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DOI: 10.3791/57749-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Questo protocollo combina la caratterizzazione di un campione della proteina mediante elettroforesi capillare e uno screening rapido legante per ligandi caricate mediante elettroforesi capillare di affinità. È consigliabile per le proteine con una struttura flessibile, quali proteine intrinsecamente disordinati, per determinare eventuali differenze nell'associazione per diversi conformeri.
Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave riguardanti in tettonica le proteine di disordine intrinseco come i cambiamenti conformazionali dovuti al legame del ferro metallico. Il vantaggio principale di questa tecnica è che richiede pochissima attrezzatura e i risultati possono essere ottenuti molto rapidamente. A dimostrare la procedura sarà Matthias Stein, uno studente laureato del mio laboratorio.
Per iniziare, utilizzare un tagliavetro su una lastra di vetro per tagliare un capillare di silice fusa nuda con un rivestimento esterno in poliammide e un diametro interno di 50 micron in lunghezze di 33 e 30 centimetri. Utilizzare una penna per contrassegnare il centro di una finestra di rilevamento larga un centimetro a una distanza di 24,5 centimetri da un'estremità del capillare per l'esperimento CGE e a 21,5 centimetri da un'estremità del capillare per l'esperimento ACE. Usando una fiamma ossidrica, bruciare il rivestimento esterno in poliammide 0,5 centimetri prima e dopo ogni segno.
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