连合神经元已被广泛用于研究的内在机制,在胚胎脊髓发展的轴突指导。这些神经元的胞体位于脊髓背侧,其轴突遵循胚胎发育过程中的定型的轨迹。最初连合轴突项目的腹部朝向floorplate。越过中线后,这些轴突转向对大脑前部和项目。上述每个步骤是受几个指导线索的行动。连合神经元高度浓缩的文化,非常适合解决许多轴突寻路机制,包括车削实验,免疫组织化学和生物化学实验。在这里,我们描述的方法来剖析和文化连合从E13大鼠脊髓背侧神经元。首先,是孤立的脊髓和背条被解剖了。胰蛋白酶和机械破碎成细胞悬液,然后背的组织是分离的。神经元被镀上聚- L -赖氨酸镀膜玻璃盖玻片或组织培养皿。 30小时后<em>在体外</em>,大多数神经元轴突延长。文化的纯度(阴<em>等。</em> 2009),通常在90%以上,可评估,LH2连合神经元标记的DCC和TAG1(赫尔姆斯和约翰逊,1998年)免疫标记。这种神经元的准备是一个有用的工具<em>在体外</em>连合在轴突的生长和脊髓发展的指导细胞和分子机制的研究。
Langlois, S. D., Morin, S., Yam, P. T., Charron, F. Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord. J. Vis. Exp. (39), e1773, doi:10.3791/1773 (2010).