Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

خلية فأر أليف للكروم عزل الكظرية

doi: 10.3791/129 Published: January 5, 2007

Summary

نظم أليف للكروم الكظرية خلية ثقافة النخاعية مفيدة للغاية لدراسة الإثارة ، في إفراز اقتران في وضع المختبر. هذا البروتوكول يوضح الطريقة التي استخدمت لتشريح الغدة الكظرية ثم عزل المنطقة النخاعية بتجريد بعيدا القشرة الكظرية. ويتجلى ذلك في الهضم من النخاع إلى خلايا أليفة الكروم واحد.

Abstract

نظم أليف للكروم الكظرية خلية ثقافة النخاعية مفيدة للغاية لدراسة الإثارة ، في إفراز اقتران في وضع المختبر. هذا البروتوكول يوضح الطريقة التي استخدمت لتشريح الغدة الكظرية ثم عزل المنطقة النخاعية بتجريد بعيدا القشرة الكظرية. ويتجلى ذلك في الهضم من النخاع إلى خلايا أليفة الكروم واحد.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

الاختصارات :
لجنة التنسيق الإدارية -- الكظرية خلايا أليفة الكروم ، E. Soln -- محلول أنزيم ، E. DMEM -- Dulbecco اليورانيوم في التعديل النسر متوسطة

  1. إعداد
    1. إضافة إلى كمية غراء المرجوة من Soln E. (40 وحدة غراء / 1ml Soln هاء).
    2. تنشيط غراء مع كربوجين لمدة 15 دقيقة على الجليد. لوك الأوكسجين في المخزن على الجليد كذلك.
  2. تشريح
    1. استخدام الماوس 8-10 أسبوع.
    2. قبل إزالة الهضم الاوكسيجين العازلة لوك ومكان على الجليد.
    3. الرجوع الى الفيديو لإجراء تشريح.
    4. الاوكسيجين في مكان الغدد رفعه مرة واحدة ، العازلة لوك.
  3. إعداد الغدة
    1. إزالة الدهون من الغدة.
    2. الشريط القشرة من الغدة.
  4. الأنزيمية الهضم
    1. الاوكسيجين تصفية العقيمة غراء.
    2. إعداد أربع برك من غراء الاوكسيجين على طبق بتري.
      1. وينبغي أن يكون حول 3 حمامات 100uls.
      2. 1 ينبغي أن يكون للحمامات حول 400uls.
    3. تغسل من خلال تجمعات للنخاع
      1. 1 من خلال برك 3 100ul.
      2. ثم من خلال تجمع 400ul
      3. Pippette 300ul E. Soln والنخاع قطعة من تجمع 400ul في أنبوب microfuge.
      4. Qrap parafilm على أنبوب microfuge والمكان في 37 درجة مئوية حمام الماء ل20min.
      5. تذكر أن يواصل الأوكسجين Soln E. المتبقية التي تحتوي على غراء.
      6. بعد 20 دقيقة معقمة أكثر تصفية E. Soln.
      7. تحل محل القديمة الاستحمام Soln هاء هاء للنخاع مع Soln تصفيتها حديثا.
  5. Triturations
    1. نضح وتجاهل E. Soln.
    2. غسل للنخاع في 1ml E. DMEM.
    3. نضح وتجاهل E. DMEM.
    4. إضافة 300ul E. DMEM ومتمزج 20X مع 1ml الحافة.
    5. خفض الحافة 200ul مع شفرة حلاقة معقمة.
    6. 5 - 10X متمزج مع تلميح 200ul قطع.
    7. تجاهل E. نخاع قطع DMEM الاستحمام. وسوف تحتوي على الحطام المتوسطة.
    8. إضافة 300uls الطازجة E. DMEM لنخاع القطع.
    9. متمزج مع تلميح 200ul 20X
    10. Pippette E. DMEM microfuge لقطع أنبوب withough للنخاع. وسوف تحتوي على لجنة التنسيق الإدارية المتوسطة الحرة.
    11. إضافة 300uls الطازجة E. DMEM لنخاع القطع.
    12. متمزج نخاع بإبرة حقنة قياس 23.5 20X.
    13. الجمع بين هاء DMEM من كلا triturations. وينبغي قطع نخاع لا تكون موجودة ويجب أن يكون الآن في مظهر featherlike.
  6. تصفيح
    1. Microfuge E. DMEM من الخطوات الأخيرة سحن اثنان ل2.5 دقيقة في 3.7g ثانية.
    2. Resuspend بيليه في 50uls - 200 DMEM E. ، اعتمادا على التجارب اللاحقة.
    3. 10 لوحة 30uls ساترة على الزجاج.
    4. انتظر 15 دقيقة لخلايا التمسك به.
    5. إضافة 750uls من DMEM هاء.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

خلية فأر أليف للكروم عزل الكظرية
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Kolski-Andreaco, A., Cai, H., Currle, D. S., Chandy, K. G., Chow, R. H. Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation. J. Vis. Exp. (2), e129, doi:10.3791/129 (2007).More

Kolski-Andreaco, A., Cai, H., Currle, D. S., Chandy, K. G., Chow, R. H. Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation. J. Vis. Exp. (2), e129, doi:10.3791/129 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter