Summary
Burada sunulan, sürekli olarak yüksek kaliteli dorsal kök ganglion kriyostat kesitleri elde etmek için yapılan geliştirmedir.
Abstract
Yüksek kaliteli fare dorsal kök ganglionu (DRG) kriyostat kesitleri, enflamatuar ve nöropatik ağrı, kaşıntı ve diğer periferik nörolojik durumların araştırılmasında uygun immünokimya boyama ve RNAscope çalışmaları için çok önemlidir. Bununla birlikte, DRG dokusunun küçük numune boyutu nedeniyle cam slaytlar üzerinde tutarlı bir şekilde yüksek kaliteli, sağlam ve düz kriyostat bölümleri elde etmek bir zorluk olmaya devam etmektedir. Şimdiye kadar, DRG kriyoseksiyonu için en uygun protokolü açıklayan bir makale bulunmamaktadır. Bu protokol, DRG kriyoseksiyonu ile ilgili sık karşılaşılan zorlukları çözmek için adım adım bir yöntem sunar. Sunulan makale, DRG doku örneklerinden çevreleyen sıvının nasıl çıkarılacağını, DRG bölümlerinin aynı yöne bakacak şekilde slayt üzerine nasıl yerleştirileceğini ve cam slayt üzerindeki bölümlerin yukarı kıvrılmadan nasıl düzleştirileceğini açıklamaktadır. Bu protokol DRG örneklerinin kriyoseksiyonu için geliştirilmiş olmasına rağmen, küçük bir örnek boyutuna sahip diğer birçok dokunun kriyokesiti için uygulanabilir.
Introduction
Dorsal kök ganglionu (DRG), birincil duyusal nöronları, doku makrofajlarını ve birincil duyusal nöronları çevreleyen uydu hücreleriniiçerir 1,2,3,4. Zararsız ve zararlı sinyallerin işlenmesinde önemli bir anatomik yapıdır ve ağrı, kaşıntı ve çeşitli periferik sinir bozukluklarında kritik rol oynar 5,6,7,8,9,10,11,12,13. Fare omuriliğinden DRG dokusunu incelemek için çeşitli yöntemler geliştirilmiş olsa da14,15,16, DRG dokusu oldukça küçük olduğundan ve DRG örneklerinin kriyostat bölümleri rulolar halinde kıvrılma eğiliminde olduğundan DRG dokusunun kriyoseksiyonu zor olmaya devam etmektedir, bu da kriyostat bölümlerinin cam slaytlara düzgün bir şekilde aktarılmasını zorlaştırır. Bununla birlikte, DRG dokusunun uygun kriyoseksiyonu, immünohistokimya çalışmaları ve DRG duyusal nöronlarının yapısı için çok önemlidir 17,18,19,20,21,22,23. Ayrıca, tek hücreli RNA dizileme sonuçları, hem insanlarda24 hem de farelerde25 DRG duyusal nöronlarının dikkate değer heterojenliğini ortaya çıkardığından, DRG dokusunun uygun şekilde kriyoseksiyonu, çeşitli fizyolojik ve patolojik durumlarda farklı DRG hücrelerinin fonksiyonel rolünü araştırmak için kritik öneme sahiptir.
DRG'nin kriyoseksiyonunun alternatif bir tekniği olarak DRG26'nın 3D rekonstrüksiyonunu araştırmak için doku temizleme tekniği uygulanmış olsa da, doku temizleme tekniği zaman ve emek alıcıdır. Buna karşılık, DRG'nin kriyoseksiyonu hızlı ve nispeten kolaydır ve bu nedenle DRG'nin ve merkezi sinir sisteminin diğer bölgelerinin immünohistokimyası ve yapı çalışmaları için anahtar bir teknik olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte, cam slaytlar üzerine yüksek kaliteli, sağlam ve düz kriyostat kesitleri elde etmek, DRG ve belirli beyin bölgeleri gibi dokuların küçük örneklem boyutu nedeniyle sinirbilim araştırmalarında bir zorluk olmaya devam etmektedir ve bu noktada fare DRG'leri gibi küçük boyutlu doku örneklerinin kriyoseksiyonu için en uygun protokolü açıklayan bir makale yoktur.
Bu protokol, sonraki DRG çalışmaları için slaytlar üzerinde güvenilir bir şekilde çok sayıda yüksek kaliteli DRG kesiti elde etmek için fare DRG'sinin kriyostat kesiti için kolay, adım adım bir teknik sağlar. DRG numunelerinin kriyoseksiyonu için özel olarak tasarlanmış olsa da, bu teknik, küçük numune boyutuna sahip diğer çeşitli dokuların kriyoseksiyonu için potansiyel olarak kullanılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bu çalışma için, hayvan deneyleri UCSF Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı ve NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak yürütüldü. Burada yetişkin, 8-12 haftalık C57BL / 6 erkek ve dişi fareler (evde yetiştirilmiş) kullanıldı.
1. DRG numune hazırlama
- Fareleri% 2.5 Avertin ile uyuşturun (Malzeme Tablosuna bakınız). Ağrılı stimülasyona yanıt verilmemesi nedeniyle yeterli anestezi sağlayın. Hayvanları transkardiyal olarak 1x fosfat tamponlu salin (PBS) ve ardından daha önce tarif edildiği gibi %4 formaldehit ile perfüze edin14,15,16.
- Daha önce tarif edildiği gibi omurilikten DRG dokusunu inceleyin14,15,16.
- Diseke edilen DRG'leri oda sıcaklığında 3 saat boyunca% 4 formaldehit içinde sabitleyin.
- DRG'leri gece boyunca 4 ° C'de PBS'de% 30 sükroz içine koyun.
- Temel optimum kesme sıcaklığının (OCT) hazırlanması
- Alüminyum bloğun üst yüzeyini kaplamak için OCT bileşiğini ekleyin ( Malzeme Tablosuna bakın) ve -20 °C'de 5-10 dakika dondurun (Şekil 1A).
- Kriyostatı kullanarak OCT'nin üst kısmını (Malzeme Tablosuna bakınız) 30 μm kalınlıkta, yüzeyi taban OCT kadar düz olana kadar kesin (Şekil 1B).
- Alüminyum bloğu kriyostattan çıkarmadan önce, yönünü işaretlemek için taban OCT'nin altında (saat altı konumunda) bir işaret yapın (Şekil 1C).
- Aşağıdaki adımlarda, aynı yönü korumak için işareti saat altı konumunda tutun, bu da DRG örneğinin daha fazla bölümünün elde edilmesini sağlayabilir.
NOT: Oryantasyon kaybolursa ve DRG numunesi farklı bir açıyla kesilirse, DRG numunesi yukarıdan aşağıya tamamen kesilemez, bu da bazı numunelerin baz OCT'de kalmasına ve boşa gitmesine neden olur, çünkü DRG numunesi kesilmeye çalışılırken baz OCT ile karşılaşılır (Şekil 1C).
- DRG'lerin OCT yerleştirmesini gerçekleştirme
- DRG dokusunu OCT'ye koymadan önce kurutun.
- DRG'yi bloğa eklemeden önce, numunenin etrafındaki %30 sakaroz/PBS solüsyonunu çıkardığınızdan emin olun.
- DRG örneğini kuru bir Petri kabına yerleştirerek (Şekil 2A) ve kuru cımbızla iki veya üç kez bir yerden diğerine taşıyarak kurutun (Şekil 2B).
- Başka bir DRG örneğini taşımadan önce cımbızı tüy bırakmayan bir bezle kurulayın (Şekil 2C).
- Kuru DRG'yi OCT tabanına koyun.
- Kuru cımbızla, kuru DRG'yi saat 12 konumunda taban OCT'sine yerleştirin (Şekil 1D).
- DRG'nin üst kenarı ile OKT tabanının üst kenarı arasında en az 5 mm mesafe bırakın.
- DRG'nin dorsal kısmını saat 12 konumuna ve ventral kısmını saat altı konumuna getirin (Şekil 1D).
- DRG dokusunu OCT ile gömün.
- DRG ortada olacak şekilde tüm DRG örneğini yuvarlak veya oval bir şekilde kaplamak için daha fazla OCT ekleyin (Şekil 1E).
- OCT'nin üst kenarının, taban OCT'nin üst kenarındaki DRG'yi kapladığından emin olun (Şekil 1F), çünkü bu, bölümün cam slayt üzerine aktarılmasını kolaylaştırır (Şekil 3A).
NOT: Kapak OCT'si taban OCT'nin ortasındaysa, taban OCT'sinin üst kenarı, bölümü toplamak için cam sürgüyü bloke edecektir (Şekil 3B). - Kapak OCT ve DRG örneğini -20 °C'de 5 dakika daha dondurun (Şekil 1G). OCT'yi DRG örneğinin etrafında kesmeyin.
- DRG görünene kadar kapağın üst kısmını 30 μm kalınlığında kesin.
- DRG dokusunu OCT'ye koymadan önce kurutun.
2. DRG'nin kriyoseksiyonu
- DRG bölümlerini slayt üzerinde kesmek için kriyostat kesit kalınlığını 12 μm olarak değiştirin (Şekil 1H).
- OCT bölümünü -20 °C'ye soğutulmuş küçük bir boya fırçası ile altta tutun.
NOT: Tüm kesitin tamamen kesilmemesi, 1-3 mm'nin kesilmeden bırakılması önemlidir (Şekil 1I). - Platform yüzeyine yapışması için bölümün altına (saat altı konumu) hafifçe dokunmak için oda sıcaklığındaki bir cımbızın ucunu kullanın (Şekil 1J). Bu, bölümün rulo halinde geriye doğru kıvrılmasını önler ve bu da bölümün slaytta toplanmasını zorlaştırır.
NOT: Bölümün alt kısmı platform yüzeyine yapıştığında ve bölümün üst kısmı hala OCT kapağına bağlandığında, bölüm düz bir şekildedir (Şekil 1K), bu da bölümün slayt üzerinde toplanmasını çok daha kolay hale getirir. - Şarjlı bir cam slayt alın (Malzeme Tablosuna bakın) ve slaytı yavaşça bölümün üzerine yerleştirin. Bölüm slayta yapışmaya başlar başlamaz, slaytı yavaşça geriye doğru çekin (Şekil 1L).
- Bölümleri üst üste bindirmeden slayta daha fazla DRG bölümü almak için aynı işlemi uygulayın (Şekil 1M). Yeni bir DRG kesitinin başka bir DRG bölümünün OCT'sinin üzerine yerleştirilmediğinden emin olun (Şekil 4), çünkü böyle bir kesit slayt üzerinde iyi duramaz ve immünokimya boyama işlemi sırasında yıkanabilir.
3. Cam slayt üzerindeki DRG bölümünün Nissl boyaması
- Bölümleri PBS artı% 0.1 Triton X-10'da 10 dakika yıkayın. Ardından, bölümleri PBS ile iki kez yıkayın.
- Slayta 1:300 Nissl boyası uygulayın ( Malzeme Tablosuna bakın) ve oda sıcaklığında 20 dakika inkübe edin.
- Bölümü PBS artı% 0.1 Triton X-100 ile yıkayın. Ardından, bölümleri PBS ile iki kez 5 dakika ve ardından oda sıcaklığında 2 saat yıkayın.
- Bölümleri bir lamel ile kaplamak için 4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) floromount-G ( Malzeme Tablosuna bakınız) uygulayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Mevcut çalışma, bir fare L4 DRG'den yaklaşık 16 sürekli, yüksek kaliteli DRG bölümü topladı. Elde edilen kesitlerde herhangi bir bozulma yoktu. Şekil 1 , kriyoseksiyon için adım adım prosedürü göstermektedir. Doku kesitlerinden fazla sıvının uzaklaştırılması Şekil 2'de gösterilmiştir. Dokuların OCT gömülmesi süreci Şekil 3'te vurgulanmıştır. Şekil 4 , DRG bölümlerinin cam kızaklar üzerine uygun şekilde yerleştirilmesini göstermektedir. Şekil 5 , fare DRG bölümlerinin fizyolojik yapısının konfokal floresan mikroskobu görüntüsünü göstermektedir. Nissl boyama, çeşitli büyüklükteki DRG duyusal nöronlarını gösterir ve DAPI boyama, nöronları çevreleyen hücreleri gösterir. Bu görüntü, bu protokolle elde edilen DRG bölümlerinin kalitesini göstermektedir. DRG'nin immünohistokimya çalışmaları için, DRG'deki farklı nöron tiplerinin incelenmesi de dahil olmak üzere farklı antikorlar uygulanabilir.
Şekil 1: Fare DRG'lerinin kriyoseksiyonu için adım adım prosedür. (A) OCT, alüminyum bloğun üst yüzeyinde dondurulur. (B) OCT'nin üst kısmı düz bir şekilde kesilir. (C) OCT tabanının alt kısmında (saat altı konumunda) bir işaret yapılır. (D) DRG, ventral kısım işarete bakacak şekilde OCT tabanına yerleştirilir. (E) DRG örneğinin tamamını kapsayacak şekilde daha fazla OCT eklenir. (F) DRG'yi kaplayan OCT'nin üst kenarı, taban OCT'nin üst kenarında olmalıdır. (G) Kapak OCT ve DRG numunesi dondurulur. (H) Kapağın üst kısmı, DRG dokusu görünene kadar kesilir (kırmızı okla işaretlenmiştir). (I) OCT bölümü, önceden soğutulmuş bir boya fırçası ile altta tutulur. (J) Bölümün alt kısmı, oda sıcaklığındaki cımbızın ucu kullanılarak platform yüzeyine yapıştırılır. (K) (J)'nin başka bir görünümü, bölümün alt kısmının platform yüzeyine yapıştığını ve üst kısmının hala kapak ile birleştiğini göstermektedir. (M) Üst üste binen bölümler olmadan slayta daha fazla DRG bölümü elde etmek için aynı işlem tekrarlanır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: DRG dokusundan fazla sıvıyı çıkarma tekniği. (A) DRG dokusu, çok fazla çevreleyen sıvıya sahip olan% 30'luk bir sükroz çözeltisinden doğrudan kuru bir Petri plakasına yerleştirilir. (B) DRG dokusu, çevredeki fazla sıvıyı çıkarmak için kuru cımbız kullanılarak Petri plakası üzerinde komşu bir yere taşınır. (C) Cımbız, DRG dokusunu her hareket ettirdikten sonra tüy bırakmayan bir mendille kurutulur. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Kapak OCT'sinin tabana düzgün bir şekilde yerleştirilmesinin önemi OCT. (A) Kapağın ideal yeri OCT: (A-1) DRG dokusunu kaplayan OCT'nin üst kenarı, taban OCT'nin üst kenarında olmalıdır. (A-2) Kesit tamamen kesilmemeli, küçük bir parça kapağın üst kenarına bağlanmalıdır OCT. (A-3) Kesit cam lam üzerine düzgün bir şekilde aktarılır. (Cevap-4) Çizim, üst kenardaki kesit açısından, kesitin cam kızak üzerine aktarılmasının kolay olduğunu göstermektedir. Siyah eğri çizgi, kesilen bölümü gösterir. (B) Kapağın yanlış yerleştirilmesi OCT. (B-1) DRG dokusunu kaplayan OCT, taban OCT'nin ortasına yerleştirilir. (B-2) Kesit tamamen kesilmemiş, küçük bir parça kapağın üst kenarına bağlanmıştır. (B-3) Alüminyum bloğun üst kenarı, cam sürgünün bölüme temas etmesini önler. Kırmızı oklar, cam sürgü ile kesilen bölüm arasındaki mesafeyi gösterir. (B-4) Çizim, bölüme dokunmadan önce cam sürgünün engellendiğini göstermektedir. Siyah eğri çizgi, kesilen bölümü gösterir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4: DRG bölümlerinin cam kızak üzerine doğru yerleştirilmesi. (A) DRG bölümlerini, DRG bölümü ile diğer DRG bölümlerinin OCT'si üst üste binmeden yan yana yerleştirmek için doğru yöntem. (B) DRG bölümlerini başka bir DRG bölümünün OCT'sine yerleştirmek için yanlış yöntem. İkinci DRG bölümü doğrudan cam kızağa yapışmadığından, sonraki işlemler sırasında kolayca yıkanabilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 5: Fare L4 DRG'nin Nissl boyaması. Bir fare L4 DRG bölümünün 20x konfokal görüntüsüne bir örnek. Yeşil, Nissl'i (nöron) ve kırmızı, DAPI'yi (çekirdek) gösterir. Ölçek çubuğu 50 mm'yi temsil eder. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu protokol, slaytlar üzerinde güvenilir bir şekilde yüksek kaliteli DRG kesitleri elde etmek için fare DRG'sinin kriyostat kesitleri için adım adım kolay bir prosedür sağlar. Bu protokolde dört kritik adım vardır. İlk olarak, DRG numunesini OCT tabanına koymadan önce DRG numunesi ve cımbız kuru olmalıdır. DRG örneğini çevreleyen herhangi bir sıvı, etrafında bir buz kabuğu oluşturacak ve DRG bölümlerinin OCT'den ayrılmasına ve yukarı doğru kıvrılmasına neden olacaktır. İkincisi, alüminyum bloğun bir işareti yoksa veya taban OCT işareti kapsıyorsa, taban OCT'nin alt kısmında (saat altı konumunda) bir işaret yapmak ve bu işareti işlem boyunca saat altı konumunda tutmak önemlidir. Sabit bir oryantasyon tutmak, daha fazla DRG bölümü elde etmeye yardımcı olur, aksi takdirde DRG yukarıdan aşağıya tamamen kesilemez ve bazı DRG örnekleri dışarıda bırakılır ve boşa harcanır. Üçüncüsü, hem taban OCT'sinin hem de kapak OCT'sinin üst kenarları alüminyum bloğun üst kenarında olmalıdır. Bu sayede alüminyum bloğun üst kenarı cam sürgünün DRG bölümlerini almasını engellemeyecektir. Dördüncüsü, DRG bölümünü komşu DRG bölümlerinin OCT'sine koymaktan kaçınmak önemlidir, çünkü ikinci DRG bölümü doğrudan cam kızağa yapışmaz ve bu nedenle sonraki işlemde kolayca yıkanabilir.
DRG kriyoseksiyonu, ağrı ve kaşıntı mekanizmalarında DRG'lerin araştırılmasında çok önemli bir teknolojidir 1,2. Bununla birlikte, fare DRG'lerinin çok küçük hacmi nedeniyle, fare DRG örneklerinin uygun kriyostat bölümlerini toplamak genellikle zordur. Önemli bir sorun, DRG içeren OCT bölümlerinin bir rulo halinde kıvrılma eğiliminde olması ve bu da bölümlerin cam slaytlara yerleştirilmesini zorlaştırmasıdır. Diğer bir sorun ise, fare DRG numunesi çok ince olduğu için, kriyoseksiyon ayarları optimize edilmemişse, bir DRG numunesinden yeterli DRG kesiti elde etmenin zor olmasıdır. Burada, fare DRG kriyoseksiyonu için adım adım bir protokol sunarak yüksek kaliteli DRG kesitlerinin toplanmasını kolay ve pratik hale getirdik. Bu protokolle, bir fare L4 DRG'den yaklaşık 16 sürekli, yüksek kaliteli DRG bölümü toplayabiliyoruz.
Bu protokolün bir sınırlaması, doku temizleme tekniği olarak doğrudan 3D rekonstrüksiyon sağlayamamasıdır26. Yine de bu yöntemle sürekli, kaliteli kesitler elde edebildiğimiz gibi, bu sürekli kesitlerden görüntü alarak 3 boyutlu görüntüleri yeniden oluşturabiliriz.
DRG'lerin kriyoseksiyonu için protokol 8-12 haftalık genç yetişkin farelerden geliştirilmiş olsa da, bu protokol insan DRG'lerinin ve DRG'lerin daha genç veya daha büyük yaştaki farelerden kriyoseksiyonu için uygulanabilir. Aslında, bu protokol herhangi bir hacim numunesinin kriyoseksiyonu için uygulanabilmelidir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Acknowledgments
Hiç kimse.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Avertin | Sigma-Aldrich | T48402-25G | Anesthetize animal |
| Epredia Cryotome Cryostat Cryocassettes, 25 mm dia. Crosshatched | Fisherbrand | 1910 | Hold the OCT section at the bottom |
| Ergo Tweezers | Fisherbrand | S95310 | Using the end of a tweezer to gently touch the bottom (6 o’clock) of the section so that it sticks to the platform surface to prevent the section from curving back in a roll |
| Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides | Fisherbrand | 1255015 | To collect the DRG section |
| Marking pens | Fisherbrand | 133794 | Mark the orientation of base OCT |
| Scigen Tissue-Plus O.C.T. Compound | Fisherbrand | 23730571 | Embedding medium for frozen tissue specimens to ensure optimal cutting temperature (O.C.T.). |
References
- Guan, Z., et al. Injured sensory neuron-derived CSF1 induces microglial proliferation and DAP12-dependent pain. Nature Neuroscience. 19 (1), 94-101 (2016).
- Yu, X., et al. Dorsal root ganglion macrophages contribute to both the initiation and persistence of neuropathic pain. Nature Communications. 11 (1), 264 (2020).
- Costa, F. A. L., Moreira Neto, F. L. Satellite glial cells in sensory ganglia: its role in pain. Brazilian Journal of Anesthesiology. 65 (1), 73-81 (2015).
- Noguri, T., Hatakeyama, D., Kitahashi, T., Oka, K., Ito, E. Profile of dorsal root ganglion neurons: study of oxytocin expression. Molecular Brain. 15 (1), 44 (2022).
- Su, P. P., Zhang, L., He, L., Zhao, N., Guan, Z. The role of neuro-immune interactions in chronic pain: implications for clinical practice. Journal of Pain Research. 15, 2223-2248 (2022).
- Esposito, M. F., Malayil, R., Hanes, M., Deer, T. Unique characteristics of the dorsal root ganglion as a target for neuromodulation. Pain Medicine. 20, S23-S30 (2019).
- Chen, X. J., Sun, Y. G.
- Guan, Z., Hellman, J., Schumacher, M. Contemporary views on inflammatory pain mechanisms: TRPing over innate and microglial pathways. F1000Research. , (2016).
- Boadas-Vaello, P., et al. Neuroplasticity of ascending and descending pathways after somatosensory system injury: reviewing knowledge to identify neuropathic pain therapeutic targets. Spinal Cord. 54 (5), 330-340 (2016).
- Guha, D., Shamji, M. F. The dorsal root ganglion in the pathogenesis of chronic neuropathic pain. Neurosurgery. 63, 118-126 (2016).
- Shorrock, H. K., et al. UBA1/GARS-dependent pathways drive sensory-motor connectivity defects in spinal muscular atrophy. Brain. 141 (10), 2878-2894 (2018).
- Sleigh, J. N., et al. Trk receptor signaling and sensory neuron fate are perturbed in human neuropathy caused by Gars mutations. Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (16), E3324-E3333 (2017).
- Rubio, M. A., Herrando-Grabulosa, M., Gaja-Capdevila, N., Vilches, J. J., Navarro, X. Characterization of somatosensory neuron involvement in the SOD1(G93A) mouse model. Scientific Reports. 12 (1), 7600 (2022).
- Sleigh, J. N., West, S. J., Schiavo, G. A video protocol for rapid dissection of mouse dorsal root ganglia from defined spinal levels. BMC Research Notes. 13 (1), 302 (2020).
- Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. A simple, step-by-step dissection protocol for the rapid isolation of mouse dorsal root ganglia. BMC Research Notes. 9, 82 (2016).
- Perner, C., Sokol, C. L. Protocol for dissection and culture of murine dorsal root ganglia neurons to study neuropeptide release. STAR Protocols. 2 (1), 100333 (2021).
- Haberberger, R. V., Barry, C., Matusica, D. Immortalized dorsal root ganglion neuron cell lines. Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, 184 (2020).
- Pokhilko, A., Nash, A., Cader, M. Z. Common transcriptional signatures of neuropathic pain. Pain. 161 (7), 1542-1554 (2020).
- Martin, S. L., Reid, A. J., Verkhratsky, A., Magnaghi, V., Faroni, A. Gene expression changes in dorsal root ganglia following peripheral nerve injury: roles in inflammation, cell death and nociception. Neural Regeneration Research. 14 (6), 939-947 (2019).
- Miller, R. J., Jung, H., Bhangoo, S. K., White, F. A. Cytokine and chemokine regulation of sensory neuron function. Handbook of Experimental Pharmacology. (194), 417-449 (2009).
- Neto, E., et al. Axonal outgrowth, neuropeptides expression and receptors tyrosine kinase phosphorylation in 3D organotypic cultures of adult dorsal root ganglia. PLoS One. 12 (7), e0181612 (2017).
- Nascimento, A. I., Mar, F. M., Sousa, M. M. The intriguing nature of dorsal root ganglion neurons: Linking structure with polarity and function. Progress in Neurobiolology. 168, 86-103 (2018).
- Middleton, S. J., Perez-Sanchez, J., Dawes, J. M. The structure of sensory afferent compartments in health and disease. Journal of Anatomy. 241 (5), 1186-1210 (2022).
- Nguyen, M. Q., von Buchholtz, L. J., Reker, A. N., Ryba, N. J., Davidson, S. Single-nucleus transcriptomic analysis of human dorsal root ganglion neurons. eLife. 10, e71752 (2021).
- Usoskin, D., et al. Unbiased classification of sensory neuron types by large-scale single-cell RNA sequencing. Nature Neuroscience. 18 (1), 145-153 (2015).
- Hunt, M. A., et al. DRGquant: A new modular AI-based pipeline for 3D analysis of the DRG. Journal of Neuroscience Methods. 371, 109497 (2022).
