Métodos básicos de biología celular y molecular

Muchos experimentos biomédicos requieren manipulación de una cantidad conocida de células, con el fin de lograr exactos, reproducibles y los datos estadísticamente relevantes. Por lo tanto, aprender a contar las células es una técnica indispensable para cualquier éxito científico biomédico. La forma más común para contar las células es mediante un hemacitómetro - un instrumento que lleva dos rejillas grabado a láser, que ayudan a la enumeración de una alícuota células bajo un microscopio simple...

Las líneas celulares se utilizan con frecuencia en experimentos biomédicos, ya que permiten la rápida cultura y extensión de tipos de células para análisis experimental. Líneas de células se cultivan en condiciones similares en comparación con las células recién aislado, o primaria, pero con algunas diferencias básicas importantes: (i) células requieren sus propios cócteles de factor de crecimiento específico y (ii) su crecimiento debe ser más de cerca controlar que las células primarias, como...

La reacción en cadena de polimerasa, o PCR, es una técnica utilizada para amplificar DNA a través de termociclaje rápido – cyles de cambios de temperatura en intervalos de tiempo fijo. Usando una polimerasa termoestable de la DNA, PCR puede crear numerosas copias de ADN de bloques de ADN llamado Dinucleósido trifosfatos o dNTPs. Hay tres pasos en PCR: desnaturalización, recocido y elongación. Desnaturalización es el primer paso en el ciclo y hace que el ADN derretir interrumpiendo enlaces...

Electroforesis de ADN es una técnica utilizada para la detección y separación de las moléculas de ADN. Un campo eléctrico se aplica a una matriz de gel de agarosa, y dentro del gel, carga de partículas serán migrar y separar según el tamaño. Los fosfatos cargados negativamente de la espina dorsal de la DNA causan fragmentos de ADN avanzar hacia el ánodo - un electrodo cargado positivamente. El video explica el mecanismo por el que ADN fragmentos se resuelven en un gel de agarosa, y proporciona...

Electroforesis del Gel de poli-acrilamida de sodio dodecil sulfato, o SDS-PAGE, es una técnica utilizada para separar mezclas de proteínas basadas en su tamaño y nada más. SDS, un detergente aniónico, se utiliza para producir una carga uniforme a lo largo de las proteínas que han sido linealizado. Primera carga en un gel hechos de poliacrilamida y aplicando un campo eléctrico sobre el gel, luego se separan proteínas SDS-revestida. El campo eléctrico actúa como la fuerza impulsora, dibujo las...

Transformación es el proceso que ocurre cuando una célula ingiere ADN extraño de sus alrededores. Transformación puede ocurrir en la naturaleza en ciertos tipos de bacterias. En biología molecular, transformación es reproducir artificialmente en el laboratorio mediante la creación de poros en las membranas celulares bacterianas. Las células bacterianas que son capaces de tomar ADN del ambiente se denominan células competentes. En el laboratorio, las células bacterianas pueden hacerse...

El término "transformación" refiere a la ingestión celular de ADN extraño. En la naturaleza, la transformación puede ocurrir en ciertos tipos de bacterias. En biología molecular, sin embargo, transformación es inducida artificialmente a través de la creación de poros en las paredes celulares bacterianas. Las células bacterianas que son capaces de tomar ADN del ambiente se denominan células competentes. Espectro de células se pueden producir en el laboratorio y la transformación de estas...

Un análisis enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA) se realiza generalmente para detectar la presencia o la cantidad de una proteína diana de interés dentro de una muestra experimental. Detección de la proteína Diana es hecha posible por los anticuerpos, que hacen el ELISA de un inmunoensayo. A través de una serie de incubación y de pasos de lavado, estos anticuerpos, que con frecuencia están vinculados, o conjugado, a una enzima, detecta proteína capa el fondo de un pozo en una placa de...

Purificación del plásmido es una técnica utilizada para aislar y purificar ADN de plásmido de ADN genómico, las proteínas, los ribosomas y la pared celular bacteriana. Un plásmido es un pequeño, circular, doble cadena de ADN que se utiliza como transportador de moléculas de ADN específicas. Cuando se introduce en un organismo anfitrión a través de la transformación, un plásmido se replicarán, creando numerosas copias del fragmento de DNA en estudio. En este video, se describe un procedimiento...

Purificación del gel se utiliza para recuperar los fragmentos de ADN después de la separación electroforética. Recuperación de ADN de un gel de agarosa incluye tres pasos básicos: encuadernación, lavado y liberador de una columna de sílice. ADN se cree que se unen a la sílice en presencia de sal alta a través de un puente de sal. Siguiendo el enlace, ADN es lavado de impurezas y eluyen condiciones bajo sal interrumpir esta interacción. Este video va a través de un procedimiento generalizado,...

Western Blot se utiliza para identificar la presencia de proteínas específicas en muestras separadas electroforéticamente. Después de separación mediante una técnica conocida como electroforesis en gel de poliacrilamida sodio dodecil sulfato, o SDS-PAGE, transferencia occidental se utiliza para mover las proteínas de un gel de poliacrilamida en un pedazo de membrana que atrapa las proteínas en sus respectivos localizaciones. A continuación, las membranas son sondeadas con los anticuerpos en...

La transfección es el proceso de inserción de material genético, como el DNA y el RNA trenzado doble, en células de mamíferos. La inserción de ADN en una célula permite la expresión, o la producción de proteínas utilizando la maquinaria propia de células, mientras que la inserción de ARN en una célula se utiliza abajo-para regular la producción de una proteína específica deteniendo la traducción. Mientras que el sitio de acción transfected RNA es el citoplasma, ADN debe ser transportado al...

En biología molecular, la ligadura se refiere a la Unión de dos fragmentos de ADN mediante la formación de un enlace fosfodiéster. Una enzima conocida como una ligasa cataliza la reacción de ligadura. En la célula, ligasas reparación de roturas del filamento solo y doble que se producen durante la replicación del ADN. En el laboratorio, ligase de la DNA se utiliza durante la clonación molecular para unir fragmentos de ADN de insertos con vectores – las moléculas de ADN del portador que se...

Enzimas de restricción o endonucleasas reconocen y cortan el ADN en una secuencia específica. Estas enzimas se producen naturalmente en bacterias como una defensa contra bacteriófagos - virus que infectan bacterias. Bacteriano enzimas de restricción cortan el DNA de bacteriófagos invasores dejando el ADN genómico bacteriano ileso debido a la adición de grupos metilo. Este video explica los principios básicos de las enzimas de restricción incluyendo: cómo se nombran las enzimas de restricción...

Clonación molecular es un conjunto de métodos que se utilizan para introducir ADN recombinante en un vector - un portador de las moléculas de ADN que se replican fragmentos de ADN recombinante en los organismos huésped. El fragmento de ADN, que puede ser un gen, puede ser aislado de un espécimen de procariota o eucariota. Tras aislamiento del fragmento de interés, o insertar, el vector y el inserto deben ser corte con enzimas de restricción y purificados. Las piezas purificadas se unen entre...