Herstellung von rAAV9 überexprimiert oder Sturz Gene in Mäuseherzen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, das rekombinante Adeno-assoziierte Virus neun oder rAAV9 für die Manipulation der Genexpression in Mausherzen vorzubereiten. Die Methode kann Schlüsselfragen auf dem Gebiet der Kardiologie und Molekulargenetik beantworten, z. B. wie die Genfunktion im Herzen von Mäusen in vivo untersucht werden kann. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie es uns ermöglicht, die Genexpression und -funktion in vivo im Herzen von Mäusen leicht zu manipulieren, was den funktionellen Zugang zur Genfunktion ermöglicht, ohne auf die genetisch veränderten Tiermodelle angewiesen zu sein.

Nach der Generierung von rAAV9-Konstrukten und der Kultivierung von HEK293-Zellen gemäß dem Textprotokoll werden zur Transfizierung der Zellen am ersten Tag 70 Mikrogramm AAV Rep-Cap-Plasmid, 70 Mikrogramm rAAV9-Plasmid und 200 Mikrogramm Ad-Helfer-Plasmid in einem 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen kombiniert. Geben Sie 49 Milliliter DMEM ohne FBS bei Raumtemperatur in die Tube und mischen Sie gut. Um dann eine PEI-zu-DNA-Lösung von vier zu eins herzustellen, geben Sie 1.360 Mikroliter PEI in das Röhrchen und mischen Sie gut.