دليل خطوة بخطوة لتوليد اجنة استهدفت الزرد خيالية بواسطة زرع في المرحلة الأريمة أو المعيدة.
Abstract
واحدة من أقوى الأدوات المستخدمة لاكتساب المعرفة في العمليات التنموية المعقدة هو تحليل للأجنة خيالية. يتم تعريف كائن خرافي كما يحتوي على خلايا من اكثر من حيوان واحد ؛ الفسيفساء هي نوع واحد من الوهم تمتزج فيه خلايا من اكثر من التركيب الوراثي ، وعادة من النوع البري ومتحولة. في الزرد ، ويمكن بسهولة جعل الوهم زرع خلايا من الجنين المانحة الى الجنين المضيف في المرحلة الجنينية المناسبة. يتم إنشاء خلايا المسمى المانحة عن طريق الحقن من علامة النسب ، مثل صبغة الفلورسنت ، في مرحلة الجنين واحد الخلية. تتم إزالة الخلايا من الأجنة المانحة المسمى المانحة والمضيفة التي أدخلت أجنة غير المسماة باستخدام النفط التي تسيطر عليها ماصة الزجاج التي شنت على مجمع أو مجهر تشريح. يمكن في بعض الحالات تكون الخلايا المانحة التي تستهدف منطقة محددة أو أنسجة النامية الأريمة أو المعيدة مرحلة الجنين المضيف عن طريق اختيار موقع الزرع في الجنين المضيف على أساس خرائط مصير راسخة.
Protocol
دليل خطوة بخطوة لتوليد اجنة استهدفت الزرد خيالية بواسطة زرع في المرحلة الأريمة أو المعيدة. واحدة من أقوى الأدوات المستخدمة لاكتساب المعرفة في العمليات التنموية المعقدة هو تحليل للأجنة خيالية. يتم تعريف كائن خرافي كما يحتوي على ?…
Discussion
السهولة التي يمكن استخدامها لانتاج زرع الوهم المستهدفة هي واحدة من القوى العظمى في الزرد كنموذج الفقاريات. وتعديل هذا البروتوكول لا الموصوفة أعلاه يتيح تحليل وظيفة الجين لجينات الأم مع أدوار أساسية في التنمية لاقحي. منذ هذه الأسماك متحولة لا يمكن البقاء على قيد الح?…
Acknowledgements
الشكر لأعضاء لمختبر موينز مدخلات مفيدة أثناء كتابة هذا المقال. هونج كونج هو زميل ما بعد الدكتوراه التي تدعمها المعاهد الوطنية للصحة / معاهد الصحة القومية منح # 5R01HD037909 – 08. CBM هو محقق مع معهد هوارد هيوز الطبي.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Injection rig
Applied Scientific Instrumentation
MPPI-3
Foot pedal can be ordered separately
Pronase
Sigma
P5147
“protease type XIV”
Pen-Strep
Sigma
P4458
100x stock
Methyl cellulose
Sigma
M-0387
Fluorescent dextrans
Molecular Probes/ Invitrogen
various
Eg. lysine-fixable rhodamine dextran (D7162)
Injection pipettes (1.2mmx0.94mmx10cm)
Sutter
BF120-94-10
Transplant pipette option 1
World Precision Instruments
TW100-4
Transplant pipette option 2
VWR
#53508-400
micromanipulator
Narishige
UMJ-3FC (?)
Micromanipulator magnetic stand
Narishige
GJ-1
Transplant apparatus
Sutter Instrument Co.
MI-10010
Fine micromanipulator
Narishige
MMO-203
Depression slides
Fisher
12560A
Agar molds for injection and transplants
AL-AN Mfg, Inc.
Reagents: Recipes for many of the reagents used for these procedures are found in The Zebrafish Book, which is available in full online at http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html. Recipes are provided there for preparation of Fish Water, Embryo Medium with and without antibiotics, pronase for dechorionating, fluorescent dextrans, and methyl cellulose.
Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation. J. Vis. Exp. (29), e1394, doi:10.3791/1394 (2009).