このビデオでは、我々は共焦点顕微鏡による単一細胞の解像度でのライブゼブラフィッシュの胚で開発脊椎動物の脳を分析するためにする方法を示しています。これは、我々は、単一セルのゼブラフィッシュの胚を注入し、その後、脳の発達をマウントし、イメージする方法が含まれています。
このビデオでは、我々の研究室が開発してゼブラフィッシュの脳(Gutzmanら、2008)曲げると折るために必要な細胞の形状の変更と再配置を分析するために開発した方法を示しています。このような分析は、脊椎動物の脳の三次元構造の開発に必要な基本的な細胞生物学の新たな理解物を得る、と大幅に神経管の形態形成を研究する我々の能力を向上させます。胚ゼブラフィッシュの脳は、神経上皮が膨らま内の心室として、18時間後に受精(HPF)で始まる形をしている。 24 HPFによって、神経管の形態形成の最初のステップは完了です。方法ここで説明を使用して、1細胞段階における胚をコードするmRNAの細胞膜をターゲットとする緑色蛍光タンパク質(memGFP)を注入されています。注射やインキュベーション、胚、現在18〜24 HPF後、アガロースで、反転、マウントされ、共焦点顕微鏡で撮像。特に、ゼブラフィッシュの胚は、その蛍光イメージングのための理想的なシステムとなって透過的です。我々の分析は、中脳後脳境界と後脳に焦点を当てているが、この方法は80〜100μmの深さにゼブラフィッシュで任意の領域の分析のために拡張することができる。
このビデオでは、我々は単一細胞のゼブラフィッシュの胚へのmRNAの注入のための方法を示しています。ここでは、各セルにラベルを付けるために細胞膜をターゲットとしたGFPをコードするmRNAを使用してください。我々は、単一セルの分解能で脳の発達をマウントし、イメージする方法を示しています。このテクニックは、私たちは中脳後脳境界(Gutzmanら、2008)の形成に必要な細胞の形状変…
第一Siveラボでこのテクニックを開発した博士ジェニファーGutzmanに感謝します。親切にコードするプラスミドCAAX – GFPのmRNAを提供Dana – Farber癌研究所ボストン、マサチューセッツ州でもJBグリーンのおかげで。共焦点イメージングは、ホワイトヘッドでWMケック財団生体イメージング施設で行われた。 HSはNIHMH70926によってサポートされています。 EGは、NSFの事前博士フェローシップでサポートされています。