טכניקות PCR

סרטון זה מדגים את תפקידה של תגובת שרשרת פולימראז טיפתית דיגיטלית בזיהוי מוטציה אינדל בדגימת DNA. הדיוק והרגישות הגבוהים של ddPCR מאפשרים זיהוי מדויק ועקבי של מוטציות נדירות הקיימות בדגימה, גם ברמות נמוכות. הוא יכול לזהות ולכמת מוטציות אינדל באזורים שונים של הגנום, ומספק תובנות חשובות על מנגנוני המוטציה וההשלכות התפקודיות של מוטציות אלה.

סרטון זה מדגים את תגובת שרשרת פולימראז הדרגתי לאופטימיזציה של טמפרטורת החישול של פריימרים, הקובעת טמפרטורת חישול הדרגתית לאורך בארות. ההשפעה של טמפרטורות חישול שונות נקבעת על ידי התשואה של מוצרים מוגברים המסייעים לייעל את מצב התגובה.

בסרטון זה, אנו מדגימים את טכניקת ה-PCR הדיגיטלי הדו-צדדי (ddPCR) – שינוי של טכניקת ה-PCR המסורתית השימושית בזיהוי שני סמנים גנטיים שונים בו זמנית. תגובת PCR יחידה מחולקת לטיפות מתחלבות בגודל ננוליטר המועצמות באופן עצמאי, וזיהוי אותות הגברה פלואורסצנטיים בצבעים שונים מחלק הטיפות משמש לחישוב הריכוז ההתחלתי של רצפי המטרה.

סרטון זה מדגים שיטה כמותית לזיהוי זיהום ויראלי באמצעות PCR שעתוק לאחור בזמן אמת. שלב השעתוק ההפוך ממיר את הרנ"א ל-cDNA, אשר לאחר מכן מוגבר באמצעות מחזורי PCR. נוכחותו של RNA ויראלי במדגם מאושרת על ידי ניתוח עקומות ההגברה והדיסוציאציה של ה- DNA המתקבל מה- PCR.

סרטון זה מתאר תגובת שרשרת פולימראז חוסמת מסוג פראי, או WTB-PCR, המזהה מוטציות סומטיות. הטכניקה מבוססת PCR משתמשת בחומצת גרעין נעולה, או LNA, אוליגונוקלאוטיד שנקשר לאלל הבר המשלים שלו וחוסם את התארכותו. החסימה מאפשרת באופן סלקטיבי הגברה של אללים מוטנטיים ברמה נמוכה על פני הגרסאות הפראיות שלהם בדגימה.

בסרטון זה אנו דנים בתגובת השרשרת הכמותית של פולימראז, qPCR, כדי למנות בקטריופאג'ים מסוג T7 באמצעות כימות DNA. הצבע הפלואורסצנטי בתערובת ה-PCR נקשר לגדילים החדשים של הדנ"א המסונתז ופולט פלואורסצנטיות, הנמדדת.

סרטון זה מתאר את הטכניקה של הגברת DNA חד-גדילי באמצעות מיקרוספרות פולימריות מצופות אוליגונוקלאוטיד בתגובה של צינור יחיד. תהליך זה מניב דנ"א חד-גדילי טהור, שיכול לשמש גם לריצוף דנ"א ולניתוח מיקרו-מערך.

סרטון זה מתאר תגובת שרשרת פולימראז מקוננת, טכניקה המורכבת משני תהליכי הגברה רציפים של PCR באמצעות שתי ערכות פריימר. קבוצת הפריימרים הראשונה מיועדת לרצף במעלה הזרם של הקבוצה השנייה, וכתוצאה מכך הגברה סלקטיבית של רצפי גנים ספציפיים. PCR זה רגיש וספציפי יותר מאשר PCR רגיל והוא נמצא בשימוש נרחב כטכניקת זיהוי עבור מחלות שונות.

בסרטון זה, אנו מתארים טכניקת PCR התכה ברזולוציה גבוהה כדי לקבוע את פולימורפיזם האורך של מקטעי DNA באורכי רצף משתנים, בהתבסס על ניתוח טמפרטורת התכה.

סרטון זה מדגים את טכניקת תגובת השרשרת של פולימראז טיפות מרובות לכימות סימולטני של אזורי DNA מתילציה באוכלוסיות תאי דם לבנים שונות כסמן ביולוגי מוקדם לאבחון קליני ופרוגנוזה.

סרטון זה מדגים את התועלת של PCR דיגיטלי בפורמט שבב בצינור לזיהוי וריאציות נוקלאוטידים בודדים בדגימות DNA. תגובת PCR יחידה מחולקת לחדרים הפועלים כתגובות PCR עצמאיות, וזיהוי אותות פלואורסצנטיים מהמטרות המוגברות בתאים משמש לחישוב תדירות האלל המשתנה בדגימה.

סרטון זה מדגים PCR דיגיטלי מבוסס שבב — וריאציה של טכניקת ה-PCR הדיגיטלית השימושית בזיהוי גרסאות תמלול נדירות. תגובת ה- PCR מחולקת לחדרים של שבב ננופלואידי, שכל אחד מהם פועל כתגובה עצמאית. זיהוי אותות פלואורסצנטיים מהתאים עם מטרות מוגברות מאשר את נוכחותם של וריאנטים נדירים של תעתיק בדגימה.