Шаг за шагом ведет к генерации целевого химерных эмбрионов данио путем трансплантации в бластулы или гаструлы.
Один из самых мощных инструментов, используемых, чтобы разобраться в сложных процессах развития является анализ химерных эмбрионов. Химера определяется как организм, который содержит клетки, из более чем одного животного; мозаики являются одним из типов химер, в которых клетки из более чем одного генотипа смешиваются, обычно дикого типа и мутанта. В данио, химеры могут быть легко сделаны трансплантации клеток от донора эмбриона в хост эмбриона на соответствующие зачаточном состоянии. Меченых клеток донора генерируются путем инъекции линии маркера, такие, как флуоресцентный краситель, в один-клеточной стадии эмбриона. Меченые клетки донора будут удалены из доноров эмбрионов и внедрена в немеченого эмбрионов хоста с помощью масла контролируемого пипетки стекла установлен на любой соединения или рассекает микроскопом. Донорские клетки в некоторых случаях может быть направлена на конкретного региона или ткани развивающихся бластулы или гаструлы зародыш хост этапе, выбрав трансплантации сайта в принимающей эмбрион на основе четко установленных карт судьбы.
Легкость, с которой трансплантации может быть использована для выпуска целевых химеры является одной из великих держав данио, как позвоночных модели. Модификации этого протокола, не описанные выше, позволяет анализ материнской функции гена генов с существенную роль в зиготических ра?…
Благодаря членам лаборатории Moens для полезной информации во время написания этой статьи. HK является после защиты докторской диссертации поддерживается NIH / NICHD грант № 5R01HD037909-08. CBM является следователь Медицинского института Говарда Хьюза.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Injection rig | Applied Scientific Instrumentation | MPPI-3 | Foot pedal can be ordered separately | |
Pronase | Sigma | P5147 | “protease type XIV” | |
Pen-Strep | Sigma | P4458 | 100x stock | |
Methyl cellulose | Sigma | M-0387 | ||
Fluorescent dextrans | Molecular Probes/ Invitrogen | various | Eg. lysine-fixable rhodamine dextran (D7162) | |
Injection pipettes (1.2mmx0.94mmx10cm) | Sutter | BF120-94-10 | ||
Transplant pipette option 1 | World Precision Instruments | TW100-4 | ||
Transplant pipette option 2 | VWR | #53508-400 | ||
micromanipulator | Narishige | UMJ-3FC (?) | ||
Micromanipulator magnetic stand | Narishige | GJ-1 | ||
Transplant apparatus | Sutter Instrument Co. | MI-10010 | ||
Fine micromanipulator | Narishige | MMO-203 | ||
Depression slides | Fisher | 12560A | ||
Agar molds for injection and transplants | AL-AN Mfg, Inc. |
Reagents: Recipes for many of the reagents used for these procedures are found in The Zebrafish Book, which is available in full online at http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html. Recipes are provided there for preparation of Fish Water, Embryo Medium with and without antibiotics, pronase for dechorionating, fluorescent dextrans, and methyl cellulose.