Summary

の浸透圧の回避線虫(Caenorhabditis elegans):二つの遺伝子のシナプス機能、ヒトのオルソログ NRXN1 NLGN1

Published: December 11, 2009
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Summary

Neurexinsとneuroliginsはシナプス分化と伝達に重要な役割を実行する膜ニューロンの接着タンパク質です。のニューロリギン欠損変異体<em> C.エレガンス</em>浸透圧強度を検出するのに欠陥がある、しかし彼らはまた、ニューレキシンをコードする遺伝子に変異が含まれている場合、彼らは野生型の表現型を回復する。

Abstract

Neurexinsとneuroliginsは、興奮性と抑制性シナプスに存在する細胞接着分子であり、それらは正しいニューロンのネットワーク機能1に必要です。これらのタンパク質は、シナプス前及びシナプス後膜2で見られる。マウスの研究では、neurexinsとneurologinsがシナプス伝達1の本質的な役割を持っていることを示している。最近の報告では、人間の神経系の開発中に変更された神経細胞の接続は、自閉症スペクトラム障害3の多数の例病因の基礎を構成することができることが示されている。

線虫(Caenorhabditis elegans)があるため実験室での実験のためのそのシンプルさ、シナプス成分の機能の研究を促進するために実験的なツールとして使用し、その神経系、シナプスの配線が完全に特徴付けされていることを与えることができます。 Cで。 エレガンスNRX – 1NLG – 1遺伝子は、それぞれα-ニューレキシン- 1、ニューロリギン- 1タンパク質を、エンコード人間NRXN1NLGN1遺伝子にオルソロガスです。ヒトと線虫では、neurexinsとneuroliginsの組織は、機能ドメインの点で似ています。

線虫の頭部はamphid、浸透力を含め様々な刺激に応答を媒介する線虫の感覚器官が含まれています。 amphidは繊毛状突起一シナプス前終末軸索4の12の感覚バイポーラの神経細胞で作られています。 ASHRとASHLという名前のこれらのニューロンの二つは、高い浸透力5で水溶性の忌避剤を検出し、浸透圧感覚機能に特に重要です。これら2つのニューロンの樹状突起は、口の先端に長くし、軸索は、彼らが行動反応6を決定する他のニューロンとのシナプス結合を作る神経リング、に拡張します。

高い浸透力の回避にニューレキシンとニューロリギンの影響を評価するために、我々は、4Mフルクトースリング7に基づいてメソッドを使って、NRX – 1NLG – 1遺伝子に欠陥のある線虫変異株の異なる応答を示しています。行動の表現型が特異的RNAiのクローン8を用い確認された。 C.虫は 、RNAiを引き起こすために必要なdsRNAは、9を供給することにより投与することができます。食品を介してdsRNAの配信は、このように遺伝的要素とのネットワーク経路の同定を可能にする目的の遺伝子のRNAiの干渉を誘導する。

Protocol

1:浸透回避アッセイ。 約16-24時間アッセイの前に、OP50 E.を含む新鮮なNGMプレートに各遺伝子型のL4幼虫期の動物を選ぶ大腸菌は、20℃で、それをandincubate翌日、若年成人での実験を開始します。 それは、アッセイ"盲目的に"行うことをお勧めします。アッセイすべき各菌株でプレートを実験が終了したときにマスク解除されるrelabelledプレートを用いてアッ?…

Discussion

Neurexinsとneuroliginsはシナプス伝達11とシナプス結合12の分化に重要な役割を行う。両分子は、自閉症13,14のための候補遺伝子として同定されている。

このビデオでは、私たちはCの浸透回避反応に影響を及ぼす遺伝子の影響を研究することができるシンプルな方法を示してエレガンス 。ニューロリギン欠損変異体では、浸透力を検出す…

Acknowledgements

我々は彼の貴重な支援に感謝博士アントニオミランダ- Vizueteしたいと思います。我々はまた、貴重な技術支援のためにサルマBoulayouneとイザベルキャバに私たちの感謝の意を表したいと。この作品は、アンダルシア州政府(BIO – 272)からの助成金によって賄われた。この研究は、ヨーロッパでは遺伝子実験を規制する現行の法律との合意で行われている。

Materials

Table 1. C. elegans strains.

Strain Gene Allele Source
Bristol N2 aCGC
VC228 nlg-1 ok259 CGC
FX00474 nlg-1 tm474 bNBP-JAPAN
VC1416 nrx-1 ok1649 CGC
FX1961 nrx-1 tm1961 NBP-JAPAN
NL2099 rrf-3 pk1436 CGC
CRR21 nrx-1; nlg-1 ok1649; ok259 This work
CRR22 nrx-1; nlg-1 tm1961;ok259 This work

a. Caenorhabditis Genetic Center, University of Minnesota, USA.

b. National Bioresource Project for the Experimental Animal “Nematode C. elegans“. Tokyo Women’s Medical University, Japan.

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Cite This Article
Calahorro, F., Alejandre, E., Ruiz-Rubio, M. Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism. J. Vis. Exp. (34), e1616, doi:10.3791/1616 (2009).

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