在这里,我们描述了测量在果蝇幼虫神经肌肉接头处突触传递的电生理方法。发起人为诱发释放刺激运动神经元轴突,并通过NMJ传输,可在肌肉引起突触后反应测量。
在这个视频中,我们描述记录果蝇幼虫神经肌肉接头处(NMJ)突触传递的电生理方法。幼虫神经肌肉系统是一个模型突触,突触生理学和神经递质的研究,是一个有价值的研究工具,已定义遗传学和实验操作。幼虫可解剖体壁肌肉,中枢神经系统,以及末梢神经暴露。果蝇的肌肉和他们的神经支配模式是很好的特点,很容易和肌肉细胞内记录访问。单独的肌肉可以识别8腹节安排在A2段重复的模式,每30肌肉内的位置和方向 – A7。解剖果蝇幼虫薄和个人肌肉的运动神经元轴突束可以透可视化<sup> 1</sup>。视觉识别或操纵基因在特定的组织产品标签的靶细胞,可用于转基因构造。幼虫,兴奋交界电位(EJPs)产生响应的运动神经元突触释放的谷氨酸水泡。在解剖幼虫,可以记录EJP,在肌肉与细胞内的电极。电机被切断后的腹侧神经节,绘制成玻璃吸管轻轻吸电极刺激神经元动作电位可以人为诱发。这些运动神经元有明显的发射时的刺激阈值,而当他们同时火,它们产生在肌肉的反应。整个NMJ突触传输的信号可以被记录在肌肉的运动神经元支配。 EJPs和微型兴奋交界电位(mEJPs)被视为膜电位的变化。在室温下的电生理反应记录修改最小的血淋巴样的解决方案<sup> 2</sup>(HL3),包含5毫米的镁<sup> 2 +</sup>和1.5 mm钙<sup> 2 +</sup>。诱发EJPs幅度的变化可以表明突触功能和结构的差异。数字化录音分析mEJP EJP幅度,频率和振幅,和量子内容。
这里所描述的方法提供了一个相对快速和广泛的方式来检测在NMJ突触功能的改变。执行,使用完整的动物体内电生理记录,并执行遗传或药理操作的能力,使果蝇神经递质的生理和遗传方面的调查的一个理想的动物模型。
由于肌肉细胞是非常大的的,有些人可能希望添加一个额外的步骤,为两个电极电压钳(TEVC)记录本议定书。这可以执行相同的幼虫准备在细胞内的电极,?…