هذا هو أسلوب لتوليد اجنة gynogenetic الزرد مضاعفا (الأجنة التي الوراثية فقط المساهمة يأتي من الأم) من خلال منع الانتصافي الدرجة الثانية مباشرة بعد التسميد مع الحيوانات المنوية للضوء فوق البنفسجي المعطل. EP الأجنة ليست متماثلة اللواقح تماما بسبب إعادة التركيب خلال تقسيم الانتصافي الأولى ، ومع ذلك فهي متماثل في جميع مواضع التي لم يتم فصلها عن السنترومير من خلال إعادة التركيب.
Abstract
تغاير الزيجوت في حقيقيات النوى مضاعفا كثيرا ما يجعل الدراسات الجينية مرهقة. الأساليب التي تنتج ذرية صالحة ضعفاني متماثل مباشرة من الإناث متخالف يسمح فحص الإناث mutagenized F1 مباشرة عن الطفرات الضارة في الشاشة تسارع الوراثية إلى الأمام. Streisinger وآخرون.<sup> 1،2</supوصف> طرق لجعل gynogenetic الزرد مضاعفا (متماثل) من خلال تفعيل البيض الزرد مع الحيوانات المنوية للضوء الأشعة فوق البنفسجية ومنع المعطل إما الانتصافي الثانية أو الدرجة الاولى لاقحي الخلية باستخدام العلاجات الفيزيائية (الحرارة أو الضغط) التي ميكروتثبول deploymerize. "الضغط المبكر" (EP) كتل الأسلوب الثاني الانقسام المنصف ، والذي يحدث بعد فترة قصيرة من الإخصاب. الطريقة EP تنتج نسبة عالية من أجنة قابلة للحياة التي يمكن أن تتطور إلى البالغين خصبة من كلا الجنسين. الأسلوب يولد الأجنة التي يتم متماثل في جميع مواضع باستثناء تلك التي تم فصلها عن السنترومير من خلال إعادة التركيب خلال الانقسام الاختزالي أولا يتم الكشف عن طفرات متماثل الجينات في براثن EP ما بين 50 ٪ للمواضع القسيم المركزي ، وأقل من 1 ٪ لمواضع telomeric. ويرد هذا الأسلوب حرفيا من كتاب اسماك الزرد<sup> 3</sup>.
Protocol
نظرة عامة على الضغط المبكر ملاحظة : وصفات للعديد من الكواشف المستخدمة في هذا البروتوكول مثل tricaine ، أسماك المياه المالحة ، وهانكس على شبكة الإنترنت في الفصل 10 من كتاب اسماك الزرد 3 ( http://zfin.org/zf_info/zfbook…
Discussion
فمن المهم للتأكد من أن الأجنة التي تنتجها هذه الطريقة هي diploids gynogenetic صحيحا. والضوابط ، وتوليد مخلب مضاعفا من البيض العادي (عن طريق الحفاظ على ادخار بعض الحيوانات المنوية دون تعطيل الأشعة فوق البنفسجية) ومجموعة من الأجنة فرداني (عن طريق الحفاظ على مخلب جانبا من البويضا…
Acknowledgements
تم تطوير أساليب التخصيب في المختبر وdiploids gynogenetic لالزرد ووكر Charline في مختبر جورج Streisinger في جامعة اوريجون في 1970s و 1980s. الطريقة الموضحة هنا هي من دون تغيير بروتوكولات Charline والتي تتوفر في كتاب الكامل في اسماك الزرد 3.
تم تطوير أساليب التخصيب في المختبر وdiploids gynogenetic لالزرد ووكر Charline في مختبر جورج Streisinger في جامعة اوريجون في 1970s و 1980s. الطريقة الموضحة هنا هي من دون تغيير بروتوكولات Charline والتي تتوفر في كتاب الكامل في اسماك الزرد 3.