ट्रांसप्लांटेशन द्वारा chimeric Zebrafish भ्रूण उत्पन्न
Summary
एक कदम दर कदम गाइड के प्रत्यारोपण द्वारा ब्लासटुला या गेसट्रुला मंच पर लक्षित chimeric zebrafish भ्रूण पैदा.
Abstract
सबसे शक्तिशाली जटिल विकास की प्रक्रिया में जानकारी हासिल करने के लिए इस्तेमाल किया उपकरणों के एक chimeric भ्रूण का विश्लेषण है. एक कल्पना जिसमें एक से अधिक पशु कोशिकाओं से एक जीव के रूप में परिभाषित किया गया है, मोज़ाइक कल्पना का एक प्रकार है जिसमें एक से अधिक जीनोटाइप से कोशिकाओं मिश्रित कर रहे हैं, जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती आमतौर पर हैं. Zebrafish में, chimeras आसानी से उपयुक्त भ्रूण चरण में एक दाता भ्रूण से एक मेजबान भ्रूण में कोशिकाओं के प्रत्यारोपण द्वारा किया जा सकता है. लेबल दाता कोशिकाओं को एक फ्लोरोसेंट रंजक के रूप में एक वंश मार्कर, एक सेल भ्रूण चरण में, के इंजेक्शन से उत्पन्न कर रहे हैं. लेबल दाता कोशिकाओं दाता भ्रूण से हटा रहे हैं और unlabeled मेजबान एक तेल नियंत्रित ग्लास विंदुक या तो एक परिसर या खुर्दबीन विदारक पर घुड़सवार का उपयोग भ्रूण में पेश किया. दाता कोशिकाओं कुछ मामलों में मेजबान अच्छी तरह से स्थापित भाग्य नक्शे पर आधारित भ्रूण प्रत्यारोपण साइट को चुनने के द्वारा एक विशिष्ट या विकासशील ब्लासटुला या गेसट्रुला मंच मेजबान भ्रूण के क्षेत्र के ऊतकों को लक्षित किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
कितनी आसानी के साथ जो प्रत्यारोपण के लिए लक्षित chimeras उत्पादन किया जा सकता एक हड्डीवाला मॉडल के रूप में zebrafish के महान शक्तियों में से एक है. इस वर्णित से ऊपर नहीं प्रोटोकॉल के एक संशोधन zygotic विकास में आवश्यक भ…
Acknowledgements
MOENS प्रयोगशाला के सदस्यों को इस लेख के लेखन के दौरान सहायक इनपुट के लिए धन्यवाद. एच बाद डॉक्टरेट साथी / एनआईएच NICHD अनुदान # 5R01HD037909-08 द्वारा समर्थित है. सीबीएम हॉवर्ड ह्यूजेस मेडिकल इंस्टीट्यूट के साथ एक अन्वेषक है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Injection rig | Applied Scientific Instrumentation | MPPI-3 | Foot pedal can be ordered separately | |
| Pronase | Sigma | P5147 | “protease type XIV” | |
| Pen-Strep | Sigma | P4458 | 100x stock | |
| Methyl cellulose | Sigma | M-0387 | ||
| Fluorescent dextrans | Molecular Probes/ Invitrogen | various | Eg. lysine-fixable rhodamine dextran (D7162) | |
| Injection pipettes (1.2mmx0.94mmx10cm) | Sutter | BF120-94-10 | ||
| Transplant pipette option 1 | World Precision Instruments | TW100-4 | ||
| Transplant pipette option 2 | VWR | #53508-400 | ||
| micromanipulator | Narishige | UMJ-3FC (?) | ||
| Micromanipulator magnetic stand | Narishige | GJ-1 | ||
| Transplant apparatus | Sutter Instrument Co. | MI-10010 | ||
| Fine micromanipulator | Narishige | MMO-203 | ||
| Depression slides | Fisher | 12560A | ||
| Agar molds for injection and transplants | AL-AN Mfg, Inc. |
Reagents: Recipes for many of the reagents used for these procedures are found in The Zebrafish Book, which is available in full online at http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html. Recipes are provided there for preparation of Fish Water, Embryo Medium with and without antibiotics, pronase for dechorionating, fluorescent dextrans, and methyl cellulose.
References
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