인도 잉크 인플레이션: 종양 Nodules를 시각화 하는 염색 방법

먼저 안락사된 마우스 복부면을 수술용 침대에 올려 놓고 동물의 팔다리를 고정하는 것으로 시작합니다. 가위를 사용하여, 타액 땀샘까지 늑골 케이지를 통해 중간선을 따라 잘라. 파이펫 팁을 기관 아래에 놓고 이를 높이고 분리합니다. 수술침대를 180도 회전시다. 기관체에 인도 잉크 얼룩이 들어있는 주사기 바늘을 삽입하고 저항을 느낄 때까지 잉크를 폐에 주입하십시오.

암세포는 세포 표면에 강한 음전하를 생성하는 다량의 젖산을 분비합니다. 이 세포가 인도 잉크, 산성 얼룩으로 얼룩지면 세포 표면은 얼룩을 격퇴하고 얼룩이 없는 상태로 유지됩니다.

가위를 사용하여 기관지를 자르고 폐 아래에 핀셋 을 밀어 냅니다. 동물의 몸에서 폐를 부드럽게 당깁니다. 물에 폐를 헹구고 Fekete의 용액이 들어있는 바이알로 옮겨 과도한 얼룩을 제거하고 연기 후드에 조직을 고정시하십시오. 종양 간절은 어두운 배경에 대해 흰색으로 나타납니다.

다음 프로토콜에서는 폐 전이를 검증하기 위해 인도 잉크 인플레이션 기술을 수행할 것입니다.

1차 종양의 전이를 폐로 검증하려면 먼저 폴리스티렌 보드의 척추 위치에 마우스를 배치하고 다리를 고정하여 기관체에 대한 방해받지 않는 접근을 보장합니다. 70% 에탄올로 마우스를 스프레이합니다. 그런 다음 한 쌍의 가위를 사용하여 마우스의 중간 복부의 중간선을 따라 흉곽을 통해 타액 선지를 향해 절개를 합니다. 기관체를 식별합니다. 그런 다음 집게를 사용하여 주변 조직을 제거합니다.

다음으로, 한 손에 파이펫 팁을 들고 기관 아래에 팁을 실어 내고 조직을 몸에서 부드럽게 들어 올립니다. 기관체를 높이 유지, 해부 플랫폼을 회전 180도. 그런 다음 반 cc 27 게이지 결핵 주사기를 기관지에 삽입하고 강한 저항이 느껴지을 때까지 인도 잉크로 폐를 완전히 팽창시다.

그런 다음, 가위 쌍을 사용하여 기관지를 잘라냅니다. 마우스를 하나의 집게로 제자리에 놓고 폐 아래에 다른 집게를 삽입하고 폐 로브를 마우스에서 꺼냅니다. 폐를 물 비커에 잠깐 헹구고 조직을 연기 후드로 옮킨다. 그런 다음, 페케테용액 3밀리리터를 함유한 유리 신경병병에 폐를 배치하여 용액이 증발하는 것을 방지하기 위해 유리병을 캡핑합니다. 몇 분 후, 페트리 접시에 폐를 전송하고 단일, 흰색, 전이성 종양 결절의 수를 계산합니다.