Bioquímica

Diálisis es una técnica común utilizada en bioquímica para separar moléculas basadas en difusión. En este procedimiento, una membrana semipermeable permite el movimiento de ciertas moléculas basado en el tamaño. Este método puede ser aplicado a la remoción de búfer, conocida como la desalación, o intercambiando buffer moléculas o iones de una solución proteica. Este video cubre los principios de la diálisis junto con un procedimiento general. repasan varias aplicaciones de la diálisis,...

Cinética de la enzima describe los efectos catalíticos de las enzimas, que son biomoléculas que facilitan las reacciones químicas necesarias para los organismos vivos. Las enzimas actúan sobre moléculas, contempladas como sustratos a los productos de la forma. Parámetros cinéticos de la enzima se determinan mediante ensayos que directa o indirectamente medir los cambios en la concentración de substrato o producto con el tiempo. Este video cubre los principios básicos de la cinética de la enzima...

Ionización de la desorción del laser asistida por matriz (MALDI) es una fuente de iones espectrometría de masas ideal para el análisis de biomoléculas. En lugar de radiaciones ionizantes compuestos en estado gaseoso, las muestras son embebidas en una matriz, que es golpeada por un láser. La matriz absorbe la mayoría de la energía; entonces algo de esta energía se transfiere a la muestra, que se ioniza como resultado. Los iones de la muestra pueden identificarse entonces con un analizador de...

En spectrometry total en tándem biomoléculas de interés es aislada de una muestra biológica y luego se fragmentó en múltiples subunidades con el fin de ayudar a elucidar su composición y secuencia. Esto se logra con espectrómetros de masas en serie. El primer espectrómetro ioniza una muestra y el filtro de iones de una masa específica para cargar cociente. Filtrado iones entonces son fragmentados y pasa a un segundo espectrómetro de masas donde se analizan los fragmentos. Este video presenta...

Cristalización de proteínas, obteniendo un sólido entramado de biomoléculas, aclara la estructura de la proteína y permite el estudio de la función de la proteína. Cristalización consiste en secado purificado de la proteína en una combinación de muchos factores, incluyendo el pH, temperatura, fuerza iónica y concentración de la proteína. Una vez que se obtienen cristales, la estructura de la proteína puede ser aclarada por difracción de rayos x y el cómputo de un modelo de densidad de...

En Bioquímica, se emplean métodos basados en cromatografía de purificación para aislar compuestos de una mezcla compleja. Dos tales métodos utilizados comúnmente por los bioquímicos son cromatografía por exclusión de tamaño y cromatografía de afinidad. En cromatografía por exclusión de tamaño, una columna de granos porosos separa los componentes de una mezcla basada en tamaño. Por otro lado, cromatografía de afinidad permite una separación más específica de biomoléculas utilizando una columna...

Electroforesis en gel bidimensional (2DGE) es una técnica que puede resolver miles de biomoléculas de la mezcla. Esta técnica consiste en dos métodos de separación diferentes que han sido acoplados entre sí: la concentración isoeléctrica (IEF) y sodio dodecil sulfato poliacrilamida gel electroforesis (SDS-PAGE). Esto físicamente separa compuestos a través de dos ejes de un gel por sus puntos isoeléctricos (una propiedad electroquímica) y sus pesos moleculares. El procedimiento en este video...

Etiquetado metabólico se utiliza para probar las transformaciones bioquímicas y modificaciones que ocurren en una célula. Esto se logra mediante el uso de análogos químicos que imitan la estructura de biomoléculas naturales. Las células utilizan análogos en sus procesos bioquímicos endógenos, produciendo compuestos que están etiquetados. La etiqueta permite la incorporación de la detección y etiquetas de afinidad que pueden utilizarse para aclarar las vías metabólicas mediante otras técnicas de...

El análisis de cambio de movilidad electroforética (EMSA) es un procedimiento bioquímico utilizado para aclarar la unión entre proteínas y ácidos nucleicos. En este ensayo se mezclan un ácido nucleico radiomarcado y prueba de la proteína. Enlace se determina mediante electroforesis en gel que separa componentes basados en la masa, carga y conformación. Este video muestra los conceptos de EMSA y un procedimiento general, incluyendo detección, encuadernación, electroforesis y preparación del gel...

Medición de la concentración es un paso fundamental de muchos ensayos bioquímicos. Determinación fotométrica de la proteína aprovecha el hecho de cuanto más una muestra contiene sustancias absorben la luz, menos la luz se transmite a través de él. Puesto que la relación entre concentración y absorción es linear, este fenómeno puede utilizarse para medir la concentración en las muestras donde no se sabe. Este video describe los fundamentos de la determinación fotométrica de proteínas y presenta...

Ultracentrifugación de gradiente de densidad es una técnica común utilizada para aislar y purificar las estructuras de biomoléculas y células. Esta técnica aprovecha el hecho de que, en suspensión, partículas que son más densas que el disolvente serán sedimento, mientras que aquellos que son menos densas flotarán. Una ultracentrífuga de alta velocidad se utiliza para acelerar este proceso con el fin de separar biomoléculas dentro de un gradiente de densidad, que puede ser establecido por...

Co-inmunoprecipitación (CoIP) y ensayos de pull-down son métodos de cerca relacionados para identificar las interacciones proteína-proteína estable. Estos métodos están relacionados con inmunoprecipitación, un método para la separación de una proteína diana ligada a un anticuerpo de proteínas independientes. En CoIP, una proteína anticuerpo está obligado a otra proteína que no se une con el anticuerpo, esto es seguido por un proceso de separación que conserva las proteínas complejas. La...

Reconstitución es el proceso de volver una biomolécula aislado a su forma o su función original. Esto es particularmente útil para el estudio de proteínas de la membrana, que permiten funciones celulares importantes y afectan el comportamiento de los lípidos cercano. Para estudiar la función purificada de proteínas de membrana in situ, debe ser reconstituidos por integrarlos en una membrana lipídica artificial. Este video presenta la membrana proteína reconstitución conceptos y procedimientos...

Transferencia de la energía de Förster Resonancia (FRET) es un fenómeno para investigar interacciones bioquímicas de la cerrar-gama. En el traste, una molécula fotoluminiscente de donantes no radiativamente puede transferir energía a una molécula aceptora si se superponen sus respectivos espectros de emisión y absorción. La cantidad de energía transferida — y, en consecuencia, la emisión total de la muestra — depende de la proximidad de un par de donantes aceptador de moléculas...

Resonancia de plasmón superficial (SPR) es el fenómeno óptico subyacente detrás de etiqueta-libre biosensores para evaluar la afinidad molecular, cinética, especificidad y concentración de biomoléculas. En SPR, las interacciones biomoleculares se producen en un biosensor de una fina capa de metal sobre un prisma. Interacciones en tiempo real de biomoléculas pueden controlarse mediante la medición de los cambios de la luz reflejada de la parte inferior de la metal Este video describe los...