인도 잉크 인플레이션: 종양 Nodules를 시각화 하는 염색 방법

Overview

이 비디오는 종양 을 베어링 마우스 폐에서 종양 요절을 정량화하기 위해 염색 방법인 인도 잉크 인플레이션을 설명합니다. 염색 후 폐는 폐의 종양 결절을 관찰하기 위해 Fekete의 용액에 고정됩니다.

Protocol

1. 종양 베어링 폐의 인도 잉크 인플레이션을 사용하여 폐 전이의 검증

참고: 루시파라제 라이브 종양 이미징 결과를 검증하려면 종양을 낳는 마우스 폐의 인도 잉크 인플레이션을 수행하여 종양 결절을 정량화하십시오. 4T1 세포는 또한 다른 장기 및조직(도 1)에전이되며, 따라서 이러한 장기의 조직학적 검사를 통해 종양 전이를 검증하는 데 필요한 경우 수행해야 한다. 이 프로토콜은 폐 전이를 예로 사용합니다.

1. 안락사에 대 한 그들의 기존 홈 케이지에 쥐를 유지. 다른 동물들과 함께 수용 할 때, 다른 케이지에 안락사되지 않는 그 마우스를 재배치.
2. 케이지 필터 상단을 제거하고 CO2 필터 상단으로 교체합니다. 압축 된 CO2 가스 실린더 (100%) 켜십시오. CO2 필터 상단에 연결되어 있습니다. 유량을 2 L/분으로 설정하고 CO2를 최소 10분 동안 켜십시오. 마우스가 10분 말에 여전히 호흡하는 경우, 마우스가 호흡을 멈춘 후 최소 1분까지 CO2를 켜십시오. CO2 실린더 제어 및 유량 계측기끄기. 3분 이상 기다렸다가 필터 상단을 제거합니다.
3. 희생된 마우스를 폴리스티렌 보드에 배치합니다. 다리를 고정하여 기관체에 방해받지 않도록 합니다. 70%의 에탄올로 마우스를 스프레이합니다.
4. 한 쌍의 가위를 사용하여 흉곽을 통해 타액 선으로 마우스의 중간 복부의 중간선을 따라 잘라냅니다. 기관체를 관찰하십시오. 집게를 사용하여 기관 주변의 조직을 제거하여 기관진을 노출시하십시오.
5. 기관 아래에 파이펫 팁을 스레드합니다. 한 손으로 팁을 잡고 기관차를 몸에서 부드럽게 들어 올립니다.
6. 마우스를 180°하는 플랫폼을 회전합니다. 1/2 CC 27 G 1/2 결핵 주사기를 사용하여 기관을 통해 폐에 인도 잉크 (인도 잉크 10 % 및 0.1 % 암모늄 수산화암모늄)를 주입하십시오. 강한 저항이 느껴지을 때까지 잉크로 폐를 완전히 팽창시다.
7. 가위 한 켤레를 사용하여 기관지를 잘라냅니다. 마우스를 잡고 폐 아래에 또 다른 집게 세트를 삽입하고 마우스에서 폐 엽을 당겨 집게를 사용합니다. 물이 들어있는 비커에 폐를 잠깐 헹구는 다.
8. 화학 연기 후드에서, 페케테용액 3ml(50% 에탄올, 6% 포름알데히드, 3% 빙하 아세트산)를 함유한 유리 신자극 바이알로 폐를 옮길 수 있습니다. 용액이 증발하지 않도록 유리병을 캡합니다.
   참고: 조직은 페케테의 용액에 무기한 저장될 수 있습니다.
9. 몇 분 후, 검은 폐에 흰색 점으로 종양 적절을 관찰(도 1). 백색 종양 멍청이는 눈으로 보입니다. 연기 후드의 접시에 폐를 전송하고 흰색 반점의 수를 계산합니다. 각 백색 반점은 단일 전이성 종양 단두를 나타냅니다.

Representative Results

그림 1. 인도 잉크 인플레이션에 의해 폐 종양 Nodules의 시각화. 종양 베어링 마우스의 폐는 인도 잉크로 팽창하고 Fekete의 용액에 고정되었습니다. 흰색 점은 폐 전이입니다.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
9 mm AutoClip Applier	Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD	427630
Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Fisher	8940
Dissecting Fine-Pointed Forceps	Fisher	8875
70% Ethanol	Ultrapure-usa.com
1/2 CC 27 G 1/2 tuberculin syringe	Becton Dickinson and Co. NJ	305620