Décrypter Pathways axonale des groupes génétiquement définis de neurones dans le tube neural Chick Utilisant In ovo L'électroporation
Summary
Cette vidéo montre comment visualiser les voies axonales des groupes génétiquement définis des neurones de la moelle épinière embryonnaire de poulet en utilisant<em> In ovo</emÉlectroporation> de gènes rapporteurs sous le contrôle des éléments activateurs spécifiques.
Abstract
Emploi des éléments activateurs pour conduire l'expression de gènes rapporteurs dans les neurones est un paradigme largement utilisé pour le suivi de la projection axonale. Pour le suivi de projection axonale des interneurones spinaux chez les vertébrés, les gènes de germe de rapporteur en ligne ciblée rendement de marquage bilatéralement symétrique. Par conséquent, il est difficile de distinguer entre les ipsi-et contra-latéral axones saillie. Électroporation unilatérale dans le poussin du tube neural fournit un moyen utile de restreindre l'expression d'un gène rapporteur d'un côté du système nerveux central, et à suivre la projection axonale des deux côtés<sup> 1 ,2-5</sup>. Cette vidéo montre d'abord comment manipuler les oeufs avant l'injection. Au stade de HH 18-20, l'ADN est injecté dans le niveau sacré du tube neural, puis des électrodes de tungstène sont placés parallèlement à l'embryon et de courtes impulsions électriques sont administrés avec un générateur d'impulsions. L'œuf est scellé avec du ruban adhésif et replacée dans un incubateur pour le développement ultérieur. Trois jours plus tard (E6) de la moelle épinière est enlevée comme une préparation à livre ouvert de l'embryon, fixe, et traitées pour la coloration de l'anticorps entier de montage. Le cordon teinté épinière est monté sur glissière et visualisés en utilisant la microscopie confocale.
Protocol
Discussion
L'électroporation d'ADN plasmidique dans l'embryon de poulet évolue comme une technique puissante pour l'expression ectopique vivo. La combinaison des exhausteurs spécifiques, et l'électroporation chiches fournit un outil rapide et efficace pour déchiffrer les voies axonales d'un groupe de neurones génétiquement défini 1,3,5. Utilisant le système Cre / LoxP et les systèmes d'amplification Gal4/UAS peut augmenter le niveau et la durée d'expression. L'image qui ém…
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par des subventions à l'AK de la Fondation d'Israël sciences, le ministère israélien de la santé, et la DFG (Fondation allemande de recherche).
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