La cavité péritonéale chez les mammifères contient différentes populations de cellules immunitaires crucial pour les réponses immunitaires innées. Une méthode d'isolation efficace est nécessaire pour les analyses biochimiques et fonctionnelles de ces cellules. Ici nous fournissons une méthode globale pour l'isolement des cellules cavité péritonéale chez la souris.
La cavité péritonéale est une cavité membranaires et remplis de fluide abdominal de mammifères, qui contient le foie, la rate, la plupart du tractus gastro-intestinal et d'autres viscères. Il abrite un certain nombre de cellules immunitaires, y compris les macrophages, les lymphocytes B et les lymphocytes T. La présence d'un nombre élevé de macrophages naïfs dans la cavité péritonéale en fait un site privilégié pour la collecte des naïfs macrophages résidents du tissu (1). La cavité péritonéale est également important pour l'étude des cellules B en raison de la présence d'une cavité péritonéale unique de sous-résident de cellules B ou cellules B1, en plus de cellules B2 conventionnels. Cellules B1 sont subdivisées en cellules B1a et B1b, qui peut être distingué par l'expression de surface de CD11b et CD5. Cellules B1 sont une source importante d'IgM naturels offrant une protection précoce d'une variété de pathogènes (2-4). Ces cellules sont autoréactifs dans la nature (5), mais comment ils sont contrôlés pour éviter l'auto-immunité n'est pas encore parfaitement compris. Au contraire, CD5<sup> +</sup> Cellules B1a possèdent certaines propriétés de régulation en vertu de leur capacité de l'IL-10 produit (6). Par conséquent, les cellules B1 péritonéale cavité sont une population de cellules intéressantes à étudier en raison de leurs fonctions diverses et nombreuses questions sans réponse associés à leur développement et de régulation. L'isolement de la cavité péritonéale des cellules immunitaires résidentes est délicat en raison du manque d'une structure définie à l'intérieur de la cavité péritonéale. Notre protocole se décrivent une procédure pour l'obtention de cellules viables à l'abri de la cavité péritonéale de souris, qui peuvent ensuite être utilisés pour l'analyse phénotypique par cytométrie en flux et pour différents dosages biochimiques et immunologiques.
Isolement de cellules cavité péritonéale est une technique importante pour l'étude des différentes cellules du système immunitaire, principalement les macrophages et les sous-ensembles spécifiques de cellules B. Bien que ce processus est simple, il ya quelques étapes essentielles impliquées. Présence de contamination du sang dans l'échantillon prélevé doit être évitée afin d'obtenir un pur population cellulaire péritonéale cavité. L'euthanasie par dislocation cervicale doit être effectuée avec soin pour éviter toute contamination du sang dans la cavité péritonéale. Alternativement CO 2 peuvent être utilisés. En outre, pendant les soins procédure appropriée devrait être prise pour éviter la perforation de la vessie ou d'autres organes dans la cavité péritonéale. Récupérer la plupart du liquide injecté est également important pour le rendement cellulaire.
Cette procédure est largement utilisée pour étudier la biologie des macrophages, depuis un nombre modéré de résident, les macrophages non stimulés peuvent facilement être obtenus à partir de la cavité péritonéale, contrairement à la tâche laborieuse de différenciation des cellules progénitrices myéloïdes en macrophages matures in vitro, en utilisant le facteur de croissance macrophages (8 , 9). Le rendement des macrophages de la cavité péritonéale peut être améliorée en utilisant la méthode de l'élicitation thioglycolate, bien que l'utilisation thioglycolate pourraient altérer les propriétés physiologiques des macrophages (7).
Les cellules B sont une partie importante de notre système immunitaire joue un rôle crucial dans les deux immunité innée et adaptative. Parmi les différentes sous-populations de cellules B, les cellules B1 comprend un sous-ensemble unique de cellules B impliquées dans l'immunité innée, l'auto-immunité et de la régulation immunitaire. Cellules B1 sont principalement situés dans la cavité péritonéale et sont la reconstitution de soi. Ils sont l'un des principaux producteurs d'IgM naturel qui assure la première ligne de protection contre un certain nombre de virus et de bactéries (10-12). Cellules B1 sont aussi une source importante d'IL-10 (6), qui est une cytokine importante impliquée dans la régulation immunitaire. Bien que plusieurs études ont été menées avec les cellules B1, encore il ya place pour une évaluation plus poussée de leurs fonctions contrastées, spécialement leur rôle de régulation. Péritonéale méthode d'isolement cavité cellulaire offre l'opportunité unique d'étudier les fonctions des cellules B1.
Ce travail a été soutenu en partie par NIH AI069358 et la Fondation de recherche BloodCenter.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Thioglycollate Medium, Brewer Modified | BD BBL | 211716 |