Name: Adeno - 관련 바이러스성 벡터의 Intracranial 분사 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-17T18:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: 학습하세요 시각피질에서 AAV 벡터를 이용한 신경세포와 신경교세포의 형광 표지법. 이 기술은 특정 세포 유형을 표적으로 하여 생체 내 영상 분석을 가능하게 하며, 형질전환 마우스 계통보다 비용 효율적입니다.

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이 작품은 NIH (EY012977), 버로우즈 웰컴 기금, 화이트홀 재단과 슬로언 재단 (AKM)에서 의생명 과학의 경력 수상의 부여에 의해 가능하게되었다.

1. 바이러스 처리 및 저장 <ol><li> 적절한 보호와 처리 기술을 사용하는 바이러스의 biosafety 레벨에 따라 선택하여야한다. 이러한 관행은 CDC 웹사이트에서 사용 가능한 미생물 및 바이오 메디컬 연구소 5 일 버전에 Biosafety에서 찾을 수 있습니다 ( <a href="http://www.cdc.gov/od/OHS/biosfty/bmbl5/bmbl5toc.htm">http://www.cdc.gov/od/OHS/biosfty/bmbl5/bmbl5toc.htm</a> ). AAV 벡터의 사용은 Biosafety 레벨 1 (BSL - 1)에 대한 승인. 바이러스를 다룰 때 실험을 여기에 표시된 들어, 실험 복과 장갑은 BSL - 1 에이전트를 처리하기위한 절차에 따라 착용한다. </li><li> 바이러스의 활동을 유지하기 위해서는 반복 동결 융해를 피하기 위해 작은 aliquots로 나누어하는 것이 최선입니다. </li><li> 불필요한 개체의 BSC를 지우고 70 % EtOH로 표면을 살균하여 바이러스를 aliquoting위한 Biosafety 내각 (BSC) 클래스 II를 준비합니다. AAV - 오염된 폐기물을 수집하기 위해 후드의 10 % 표백제 솔루션을 포함하는 비커를 놓습니다. 또한 무균 0.5mL 튜브와 드라이 아이스의 컨테이너가있는 BSC에 배치. </li><li> BSC 외부 얼음에 바이러스 재고를 녹여. </li><li> 소용돌이 바이러스와 BSC 내부 튜브를 엽니다. </li><li> 0.5mL 튜브에 원하는 나누어지는 볼륨 (예 : 5 μL)를 피펫, 튜브를 닫고하는 드라이 아이스에 배치 바이러스를 플래시 동결. </li><li> 모든 바이러스가 aliquoted되면, 바이러스 튜브와 10 %의 표백제가 들​​어있는 폐기물 용기에 피펫 팁 처분. </li><li> 후드에서 폐기물 컨테이너를 제거하고 추가로 10 % 표백제를 추가한 다음 싱크대 아래 표백제를 부어. 귀하의 연구소의 biosafety 임원의 지시에 따라 생물 학적 용기에 플라스틱 폐기물의 배출. </li><li> 10 % 표백제로 바이러스와 접촉에 와서 어떤 장비 또는 표면을 청소하십시오. 장갑을 폐기하십시오. </li><li> -80 ° C의 냉동고에 저장 aliquots. </li></ol> 2. 외과 <ol><li> 흡수 실험실 벤치 종이로 수술 영역을 커버. 수술 도구는 귀하의 기관의 biosafety과 동물 사용 지침에 따라 무균 조건 하에서 살균 및 수술이 완료되어야합니다. </li><li> 바이러스와 micropipettes 로딩에 전념하게 될 외과 지역에 인접한 지역을 선택하고, 흡수 실험실 벤치 종이로 커버. 이 분야에 얼음 용기에 바이러스 나누어지는를 삽입하고, 수술이 수행되고 있기 때문입니다이 바이러스가 얼음위에 해동 수 있습니다. </li><li> 바이러스에 접촉되는 피펫 팁 등의 처분을위한 전용 바이러스 처리 영역에서 10 % 표백제의 폐기물 컨테이너를 설치합니다. </li><li> 약 20 미크론의 팁 직경에 유리 Wiretrol의 micropipette을 당기세요. micropipette의 뭉툭한 끝에 광유의 작은 방울을 놓고 micropipettes와 함께 제공된 와이어 플런저를 삽입합니다. </li><li> micropump 팔 클램프의 micropipette를 확보. </li><li> 0.5 MG / kg의 투여에 buprenorphine와 subcutaneously 마우스를 주사. 200 MG / kg의 투여와 함께 intraperitoneal 주사를 통해 Avertin와 마우스를 마취하고 절개를 입력부터 머리카락을 방지하기 위해 충분히 큰 여백을 떠나 확인하고, 수술 가위로 머리의 상단에서 머리를 제거합니다. </li><li> 37 수술에 걸쳐 ° C의 체온을 유지하고 stereotax에 마우스를 확보 stereotax의 기본에 난방 담요를 연결합니다. </li><li> 에탄올과 지역을 소독하기 위해 betadine 세 교대 스크럽으로 머리를 목욕. </li><li> 수술 중에 눈을 촉촉한 유지하는 눈은 Tobradex 아이 연고의 드롭 놓습니다. </li><li> 머리의 정중선 아래 절개를하고 두개골을 노출로 피부를 당기십시오. </li><li> 조심스럽게 세부적으로 밀고 집게를 사용하여 두개골에서 근막을 제거하십시오. </li><li> stereotaxic 좌표를 사용하여 주입하는 지역을 찾아 수술 볼펜으로 두개골을 표시합니다. </li><li> 여러 세그먼트로 thinned 영역을 나누어, 두개골의 균열까지 직경의 두개골 약 2mm의 1.4mm 버, 얇은 지역과 치과 드릴을 사용합니다. </li><li> 이 절차를 통해, 멸균 생리의 응용 프로그램과 두개골이 촉촉한 유지. </li><li> 부드럽게 추가 - 좋아 밀고 집게를 사용하여 thinned 두개골 세그먼트를 제거하여 craniotomy을 수행합니다. </li></ol> 3. 사출 준비 <ol><li> 뚜껑 위에 위치 KimWipe으로 parafilm의 작은 조각에 바이러스의 바이러스 및 피펫 1.5uL (1uL 주사)의 튜브를 엽니다. </li><li> 바이러스 주식에 micropipette의 팁을 놓고 수동으로 플런저를 철회. 어려움이 micropipette에 바이러스 주식을 그리는 경험하는 경우, 끝 부분이 약간 유리의 일부를 깰 수있는 micropipette과 KimWipe을 피어싱 수 확대하실 수 있습니다. </li><li> 바이러스의 소량 때까지 플런저로 로우어 micropump 암은 micropipette의 일각에서 무너 뜨 리신 것입니다. 와스트에서 면화 팁 작은 주걱 및 폐기 작은 주걱이 작은 방울을 제거E 컨테이너. </li><li> micropipette이 두뇌에 넣어 져서으로 막히는 것을 방지하기 위해 micropipette의 끝부분에 미네랄 오일 한 방울을 적용합니다. </li></ol> 4. 바이러스 사출 <ol><li> X와 Y 좌표 stereotaxic을 사용하여 주입하는 영역 micropipette 위치를. 본 실험에서는 stereotaxic은 정중선을 가로 2.7mm bregma에 후부와 2.5mm 아르 기본 시각 피질의 위치를​​ 사용하는 좌표. 아주 천천히 적절한 Z의 위치로 micropipette을 (1mm/1minute의 대략적인 비율) 낮아집니다. </li><li> SYS Micro4 micropump 컨트롤러 상자에 원하는 사출 매개 변수를 입력하고 주사를 시작합니다. 본 실험에서는 10 분 이상 1 microliter는 주입의 속도로 사용됩니다. </li><li> 주입이 완료되면 제거하는 동안 바이러스의 유출을 방지에 한 2 분 동안 휴식을 피펫을 두십시오. 이 기간 후에, 아주 천천히 두뇌 (위의 동일 요금)에서 micropipette를 제거합니다. </li><li> 두피를 봉합하고 조직 접착제로 밀봉. 72 시간 동안 0.1 MG / kg 모든 8~12시간의 복용에 buprenorphine와 subcutaneously 동물을 주사하거나, 한 동물로 고통의 흔적을 전시하고있다. 그것이 ambulating 및 케이지로 돌아 준비가 될 때까지 동물이 가열 램프에 따라 복구할 수 있습니다. 이미징 실험은 원하는 배양 시간 (바이러스 주입 후 주 일) 이후에 시작하실 수 있습니다. </li></ol> 5. 대청소 <ol><li> 10 % 표백제로 micropipette를 씻어 샵스 컨테이너에서 삭제. </li><li> 제 1과 같은 방식으로 폐기물 컨테이너 처리. </li><li> 생물 학적 bin에 실험실 벤치 종이를 버리고 10 % 표백제와 바이러스에 접촉 할 수도 있습니다 모든 표면과 악기를 닦으십시오. </li><li> 사용하지 않는 바이러스는 반복 동결 / 해동 사이클이 바이러스 저하의 원인이 점을 유념해 다시 냉동 수 있습니다. </li></ol> 6. 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/2140/2140fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. CMV promotor의 통제하에 녹색 형광 단백질 (GFP)을 들고 두 번 좌초 adeno - 관련 바이러스 혈청형 1 (dsAAV S1)의 주사 후 신경 세포를 Transduced. 전지 본체뿐만 아니라 근위 및 말초 dendrites 고정 섹션에서 분명히 볼 수있는가 epifluorescent 현미경을 사용하여 몇 군데. 스케일 바 = 100 μm의. <img src="/files/ftp_upload/2140/2140fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 바이러스 확산의 범위뿐만 아니라 표시 뉴런, glia 및 프로세스를 보여주는 dsAAV의 S1을 사용하여 기본 시각 피질에 intracranial 바이러스 주입의 전형적인 라벨링. 스케일 바 = 250 μm의. <img src="/files/ftp_upload/2140/2140fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. dsAAV의 S1을 사용하는 해마의 세포의 라벨링. 스케일 바 = 250 μm의. 이러한 수치는 어리 외에서 조정됩니다. 2009 1

<ol><li>Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., O'Malley, K. L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+gene+expression+and+phenotypic+correction+using+adeno-associated+virus+vectors+in+the+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Long-term gene expression and phenotypic correction using adeno-associated virus vectors in the mammalian brain.</a> Nat Genet. 8, 148-154 (1994).</li>
<li>Harding, T. C., Dickinson, P. J., Roberts, B. N., Yendluri, S., Gonzalez-Edick, M., Lecouteur, R. A., Jooss, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+gene+transfer+efficiency+in+the+murine+striatum+and+an+orthotopic+glioblastoma+tumor+model%2C+using+AAV-7-+and+AAV-8-pseudotyped+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced gene transfer efficiency in the murine striatum and an orthotopic glioblastoma tumor model, using AAV-7- and AAV-8-pseudotyped vectors.</a> Hum Gene Ther. 17, 807-820 (2006).</li>
<li>Lo, W. D., Qu, G., Sferra, T. J., Clark, R., Chen, R., Johnson, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+to+the+brain%3A+duration+and+modulation+of+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus-mediated gene transfer to the brain: duration and modulation of expression.</a> Hum Gene Ther. 10, 201-213 (1999).</li>
<li>Lowery, R. L., Zhang, Y., Kelly, E. A., Lamantia, C. E., Harvey, B. K., Majewska, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+long-term+labeling+of+cells+in+the+developing+and+adult+rodent+visual+cortex+using+double-stranded+adeno-associated+viral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Rapid long-term labeling of cells in the developing and adult rodent visual cortex using double-stranded adeno-associated viral vectors.</a> Dev Neurobiol. 69, 674-688 (2009).</li>
</ol>

동물 실험 프로토콜은 실험실 동물의 동물 애호 관리 및 사용에 PHS 정책에 따라 동물 자원 (UCAR)에서 로체스터 대학위원회의 대학에 의해 승인되었습니다.

Virally - 중재 유전자 전달은 신경 프로세스와 뇌 장애 1,2,3 치료 연구를위한 잠재력을 보유하고 있습니다. 이 기법의 가장 큰 융통성도 찬란 체외 및 생체내 4 두 이미징을위한 세포를 라벨에 악용될 수 있습니다. 여기 우리는 뉴런과 향상된 녹색 형광 단백질을 표현하는 이중 좌초 adeno - 협회 바이러스를 사용하여 마우스를 시각 피질에 glia의 도입에 대한 자세한 절차를 설명합니다. 이 기술은 비교적 정직하고 있지만, 고려해야 기술적 세부 사항은 여러 가지가있을 수 있습니다. 하나의 중요한 요소는 사출 유도 조직이 손상됩니다 - 따라서 그것은 수술과 삽입 / micropipette을 제거하는 동안 큰주의를 사용하는 데있어 매우 중요합니다. 실패 수술은 몇 군데로 구조의 변경이 발생할 수 있습니다. 또한, micropipette에 바이러스를 로딩 후 좋은 치료는 피펫의 끝에있는 공기 방울을 제거하고 적절한 볼...

<table><tbody><tr><td>St&amp;#8211;lting 마우스 및 신생 쥐 어댑터</td><td>Stoelting Co.</td><td>51625</td><td>수술용 동물 고정용 일반 뇌정위 고정 장치로 대체 가능</td></tr><tr><td>Extra Fine Bonn 가위, 8.5cm, 직선 팁, 절삭날 13mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>안구 드레싱 포셉, 10cm, 팁 너비 0.5mm, 곡선형</td><td>Fine Science Tools</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 포셉- Dumoxel 표준 팁, 11cm, 각진 형태</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>두개골 절제술 수행용 초미세 팁 포셉</td></tr><tr><td>표준 패턴 포셉, 직선형, 2.5mmx1.35mm 팁, 12cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>Microtorque 컨트롤 박스 및 Tech2000 핸드피스</td><td>Ram Products, Inc.</td><td>TECH2000ON/OFF</td><td>치과용 드릴</td></tr><tr><td>마이크로 드릴 스테인리스강 버, 팁 직경 1.4mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>19008-14</td><td></td></tr><tr><td>Wiretrol 마이크로피펫, 1-5 µL 분주용</td><td>VWR international</td><td>5-000-1001 또는 53480-287</td><td></td></tr><tr><td>미네랄 오일</td><td>VWR international</td><td>29447-338</td><td></td></tr><tr><td>수동 마이크로 매니퓰레이터 및 틸팅 베이스 (우손용)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>M3301-M3-R</td><td>뇌정위 좌표 결정에 사용</td></tr><tr><td>UltraMicroPump (UMP3) (1개), SYS-Micro4 컨트롤러 포함</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>UMP3-1</td><td></td></tr><tr><td>봉합사</td><td>VWR international</td><td>95056-952</td><td></td></tr><tr><td>P-97 Flaming/Brown 마이크로피펫 풀러</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Tobradex</td><td></td><td></td><td>소속 기관의 수의 서비스 센터에서 구입 가능&amp;rsquo;</td></tr></tbody></table>

adeno - 관련 바이러스성 벡터의 intracranial 분사

Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors

형광 단백질을 표현할 수 있도록 설계 바이러스 벡터의 Intracranial 주사는 생체내 및 뇌 부분에서 모두 서로 다른 뇌 영역의 세포의 특정 하위 집합의 시각화를위한 다양한 분류 방법입니다. 형광 염료의 주입과는 달리, 바이러스 라벨 개별 세포 유형의 대상으로 제공하며, 유전자 변형 마우스 라인을 설정하는 것보다 소비 저렴하고 시간입니다. 이 기법에서는, adeno - 관련 바이러스 (AAV) 벡터는 intracranially 주변 조직에 피해를 최소화하여 원하는 지역 stereotaxic 좌표, micropipette와 AAV의 정확한 배달을 위해 자동 펌프를 사용하여 주입합니다. 사출 매개 변수가 주입의 주입, 주입 위치, 분사의 볼륨, 속도, AAV 혈청형 및 유전자 발현을 구동 모터에있는 동물 연령을 조정하여 각각의 실험에 맞출 수 있습니다. 선택한 조건에 따라 virally 유발 transgene 표현은 아래로 돌기 쪽이 수준으로 세포, 개별 셀 또는 미세 세포 프로세스 그룹의 시각화를 허용할 수 있습니다. 여기에 표시된 실험은 마우스 기본 시각 피질의 뉴런과 glia의 라벨에 대한 녹색 형광 단백질을 표현하는 이중 좌초 AAV의 주사를 묘사.

여기서 우리는 시각 피질의 뉴런과 glia의 형광 라벨에 대한 AAV 벡터의 intracranial 주사를 제시한다.

Adeno - 관련 바이러스성 벡터의 Intracranial 분사

형광 단백질을 발현하도록 설계된 바이러스 벡터의 두개내 주입은 특정 ...의 시각화를 위한 다목적 표지 기술이다.

바이러스 벡터는 조직 내 특정 세포 하위 집합에서 형광 단백질을 발현시키는 데 사용될 수 있습니다. 본 실험에서는 먼저 뇌의 일차 시각 피질 부위에 작은 천공술을 시행하여 해당 영역에 엔지니어링된 단백질을 발현하는 바이러스를 도입합니다. 그다음, 유리 마이크로 피펫을 뇌 속으로 내린 후 치과용 관련 바이러스 벡터를 뇌에 주입하고 수술 부위를 봉합합니다.동물이 회복되면, 생체 내 또는 뇌 절편에서 형광 표지된 세포의 운명을 추적하기 위해 이미징을 수행할 수 있습니다. 형광 염료 표지 및 형질전환 마우스 라인과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 개별 세포 유형을 표적으로 삼을 수 있으며, 형질전환 라인을 구축하는 것보다 비용이 적게 들고 시간이 덜 소요된다는 점입니다. 아데노 부속 바이러스 벡터의 사용은 생물안전등급 1 또는 BSL one으로 승인되었습니다.먼저 BSL 1 생물안전 등급 물질 취급 절차에 따라 실험복과 장갑을 착용합니다. 이후 반복적인 동결 및 해동으로 인한 바이러스 활성 저하를 방지하기 위해, Aliquoting 바이러스 작업을 위한 2등급 생물안전 작업대(biosafety cabinet Class two)를 준비합니다. 생물안전 작업대 내의 불필요한 물건을 모두 제거하고 표면을 70% ethanol로 소독합니다.치과 관련 바이러스 오염 폐기물을 수집하기 위해 10% 표백제 용액이 담긴 비커를 생물안전작업대(biosafety cabinet) 안에 배치합니다. 또한 멸균된 0.5 mL 튜브와 드라이아이스 용기도 함께 배치합니다. 바이러스 스톡은 생물안전작업대 외부의 얼음 위에서 해동합니다.바이러스를 볼텍싱한 후 후드 내에서 튜브를 엽니다. 필요한 부피를 0.5 milliliter 튜브에 피펫팅합니다. 튜브를 닫고 드라이아이스에 넣습니다.모든 바이러스를 소분한 후, 급속 냉동(flash freeze)하십시오. 빈 튜브와 피펫 팁은 10% 표백제 폐기물 용기에 버리십시오. 폐기물 용기를 후드 밖으로 꺼내십시오.표백제를 10% 더 추가합니다. 5분에서 10분 동안 기다린 후, 표백제를 싱크대에 붓습니다. 모든 플라스틱 폐기물은 생물학적 위험물 컨테이너에 폐기하십시오.기관 프로토콜에 따라, 바이러스와 접촉한 모든 장비나 표면을 10% bleach로 세척하십시오. 장갑을 벗어 폐기하십시오. 분주액(aliquots)을 -80°C 냉동고에 보관하십시오.수술 부위를 흡수성 실험대용 종이로 덮습

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

출처: Pereira, M. et. al., 바이러스 벡터의 뇌내 주사에 의한 상주 신경교세포를 인터뉴런으로 생체 내 직접 재프로그래밍. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 형질전환 마우스의 대뇌 피질에 아데노 관련 바이러스를 정위 주사하여 Cre 의존성 뉴런 재프로그래밍 및 형광 리포터 유전자를 신경교세포에 전달하는 방법을 보여줍니다.

마우스 모델에서 신경교세포 재프로그래밍을 위한 바이러스 벡터의 정위 주입

출처: Li, D., et al. 성인 마우스에서 재조합 아데노 관련 바이러스의 직접 척수강내 주사. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 깨어 있는 마우스의 뇌척수액(CSF)에 아데노 관련 바이러스(AAV)를 척수강내 주사하는 절차를 보여주며 주사기 준비, 척추 정렬 및 정확한 바늘 삽입을 다룹니다. 이 방법은 표적 유전자 전달을 검증하여 CNS 치료의 잠재력을 뒷받침합니다.

중추신경계 질환 치료를 위한 마우스 모델에서 바이러스의 척수강내 전달

출처: Grames, MS, et al. 쥐에게 아데노 관련 바이러스의 정맥 투여 방법 및 팁 및 중추신경계 형질도입 평가. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 쥐에서 재조합 아데노 관련 바이러스(AAV)의 꼬리 정맥 주사를 보여줍니다. 외측 꼬리 정맥에 주입된 후 바이러스는 혈류로 들어가 심장을 순환한 후 뇌에 도달하여 뉴런으로 들어가 신경 치료 응용을 위한 표적 단백질 생산을 촉진합니다.

 쥐 모델에서 재조합 아데노 관련 바이러스 벡터의 정맥 투여 

여기서 우리는 신생아 마우스 뇌에 아데노 관련 바이러스를 뇌실 내 주입하여 광범위한 신경 세포 전달을 위한 기술을 보여줍니다.  이 방법은 바이러스로 전달된 transgenes의 평생 발현을 달성하는 빠르고 쉬운 방법을 제공합니다.

영구와 광범위한 신경 세포의 형질 도입에 대한 신생아 마우스 뇌의 뇌실 바이러스 감염

뇌는 잘 시험관이나 자궁외 분석으로 표시되지 않은 자질을 가진 유일한 사이트입니다. 위치 재현성과 성장 특성 정위 마우스 모델을 확실 정위 고정기구 및 저압 주사기 펌프를 사용하여 두개 내 주사로 생성 될 수있다.

만들기 해부학 적으로 정확하고 인간의 두뇌 종양의 재현 두개 내 이종 이식

쥐에서 대규모 중앙 신경 유전자 배달 방법 적용 됩니다. 이 예제에서는 목적은 전체 척수에 영향을 미치는 질병을 모방 이다. 광범위 한 변환, 주변 관리에서 CNS에 치료 단백질을 전달 하기 위해 사용할 수 있습니다.

메서드 및 Adeno 관련 바이러스를 쥐의 정 맥 관리 및 중앙 신경 전달의 평가 대 한 팁

여기에 우리가 작은 동물에 게 효율적인 adeno 관련 바이러스 전달 되도록 하 여 중앙에서 변환 효율 예측 점수 시스템 구축 바이러스 솔루션에서 1 %lidocaine 염 산 염을 사용 하 여 직접 intrathecal 사출 기법 제시 lidocaine에 의해 유도 된 과도 함의 정도 따라 신경 시스템.

성인 쥐에 있는 재조합 형 Adeno 관련 바이러스의 직접 Intrathecal 주입

이 원고에서 결막 하 주사는 주입 / 회수 주사기 펌프와 미세 주입 바늘과 결합 된 기밀 제거 가능한 주사기로 구성된 주사 시스템을 사용하여 마우스의 안구 조직에 대한 유효한 벡터 전달 방법으로 입증됩니다. 이 주사 시스템은 다른 안내 내 투여 경로에도 적용 가능합니다.

작은 동물 모델에서 아데노 관련 바이러스 벡터의 결막하 투여

어린 쥐의 요추 수조에 주사를 놓는 수술 절차가 설명되어 있습니다. 이 접근법은 유전자 치료 벡터의 척수강내 전달에 사용되어 왔지만, 이 접근법은 세포 및 약물을 포함한 다양한 치료제에 사용될 수 있을 것으로 예상됩니다.

Intrathecal vector delivery in juvenile rats via lumbar cistern injection(요추 수조 주입을 통한 어린 쥐의 척수강내 벡터 전달)

여기에서는 성체 마우스에서 아데노 관련 바이러스(AAV)를 체계적으로 투여하기 위해 마우스 측면 꼬리 정맥 주입에 최적화된 프로토콜에 대해 자세히 설명합니다. 또한 AAV transduction을 평가하기 위해 일반적으로 사용되는 분석 프로토콜에 대해 설명합니다.

성체 마우스에서 측면 꼬리 정맥 주입을 통한 아데노 관련 바이러스의 일관된 전달

지주막하 바이러스 주입을 사용하는 아데노 관련 바이러스의 광범위한 전달을 위한 새로운 기술이 설명됩니다. 이 방법은 표재층에서 마우스 신피질 뉴런의 광범위한 형질도입을 보장할 뿐만 아니라 비선택적 프로모터를 사용하는 경우에도 5층 피라미드 뉴런에서 전이유전자의 선택적 발현을 초래합니다.

AAV2의 지주막하 주입에 의한 마우스 신피질 뉴런의 광범위한 형질도입

학습하세요 시각피질에서 AAV 벡터를 이용한 신경세포와 신경교세포의 형광 표지법. 이 기술은 특정 세포 유형을 표적으로 하여 생체 내 영상 분석을 가능하게 하며, 형질전환 마우스 계통보다 비용 효율적입니다.

Adeno - 관련 바이러스성 벡터의 Intracranial 분사

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