Biochemie

Dialyse ist ein verbreitetes Verfahren zur Trennung von Molekülen basierend auf Diffusion in der Biochemie verwendet. In diesem Verfahren ermöglicht eine halbdurchlässige Membran die Bewegung von bestimmten Molekülen basierend auf Größe. Diese Methode kann zur Entfernung von Puffer, Entsalzung, genannt oder den Austausch von Puffer Moleküle oder Ionen von einer Proteinlösung. Dieses Video behandelt die Grundsätze der Dialyse nebst einer allgemeinen Verfahren mehrere Anwendungen der Dialyse...

Enzym-Kinetik beschreibt die katalytische Wirkung von Enzymen, die Biomoleküle, die chemische Reaktionen notwendig für lebende Organismen zu erleichtern. Enzyme wirken auf Moleküle, als Substrate für Form-Produkte bezeichnet. Enzym kinetische Parameter werden über Assays bestimmt, die direkt oder indirekt Substrat oder Produkt Konzentrationsänderungen im Laufe der Zeit messen. Dieses Video wird die grundlegenden Prinzipien der Enzym-Kinetik (einschließlich Ratengleichungen) und kinetische...

Matrix-assisted Laser Desorption Ionisation (MALDI) ist eine Massenspektrometrie Ionenquelle ideal für die Analyse von Biomolekülen. Anstelle von ionisierenden Verbindungen in den gasförmigen Zustand, sind Proben eingebettet in eine Matrix, die durch einen Laser getroffen wird. Die Matrix nimmt den Großteil der Energie; ein Teil dieser Energie wird dann übertragen auf die Probe, die infolgedessen ionisiert. Probe-Ionen können dann mit einem Time-of-Flight Analyzer (TOF) identifiziert werden.

In Tandem-Massenspektrometrie ist ein Biomolekül Interesse von einer biologischen Probe isoliert und dann in mehrere Untereinheiten fragmentiert, um zu helfen, seine Zusammensetzung und Reihenfolge aufzuklären. Dies wird erreicht, indem er Massenspektrometer in Serie. Das erste Spektrometer ionisiert eine Probe und Filter-Ionen einer bestimmten Masse, Verhältnis zu berechnen. Gefilterte Ionen sind dann fragmentiert und an einem zweiten Massenspektrometer wo sind die Fragmente analysiert. Dieses...

Protein-Kristallisation, erhalten eine feste Gitter von Biomolekülen, erläutert Proteinstruktur und ermöglicht die Untersuchung von Proteinfunktion. Kristallisation ist das Trocknen von gereinigten Proteins unter einer Kombination von vielen Faktoren ab, einschließlich Proteinkonzentration, pH-Wert, Temperatur und Ionenstärke. Das gewonnene Kristalle sind kann die Proteinstruktur durch Röntgenbeugung und Berechnung eines Elektron-Dichte-Modells aufgeklärt werden. Dieses Video stellt Protein...

In der Biochemie werden Chromatographie-basierte Reinigungsverfahren eingesetzt, um Verbindungen aus einer komplexen Mischung zu isolieren. Zwei solche Methoden, die von Biochemikern allgemein verwendet sind Größe-Ausschluss-Chromatographie und Affinitätschromatographie. Größe-Ausschluss-Chromatographie trennt eine Spalte verpackt mit porösen Korne Bestandteile einer Mischung abhängig von der Größe. Auf der anderen Seite ermöglicht eine genauere Trennung von Biomolekülen...

Zweidimensionaler Gelelektrophorese (2DGE) ist eine Technik, die Tausende von Biomolekülen aus einer Mischung auflösen kann. Diese Technik beinhaltet zwei verschiedene Trennverfahren zusammen gekuppelt: isoelektrischen Fokussierung (IEF) und Sodium Dodecyl Sulfat Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE). Dies trennt physikalisch Verbindungen über zwei Achsen eines Gels durch ihre isoelektrischen Punkte (eine elektrochemische Eigenschaft) und ihren Molekulargewichten. Das Verfahren in diesem...

Metabolische Kennzeichnung wird verwendet, um die Sonde die biochemischen Veränderungen und Änderungen, die in einer Zelle auftreten. Dies wird erreicht durch den Einsatz von chemischen Analoga, die die Struktur des natürlichen Biomoleküle zu imitieren. Zellen nutzen Analoga in ihrer endogenen biochemischen Prozessen, Herstellung von Verbindungen, die beschriftet werden. Das Label ermöglicht die Einbindung von Erkennung und Affinität-Tags, die dann verwendet werden, um mit anderen biochemischen...

Die elektrophoretische Mobilität Shift-Assay (EMSA) ist eine biochemische Verfahren zur Bindung zwischen Proteinen und Nukleinsäuren zu erhellen. In dieser Probe eines radioaktiven Nukleinsäure und Protein Test gemischt. Bindung wird bestimmt durch Gelelektrophorese trennt Komponenten basierend auf Masse, Ladung und Konformation. Dieses Video zeigt die Konzepte von EMSA und ein allgemeines Verfahren, einschließlich Gel und Protein Vorbereitung, Bindung, Elektrophorese und Erkennung. Anwendungen...

Messung der Konzentration ist ein grundlegender Schritt von vielen biochemischen Assays. Photometrische Proteinbestimmung nutzt die Tatsache, dass je eine Probe Licht-absorbierenden Substanzen enthält, desto weniger wird das Licht durch es übertragen. Da die Beziehung zwischen Konzentration und Absorption linear ist, dieses Phänomen lässt sich die Konzentration in Proben messen wo ist nicht bekannt. Dieses Video beschreibt die Grundlagen der photometrischen Proteinbestimmung und stellt der...

Dichte Gradienten Ultrazentrifugation ist eine verbreitete Methode, zu isolieren und reinigen von Biomolekülen und Zelle Strukturen. Diese Technik nutzt die Tatsache, dass in der Schwebe, Partikel, die Dichter als das Lösungsmittel Sediment, werden während diejenigen, die weniger Dichte schwimmt. Ein High-Speed-Ultrazentrifuge wird verwendet, um diesen Prozess zu beschleunigen um Biomoleküle innerhalb ein Dichtegradient trennen, die durch Überlagerung von Flüssigkeiten abnehmender Dichte in...

Co-Immunopräzipitation (CoIP) und Pulldown-Assays sind eng verwandte Methoden, stabiles Protein-Protein-Wechselwirkungen zu identifizieren. Diese Methoden beziehen sich auf Immunopräzipitation, eine Methode für die Trennung ein Zielprotein an einen Antikörper aus ungebundenen Proteine gebunden. Im CoIP, ist ein Antikörper gebundene Proteine selbst verpflichtet, ein anderes Protein, das nicht mit dem Antikörper bindet, danach erfolgt ein Trennverfahren, das bewahrt die Proteinprotein komplexe.

Rekonstitution ist der Prozess der Rückkehr eines isolierten Biomolekül in seiner ursprünglichen Form oder Funktion. Dies ist besonders nützlich für die Untersuchung der Membranproteine, die ermöglichen wichtige Zellfunktionen und beeinflussen das Verhalten des nahe gelegenen Lipide. Um die Funktion des gereinigten Membranproteine an Ort und Stelle zu studieren, müssen sie wieder hergestellt durch eine künstliche Lipidmembran einzugliedern. Dieses Video stellt Membrane Protein Rekonstitution...

Förster Resonanz Energietransfer (FRET) ist ein Phänomen Nahbereich biochemische Wechselwirkungen untersucht. In Bund kann ein Spender Photoluminescent Molekül nicht Strahlungs-Energie zu einem Akzeptor Molekül übertragen, wenn ihre jeweiligen Emission und Absorption Spektren überschneiden. Die Menge an Energie zu übertragen — und folglich die gesamte Emission von Probe — richtet sich nach der Nähe des Pair Akzeptor-Spender Photoluminescent Moleküle. Bund-Analyse wird kombiniert mit anderen...

Oberflächenplasmonenresonanz (SPR) ist das zugrunde liegende optische Phänomen hinter markierungsfreie Biosensoren, die molekulare Affinität, Kinetik, Spezifität und Konzentration von Biomolekülen zu bewerten. In SPR auftreten biomolekulare Wechselwirkungen auf eines Biosensors gemacht der eine dünne Metallschicht auf ein Prisma. Echtzeit-Interaktionen von Biomolekülen lässt sich durch Messung der Veränderungen des Lichts reflektiert die Unterseite der Metal Dieses Video beschreibt die...