遺伝子誘導の運命のマッピングへの実践的アプローチ：マークとトラックの細胞へのビジュアルガイドインビボでの</em
Summary
遺伝的誘導フェイトマッピング（GIFM）マークと細かい空間的、時間的な制御を持つトラックの細胞<em> in vivoで</em>と、特定の遺伝系統の細胞が開発し、成体組織に貢献する方法解明。ここに示さ落射蛍光と植分析のために運命マップE12.5マウス胚に必要なテクニックがあります。
Abstract
運命のマップは、前駆細胞が開発し、成体の組織に固有の構造と細胞型に寄与する方法を決定するために生体内で細胞をマーキングして追跡することによって生成されます。このコンセプトの進歩は、 私は遺伝系統に基づいて、運命のマップを作成するには、Fは、遺伝子発現、細胞の運命、およびin vivoでの細胞の挙動を結ぶ、M apping（GIFM）を食べたnducible G eneticです。
Xは、修正されたバクテリオファージのタンパク質、Creリコンビナーゼ（ クリアーT）の空間的な発現を付与する遺伝子調節エレメントの遺伝子またはセットです。 クリアーTはクリアーTをレンダリングされた電子 strogen R eceptorのリガンド結合ドメインを含むGIFMエクスプロイトX -クリアーライン薬のタモキシフェンの存在下で細胞質に隔離。 loxP部位によって挟まれたDNA配列の間の核と仲介の再結合に移行しタモキシフェンリリースクリアーT、の結合。 GIFMでは、組換えは一般的にGFPなどのレポーター遺伝子の前にカセットを停止両側にloxP部位の間で発生します。
マウスは、地域、または細胞型特異的クリアーと条件レポーターの対立遺伝子のいずれかを含むように飼育されています。レポーターの停止カセットは、レポーター遺伝子のさらなる転写を防止するため未処理マウスは、マーキングしていないだろう。我々は、レポーターからストップカセットを取り外す核にクリアーTリリースの時間的制御とその後の転座を提供するタイムアウト妊娠女性への強制経口投与でタモキシフェンを投与する。再結合に続いて、レポーターの対立遺伝子は構成的であるとheritably表明した。この一連のイベントは、彼らの遺伝的履歴が消えないように記録されるようにセルをマークします。組換えレポーターは、このように最初にクリアーのTを駆動するために使用される遺伝子発現から切り離され、一度で、高忠実度遺伝子系統のトレーサーとしての役割を果たします。
我々は、成体細胞型や組織への遺伝的系統の正常な発達と把握するの貢献を研究するためにマウスでGIFMを適用します。我々はまた、より良い人間の遺伝疾患の顕著な特徴を模倣する複雑な表現型を理解するために変異体の遺伝的背景のセルに従うことをGIFM使用。
実験的な手法を通じて、このビデオの記事では、ガイドの研究者をうまくGIFMを適用する。日胚でタモキシフェンを投与することによって、MGFPマウス（E）8.5落射蛍光実体顕微鏡で12.5日で解剖し、分析に続いて強制経口投与を介して、私たちは、よく特徴付けWnt1 -クリアーTを用いる方法を示しています。我々はまた、外植片の準備またはFACS分析のために運命マッピングされたドメインをマイクロ細かく分析し、全体のマウント蛍光イメージングのために成人の運命マップの脳を解剖する方法を示します。総称し、これらの手順は、研究者は、発生生物学と疾患モデルの重要な質問に対処することができます。
Protocol
Discussion
我々が証明したというGIFMシステムは、細胞プロセスのさまざまな問題の広い範囲に答えるために使用することができます。例えば、異なるCreをドライバで改変マウスは、任意の細胞型、組織または興味の遺伝系統を対象とするために使用することができます。タモキシフェンは、任意の胚または出生後の時点で投与することができるので、さらに、組換えは、関連する発達段階をターゲット…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々はMGFPのマウスのS.アーバーへと批判的に論文を読み、技術支援を提供ゼルバスの研究室のメンバーに感謝しています。 A.ブラウンは、脳科学カプランサマー大学院研究賞によってサポートされていました。 E.ノルマンは、脳科学研究プログラムの大学院研究賞によってサポートされていました。この研究はまた、スタートアップ研究資金（MZ）によって賄われていた。
References
- Ellisor, D., Koveal, D., Hagan, N., Brown, A., Zervas, M. Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system. Gene Expr Patterns. 9, 475-489 (2009).
- Zervas, M., Millet, S., Ahn, S., Joyner, A. L. Cell behaviors and genetic lineages of the mesencephalon and rhombomere 1. Neuron. 43, 345-357 (2004).
