Ensayo de escalada por mosca: un método para probar la locomoción general en Drosophila melanogaster

Overview

Este video describe un método simple para cuantificar la locomoción de mosca y muestra el ensayo de escalada realizado.  El ensayo de escalada por mosca es una prueba general de la función motora que se basa en una respuesta de geotaxis negativa.

Protocol

Este protocolo es un extracto de Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Ensayo de escalada (Adaptado de Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Valide el ensayo de escalada. En este estudio, pruebe el ensayo de escalada basado en la metodología descrita previamente por Ali et al., utilizando Elav^C155>UAS-Tau^R406W (exhibiendo tasas de paso de escalada más bajas) y Elav^C155>UAS-GFP (control) y Elav^C155>UAS-mCherry (control) moscas.
2. Voltee las moscas en una cámara de prueba, una línea a la vez (no utilice anestesia de CO₂₎ y déjelas recuperar durante 5 minutos. Si las pruebas se realizan en días diferentes, realice el ensayo a la misma hora del día. En este estudio, todos los ensayos de escalada se realizaron por la tarde para controlar los efectos circadianos en la locomoción.
   NOTA Evite exponer las moscas a la luz solar directa al hacer las pruebas; esto interferirá con su capacidad para escalar.
3. Toque por la fuerza la cámara (marcada hacia abajo) en una almohadilla del ratón colocada en una superficie sólida 3 veces para que todas las moscas comiencen el ensayo en la parte inferior. Observe la locomoción volante durante un período de 10 s.
4. Registre el número de moscas que alcanzan o pasan la línea de 5 cm dentro de este tiempo, así como el número total de moscas probadas. Repita el protocolo, esperando 1 minuto entre cada ensayo, para un mínimo de 3 réplicas de prueba por línea.
   NOTA En el presente estudio, cada vial contenía entre 2 y 19 moscas para el cribado inicial (moscas macho) y entre 6 y 21 moscas para el análisis de deficiencia mutante de líneas femeninas cruzadas.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package