Это видео демонстрирует метод препарировать и культуры спаечный нейроны от E13 крысы спинной спинного мозга. Расхождение между спаечный нейроны полезно изучать клеточные и молекулярные механизмы роста аксонов и руководство.
Спаечный нейроны были широко использованы для исследования механизмов, лежащих аксон руководством во время эмбрионального развития спинного мозга. Клеточных тел этих нейронов расположены в спинном спинного мозга и их аксоны следуют стереотипные траектории во время эмбрионального развития. Спаечный аксонов первоначально проект вентрально по отношению к floorplate. После пересечения средней линии, эти аксоны свою очередь, спереди и проекта по отношению к мозгу. Каждый из этих шагов регулируется действием нескольких сигналов руководства. Культуры высоко обогащенного спаечный нейронов идеально подходят для многих экспериментов решении механизмы поиска пути аксонов, включая превращение анализов, иммунохимии и биохимии. Здесь мы опишем метод препарировать и культуры спаечный нейроны от E13 крысы спинной спинного мозга. Во-первых, спинного мозга выделяют и спинной полосы из расчлененных. Спинные ткани затем распадается на клеточной суспензии по трипсинизации и механические разрушения. Нейроны высевали на поли-L-лизин-покровные стекла с покрытием или ткани-культуры блюд. После 30 часов<em> В пробирке</em>, Большинство нейронов расширили аксона. Чистоту культуры (Ям<em> Соавт.</em> 2009), как правило, более 90%, могут быть оценены с immunolabeling спаечный нейрона маркеры DCC, LH2 и ПО1 (Хелмс и Джонсон, 1998). Это нейронов препарат полезным инструментом для<em> В пробирке</em> Изучение клеточных и молекулярных механизмов комиссуральных роста аксонов и руководства во время спинальной развития мозга.
Мы описали метод препарировать и культуры спаечный нейронов из эмбриональных крыс спинного мозга. Эта процедура была широко используется в нашей лаборатории, чтобы надежно подготовить нейронов изучать клеточные и молекулярные механизмы аксон руководства. Для клеточной биологии и им…
Эта работа была поддержана грантами от канадского института исследований в области здравоохранения (CIHR), Питер Лоуид Медицинский исследовательский фонд, Программа Макгилла в Neuroengineering, Fonds по исследованиям ан Santé Квебека (FRSQ) и Канаде фонд инноваций (CFI ). Себастьен Д. Ланглуа был поддержан Обучение премии магистра Fonds де-ла-любителя ан santé Квебека (FRSQ) и Фредерик Бантинг и Чарльз премию Лучший Канаде Высшее стипендии магистра канадских институтов здравоохранения (CIHR). Мы благодарны Джессика MT Фам за помощью цифр.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Neurobasal medium, liquid | Invitrogen | 21103-049 | See Recipes and Comments | |
B27 supplement 50X | Invitrogen | 17504 | See Recipes and Comments | |
Poly-L-lysine 0.01% solution | Sigma | P4707 | ||
L-15 medium, powder | Invitrogen | 41300-070 | ||
Trypsin 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090-046 | ||
DNAse I, 25000 U/mL | Worthington | |||
MgSO4 | Sigma | M2643 | ||
HBSS, Ca2+/Mg2+-free | Invitrogen | 14170-112 | ||
L-glutamine 200mM, liquid | Invitrogen | 25030-081 | See Recipes and Comments |
Dissection of embryonic rat dorsal spinal cord (see also Table I)
Commissural neuron culture (see also Table I)