Iniezione di Vene Portale: Un metodo per studiare la metastasi del cancro al fegato

Il fegato è un sito metastatico secondario per la maggior parte dei tumori. Per studiare la metastasi, possiamo iniettare cellule tumorali nella vena portale, che trasporta sangue da altre parti del corpo al fegato.

Iniziare posizionando un mouse anestetizzato in posizione supina. Sterilizzare l'area addominale nuda usando clorexidina e alcol. Usando i microscissori, fai un'incisione tra le costole e la quarta ghiandola mammaria sul lato sinistro dell'animale senza danneggiare gli organi interni.

Posizionare un tampone di garza imbevuto di soluzione salina sterile vicino all'incisione. Estrarre delicatamente l'intestino usando un batuffolo di cotone sterile per rivelare la vena del portale e posizionarlo sulla garza. Coprire gli organi con il cuscinetto di garza per evitare l'asciugatura. Inserire l'ago della siringa contenente cellule tumorali etichettate fluorescentmente nella vena portale e iniettare lentamente le cellule. Attendere alcuni secondi per evitare il riflusso delle cellule e rimuovere con cura l'ago.

Dopo l'iniezione, le cellule tumorali di solito viaggiano nel sinusoide e invadono gli epatociti vicino alla triade portale per metastasi. Riposizionare gli organi nella cavità addominale e suturare l'incisione. Nel protocollo di esempio, eseguiremo l'iniezione di vene portale per studiare la metastasi del cancro al seno al fegato.

Prima di iniziare la procedura, pulire tutte le superfici dell'area chirurgica con candeggina al 10%. Un'ora prima delle iniezioni, trattare topi femmine BALB/c di 8-15 settimane con 100 microlitri di analgesia per la gestione del dolore. Applicare un unguento agli occhi dell'animale. Quindi, posizionare il mouse nella posizione supina e confermare il livello appropriato di sedazione con il dito del mouse.

Successivamente, disinfettare le aree chirurgiche e circostanti dell'animale, compresa la coda, con tre salviette sterili alternate di garza imbevute del 2% di clorexidina e due salviette per tamponi per la preparazione dell'alcol. Dopo l'ultima salvietta di clorexidina, utilizzare un bisturi sterile per fare un'incisione di 1 pollice nella pelle tra le pianure mediana e sagittale sul lato sinistro della bocca, iniziando appena sotto le costole e terminando sopra la quarta ghiandola mammaria inguinale, seguita da un'incisione simile di un pollice attraverso il peritoneo.

Ora, pipettare le cellule tumorali su e giù più volte per rimospendare la soluzione cellulare, e caricare una siringa ad ago rimovibile da 25 microlitri, dotata di un ago calibro 32 con 10 microlitri delle cellule. Deprimere lo stantuffo fino a quando le cellule non sono sulla punta dell'ago e lo stantuffo è al volume appropriato per l'iniezione. Pulire l'esterno dell'ago caricato con un tampone alcolico sterile per rimuovere eventuali cellule tumorali esterne, facendo attenzione a evitare bastoncini d'ago.

Quindi, tenendo la pelle e il rivestimento peritoneale del lato mediano dell'incisione con le forcep, utilizzare un batuffolo di cotone sterile per spostare attentamente l'intestino crasso e tenue su una garza sterile imbevuta di soluzione salina sterile. Coprire gli organi interni nella garza imbevuta di salina per mantenere l'umidità interna e la sterilità. Quando la vena porta è visibile, avere un assistente che tiene delicatamente l'intestino fuori mano per esporre la vena porta con il batuffolo di cotone sterile e inserire l'ago da 3 a 5 millimetri nella vena del portale, circa 10 millimetri sotto il fegato con un angolo inferiore a 5 gradi, smussare lateralmente.

Iniettare lentamente l'intero volume delle cellule tumorali, permettendo al sangue di scorrere oltre la testa dell'ago per diversi secondi per evitare un riflusso delle cellule tumorali dalla vena.

Poiché la corretta visualizzazione, accesso e iniezione nella vena del portale è essenziale, prenditi il tempo per garantire che il posizionamento della vena del portale in relazione all'ago sia soddisfacente prima di tentare l'iniezione.

Quando tutte le cellule sono state iniettate, rimuovere l'ago applicando contemporaneamente una leggera pressione sulla vena con un applicatore sterile per punta di cotone. Quindi, utilizzare un nuovo applicatore sterile a punta di cotone per contenere un pezzo quadrato di garza emostatica da 0,5 a 1 centimetro sul sito di iniezione.

Dopo cinque minuti, sollevare attentamente la garza per valutare la chiusura delle vene. Quando il flusso sanguigno è cessato completamente, rimuovere la garza e riportare l'intestino alla cavità addominale. Utilizzando un modello di sutura semplice, continuo o interrotto, chiudere il rivestimento peritoneale con una sutura e un cono sterili da 4-0 vicrilici.

Dopo aver chiuso la pelle nello stesso modo, iniettare 100 microlitri di anestetico locale lungo il sito di incisione, seguito da consegna sottocutanea di 0,5 millilitri di soluzione salina sterile.