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DOI: 10.3791/50646-v
Loretta Müller1, Luisa E. Brighton1, Johnny L. Carson1,2, William A. Fischer II1,3, Ilona Jaspers1,2,4
1Center for Environmental Medicine, Asthma, and Lung Biology,The University of North Carolina at Chapel Hill, 2Department of Pediatrics,The University of North Carolina at Chapel Hill, 3Pulmonary Diseases and Critical Care,The University of North Carolina at Chapel Hill, 4Curriculum in Toxicology,The University of North Carolina at Chapel Hill
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Células epiteliales nasales, obtenidas mediante biopsia raspadura superficial de voluntarios humanos, se expanden y se transfieren a insertos de cultivo de tejidos. Al llegar a la confluencia, las células se cultivan en la interfase aire-líquido, produciendo cultivos de células ciliadas y no ciliadas. Cultivos de células epiteliales nasales diferenciados proporcionan modelos experimentales viables para el estudio de la mucosa respiratoria.
El objetivo general de este procedimiento es cultivar células epiteliales nasales indiferenciadas en la interfaz aire-líquido. Esto se logra obteniendo primero células epiteliales nasales superficiales de un voluntario humano. El segundo paso es sembrar las células en placas de cultivo de tejidos y luego expandir las células en frascos.
A continuación, las células expandidas se siembran en transpocillos y se cultivan hasta alcanzar la cofluidez. El paso final es eliminar el medio de cultivo de tejido apical de los cultivos celulares confluentes en los transpocillos para establecer las condiciones de cultivo de la interfaz aire-líquido. En última instancia, las células cultivadas en la interfaz aire-líquido durante tres o cuatro semanas se rediferenciarán en un cultivo de células epiteliales nasales mucociliares, imitando el fenotipo del epitelio nasal in vivo.
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