ml Cellstar 管（Falcons）中；除二甲苯外，所有试剂均需冰上预冷并保存。 </li>
 <li>用 100% 乙醇和 RNaseZAP 清洁通风橱内的工作区域。 </li>
 <li>按以下步骤处理两片冷冻切片：先在冰上预冷的 70% 乙醇中固定 30 秒，然后在冰上预冷的 DEPC 处理水中快速浸洗 5–6 次，再于冰上预冷的 100% 乙醇中脱水两次，每次 1 分钟，接着在室温（25 °C）下用二甲苯孵育 4 分钟，最后晾干 3–5 分钟。对另一对冷冻切片重复此步骤。 </li>
 <li>将两张干燥的冷冻切片背对背插入一个用铝箔包裹的 50 ml Cellstar 管中，以避免光照和湿气。 </li>
</ol>
4. 使用 PALM MicroBeam（蔡司）进行β细胞的激光显微切割
<ol>
 <li>使用 RNaseZAP 清洁显微镜，并将粘附帽安装到 RoboMover 上。</li>
 <li>设置以下参数：滤光片组 09（激发波长：450–490 nm，发射波长 &gt; 515 nm），AutoLPC 模式，50% 激光能量，65% 激光聚焦，100% 激光速度，AutoLPC 打点间距 5 μm，到线距离 6 μm，工作高度：-10,100。</li>
 <li>将一张载玻片插入载物台。</li>
 <li>在显微镜下（使用 5× 或 10× 物镜）定位自发荧光的β细胞。</li>
 <li>切换至 40× 物镜，使用“自由手绘”选择工具选中β细胞，并用激光进行显微切割。</li>
 <li>将四张脱水冷冻切片的组织收集至同一个粘附帽中。
 
 注释 1：切割一张脱水冷冻切片中β细胞的时间不应超过 10–20 分钟，以避免组织切片重新水化，从而导致 RNA 降解。 
 注释 2：将载物台移至检查点后，通过目视检查确认显微切割是否成功。</li>
</ol>
5. 激光显微切割富集的β细胞组织的裂解
<ol>
 <li>从 RoboMover 上取下 AdhesiveCap。</li>
 <li>将 10 μl 提取缓冲液（XB，PicoPure RNA 提取试剂盒，Arcturus）加入 AdhesiveCap 的盖子中，倒置后于 42 °C 孵育 30 分钟。</li>
 <li>在 10,000 x g 条件下离心，将裂解液置于干冰上。在进行 RNA 提取前，于 -80 °C 保存。</li>
 <li>对所有其他切片重复步骤 3.) 至 5.)。</li>
</ol>
6. RNA 提取
<ol>
 <li>将全部十个10 μl裂解液合并</li>
 <li>按照Arcturus公司PicoPure RNA分离试剂盒的操作说明，在室温下进行RNA提取，使用1:1比例的提取缓冲液（XB）与70%乙醇（包括DNase处理步骤）。</li>
</ol>
7. RNA 分析
<ol>
 <li>使用 1 μl RNA，通过 Agilent 2100 生物分析仪（PicoChip）分析其质量和数量。定量评估以芯片上平行加载的标准 RNA 为参照进行。</li>
</ol>

<ol><li>Bonner, R. F., Emmert-Buck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection%3A+molecular+analysis+of+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection: molecular analysis of tissue.</a> Science. 278, 1481-1483 (1997).</li>
<li>Suarez-Quian, C. A., Goldstein, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection+of+single+cells+from+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection of single cells from complex tissues.</a> Biotechniques. 26 (2), 328-3235 (1999).</li>
<li>Espina, V., Wulfkuhle, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Laser-capture microdissection.</a> Nature Protocols. 1, 586-603 (2006).</li>
<li>Mikulowska-Mennis, A., Taylor, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-quality+RNA+from+cells+isolated+by+laser+capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">High-quality RNA from cells isolated by laser capture microdissection.</a> Biotechniques. 33 (1), 176-179 (2002).</li>
<li>Bötticher, G., Sturm, D., Ehehalt, F., Knoch, K. P., Kersting, S., Grützmann, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Human+Islets+from+Partially+Pancreatectomized+Patients%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients.</a> J. Vis. Exp. (53), e2962(2011).</li>
<li>Marselli, L., Sgroi, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection+of+human+pancreatic+beta-cells+and+RNA+preparation+for+gene+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection of human pancreatic beta-cells and RNA preparation for gene expression profiling.</a> Methods in Molecular Biology. 560, 87-98 (2009).</li>
<li>Marselli, L., Thorne, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Expression+of+Purified+%7Bbeta%7D-Cell+Tissue+Obtained+from+Human+Pancreas+with+Laser+Capture+Microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Gene Expression of Purified {beta}-Cell Tissue Obtained from Human Pancreas with Laser Capture Microdissection.</a> Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 93, 1046-1053 (2008).</li>
<li>Bottino, R., Balamurugan, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+human+islets+to+isolation+stress+and+the+effect+of+antioxidant+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Response of human islets to isolation stress and the effect of antioxidant treatment.</a> Diabetes. 53 (10), 2559-2568 (2004).</li>
<li>Abdelli, S., Ansite, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+stress+signaling+pathways+activated+during+human+islet+preparation+and+following+acute+cytokine+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Intracellular stress signaling pathways activated during human islet preparation and following acute cytokine exposure.</a> Diabetes. 53 (11), 2815-2823 (2004).</li>
<li>Negi, S., Jetha, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+beta-cell+gene+expression+reveals+inflammatory+signaling+and+evidence+of+dedifferentiation+following+human+islet+isolation+and+culture%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Analysis of beta-cell gene expression reveals inflammatory signaling and evidence of dedifferentiation following human islet isolation and culture.</a> PLoS One. 7 (1), e30415(2012).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

我们介绍一种从手术获取的胰腺标本中进行激光显微切割（LMD）分离人胰岛的可靠方法。只要有LMD显微镜，该方法可在任何开展部分胰腺切除术的研究机构中实施，从而增加获取来自非糖尿病和2型糖尿病受试者的胰岛组织的机会。这一点尤为重要，因为可用于胰岛分离的胰腺供体极为稀缺。与胶原酶消化法分离胰岛相比，LMD的优势在于组织离体后至胰岛处理用于RNA提取的时间更短7，β细胞富集度更高7，并且避免了剧烈的机械和酶处理过程8,9,10，这些操作可能改变基因表达谱。对于接受部分胰腺切除的患者，通常可获得比器官捐献者更丰富的临床和代谢信息。然而，通过LMD分离胰岛所获得的RNA量较少，RIN值较低，与胶原酶消化法相比存在差距，且无法提供可用于功能研究的活胰岛。此外，导致手术的胰腺疾病本身可能影响胰岛的表达谱。对这些优缺点的全面评估，将依赖于在器官捐献者或部分胰腺切除患者中，通过胶原酶消化法与LMD进行的大规模胰岛分离比较研究来实现，例如目前正在进行的多中心创新药物计划糖尿病项目（IMIDIA），其目标为“改善糖尿病治疗中β细胞功能并鉴定用于治疗监测的诊断生物标志物”（<a href="htt...

<table><tbody><tr><td>2-甲基丁烷（异戊烷）</td><td>ROTH</td><td>3927.1</td><td></td></tr><tr><td>AdhesiveCap（不透明，500 &amp;mu;l）</td><td>ZEISS</td><td>415190-9201-000</td><td></td></tr><tr><td>Cellstar 离心管（50 ml）</td><td>greiner bio-one</td><td>210 261</td><td>带支撑裙边</td></tr><tr><td>Cellstar 离心管（50 ml）</td><td>greiner bio-one</td><td>227.261</td><td></td></tr><tr><td>焦碳酸二乙酯（DEPC）</td><td>SIGMA</td><td>D 5758</td><td></td></tr><tr><td>干冰</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>无水乙醇</td><td>VWR</td><td>20821.310</td><td></td></tr><tr><td>液氮</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>画笔</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PALM MicroBeam</td><td>ZEISS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peel-a-Way 包埋模具（截角型），12 × 12 mm</td><td>ProSciTech</td><td>RR12</td><td>顶部内径 22×22 mm，深度 21 mm</td></tr><tr><td>Arcturus PicoPure 冷冻 RNA 提取试剂盒</td><td>Applied Biosystems</td><td>KIT 0204</td><td></td></tr><tr><td>塑料夹子</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>剃刀</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>无 RNase 的 DNase 试剂盒</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZAP</td><td>SIGMA</td><td>R 2020</td><td></td></tr><tr><td>手术刀/外科刀片</td><td>Techno Cut</td><td>2800111</td><td></td></tr><tr><td>SuperFrost Plus 粘附性显微镜载玻片</td><td>Thermo Scientific</td><td>J1800AMNZ</td><td>25×75×1.0 mm</td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. 包埋剂</td><td>Sakura</td><td>4583 或 0807000022</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>BRAUN</td><td>BD168R</td><td></td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>VWR</td><td>28975.291</td><td></td></tr></tbody></table>

改进的人类胰岛手术标本激光显微切割操作方案

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

激光显微切割（LMD）是一种能够从微量实质组织中分离特定细胞和组织的技术1,2。分离的细胞可用于多种研究，例如转录组学或蛋白质组学分析、DNA检测或染色体分析2,3。LMD的一项尤其具有挑战性的应用是转录组分析，由于RNA的不稳定性4，当从富含RNase的组织（如胰腺）中分离细胞时，这一问题尤为突出。在此情况下，必须采用一种能够快速识别和收集目标细胞的显微切割方案，以缩短组织处理时间，从而确保RNA的完整性得以保存。
本文介绍了一种从手术标本中获取人胰腺β细胞用于转录组学研究的实验方案5。从小块外观正常的胰腺切除组织中切取约0.5–1 cm3的胰腺组织，包埋于Tissue-Tek O.C.T. 包埋剂中，立即浸入预冷的2-甲基丁烷中速冻，并在-80 °C保存直至切片。在-20 °C条件下，使用冷冻切片机连续切取40张厚度为10 μm的切片，每张切片单独转移至玻璃载片上，在冷冻切片机内干燥1–2分钟，随后于-80 °C保存。
在激光显微切割操作前，切片立即用冰上预冷的新鲜配制的70%乙醇固定30秒，随后在冰上预冷的DEPC处理水中浸洗5-6次，再依次用冰上预冷的100%乙醇孵育两次（每次1分钟）以及二甲苯（用于组织脱水）处理4分钟进行脱水；之后将组织切片在空气中干燥3-5分钟。重要的是，除二甲苯孵育步骤外，所有操作均使用冰上预冷的试剂——这是对先前描述的方案6的一项改进。使用冰上预冷的试剂显著增强了β细胞的内源性自发荧光，从而有助于其识别。每次进行显微切割时处理四张切片：其中两张置于铝箔包裹的50 ml离心管中，以防止组织受潮和荧光漂白；另外两张则立即进行显微切割。该操作使用PALM MicroBeam仪器（Zeiss）并采用自动激光压力弹射（AutoLPC）模式完成。从四张冷冻切片中完成β细胞/胰岛的切割不超过40-60分钟。收集的细胞被置于一个AdhesiveCap中，并用10 μl裂解缓冲液裂解。每次转录组分析所用的单个RNA样本均由10份显微切割获得的细胞样本合并后，再使用Pico Pure RNA分离试剂盒（Arcturus）提取RNA获得。该方案可增强人β细胞的内源性自发荧光，从而促进其快速而准确的识别与收集。对该方法的进一步优化有望实现表型不同的β细胞的分离，可能有助于更深入理解与2型糖尿病相关的变化。

如图1所示，与先前发表的脱水方案相比，改进后的脱水方案提高了β细胞的自发荧光信号6。采用所述方案，每例39例手术获取的胰腺标本均制备了40张连续冷冻切片，平均每例胰腺标本获得31'544'704 μm3组织（范围：8'742'390 - 81'522'153 μm3），如表1所示。该体积相当于约18个直径为150 μm的胰岛，或约35,000个β细胞。组织平均来源于每例胰腺标本中的38个不同胰岛（范围：19 - 80个胰岛），每个胰岛通常在两个或更多连续切片中被观察到。不同标本间胰岛收获量的较大差异反映了组织来源的异质性，包括胰头或胰尾，同时也体现了操作者在每张切片10分钟的观察时间内对胰岛识别能力的逐步提升。
每份显微切割并裂解的组织中的总RNA使用Applied Biosystems的Arcturus PicoPure Frozen RNA Isolation Kit进行纯化，并洗脱于 11 μl，按照制造商的说明书进行。随后 1 μl 使用 A...

激光显微切割技术能够从微量的实质组织中分离特定细胞。本文描述了一种从手术标本中获取人胰腺胰岛用于转录组学研究的实验方案。该方案可增强人β细胞固有的自发荧光，从而便于其收集。

激光显微切割（Laser microdissection，LMD）是一种可从微量实质组织中分离特定细胞和组织的技术1,2。经切割的……

您好，我叫 Dorte，来自 Reen Laser 科技大学的 Thea Hands 研究所。显微切割是一种能够从极少量原发肿瘤组织中获取特定细胞群体的技术。所分离的细胞可用于转录组学和蛋白质组学研究、DNA 检测或染色体分析。本文提供了从手术标本中获取人胰腺间质细胞用于转录组学研究的实验方案。将胰腺组织切成小块。取一块置于冷冻模具中央，并用预冷的包埋剂覆盖。立即将组织用预冷的两种材料——不丹（Bhutan）包埋，并在 -80 °C 下保存。将 40 张带粘附剂的载玻片贴上标签，并置于冷室（Christed Chamber）内预冷。修整冷冻组织块后，用 OCT 包埋剂将冷冻组织固定在样品托上。切取40片10微米厚的切片。通过用手指触碰载玻片背面，仅加热放置切片的位置，将一片切片转移至一张载玻片上。将切片在冷冻切片机内干燥2至3分钟，随后于-80摄氏度保存。准备染色试剂，并将除硒以外的所有液体置于冰上预冷。这将增强显微切割前组织细胞的固有自发荧光。每次处理四个切片。每次操作两个切片。先用70%乙醇固定30秒。然后用去离子水快速浸洗切片五到六次。随后将组织在100%乙醇中脱水一分钟，并重复此步骤一次，再将载玻片置于二甲苯中孵育四分钟。同时，开始对另一对切片进行脱水。最后，在避光条件下将载玻片空气干燥三到五分钟。将两张载玻片背对背放入铝箔包裹的50 ml离心管中，以保护组织免受潮气影响，并防止自发荧光被漂白。在切片前，用RNAs away清洁显微镜，并将粘性帽夹入robo Mover中。将载玻片插入载物台，并将盖玻片轻轻移至切片上方，避免接触。通过识别自体荧光较强的贝塔细胞区域来定位小孔。在该实验设置中，人贝塔细胞的内在自体荧光呈黄色，而胰腺导管则呈现明亮的绿色自体荧光。使用套索选择工具选取较佳的细胞区域，并通过启动激光进行显微切割。在40至60分钟内，将四个已降级的冷冻切片上的小孔切割并收集到一个粘附帽中。如需要，可将收集组织后的帽移至显微镜的检查点，以观察所捕获的组织。取下 robo mover 的盖子，向盖内加入 10 µL 裂解缓冲液以裂解细胞。将盖子倒置，在 42 °C 下孵育 30 分钟。离心收集裂解液，标记试管并将其在-80°C下保存，直至进行RNA提取。对全部40个冷冻切片样本执行激光显微切割及裂解操作。随后，合并10个裂解液样本，并按照提供的说明书使用UR PU RNA提取试剂盒继续进行RNA纯化，以获得11 µL RNA。总体而言，我们未发现显微切割组织量与 RNA 产量之间存在直接关系。外科医生取材后至病理医生检查完胰腺标本并进行冷冻保存之间的时间间隔差异，可能部分影响所获得 RNA 的质量和数量。其他需要考虑的关键因素包括用于显微切割的激光能量——较低能量有助于获得更高的 RNA 完整性，以及激光聚焦程度和激光压力切割点的位置距离。此外，通过尽量缩短粘附帽与组织之间的距离，可进一步优化 RNA 产量。在具备激光显微切割显微镜的条件下，应避免在捕获过程中丢失显微切割的组织。该方法可在任何开展部分胰腺切除术的研究机构中实施，从而增加获取来自非糖尿病和糖尿病受试者的人眼睑组织的机会。

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科研

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Medicine

医学

从手术标本的人类胰岛细胞激光显微切割的改进方法

用于研究的2型糖尿病胰岛供应不足。本文分享了我们从接受部分胰腺切除术的患者中分离胰岛的实验方案。该方法为获得足量的2型糖尿病患者及临床匹配的非糖尿病受试者的胰岛提供了独特途径，可用于基础与临床研究。...

从部分胰腺切除患者中分离人类胰岛

本视频演示了使用苏木精和伊红（H&amp;E）以及免疫组织化学（IHC）对人胰岛进行表征的实验步骤。对胰腺头、体和尾部位的组织切片分别进行H&amp;E和IHC染色，以确定胰岛的内分泌细胞组成（胰岛素、胰高血糖素和胰多肽）、细胞增殖情况（Ki67）以及炎性浸润（H&amp;E、CD3）。通过胰多肽的免疫组织化学染色来定位钩突区域。...

人胰岛染色方案

一种小鼠胰岛分离及细胞内cAMP测定方法

胰腺胰岛微血管舒缩运动调控胰岛血流分布，并维持胰岛β细胞的生理功能。本方案描述了使用激光多普勒监测仪评估胰腺胰岛微血管舒缩运动功能状态的方法。 在体内...

激光多普勒：一种用于体内测量胰岛微血管血管运动的工具 In Vivo

本文介绍了一种利用优化的被动透明化方法对人类胰腺组织切片进行三维（3D）成像的实验方案。该文详细展示了通过被动光学透明化处理，继而进行多重免疫荧光染色的操作流程，以鉴定支配人类胰岛的自主神经和感觉神经网络中的关键组分。...

人类胰腺神经-胰岛网络的高分辨率三维成像

本胰岛分离方案描述了一种新型的胶原酶注射途径，用于消化外分泌组织，并采用简化的梯度步骤从小鼠中纯化胰岛。该方法包括酶消化、梯度分离/纯化以及人工挑选胰岛。成功分离可每只小鼠获得250–350个高质量且功能完整的胰岛。...

一种简单高效的小鼠胰岛分离方案

离体胰岛研究对糖尿病研究具有重要意义。目前用于研究在天然三维结构中培养的胰岛的技术耗时长、效率低，且很少被使用。本研究介绍了一种简单、高效的新方法，可用于制备高质量的全培养胰岛石蜡切片。...

胰岛组织石蜡切片包埋

本方案概述了一种针对人原代胰岛样本中β细胞的线粒体自噬蛋白复合物形成进行定量分析的方法。该技术因而能够利用有限的生物材料进行线粒体自噬分析，这对于珍贵的人胰腺β细胞样本至关重要。...

利用邻近连接技术原位可视化人胰岛β细胞中的内源性线粒体自噬复合物

本研究介绍了活体胰腺组织切片在胰岛生理学及胰岛-免疫细胞相互作用研究中的应用。...

观察活体胰腺组织切片中的胰岛功能及胰岛-免疫细胞相互作用

我们介绍了急性胰腺组织切片的制备方法及其在共聚焦激光扫描显微镜中的应用，用于在长时间内以高时空分辨率同时研究大量活细胞中的钙动力学。...

急性小鼠胰腺组织切片中钙动力学的共聚焦激光扫描显微成像

学习激光显微切割技术从手术标本中分离人类胰岛β细胞的方法。该方案优化了细胞自发荧光，提高了转录组研究的细胞采集效率，为糖尿病和代谢疾病研究提供可靠的技术支持。

改进的人类胰岛手术标本激光显微切割操作方案

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