Ensaio de escalada de moscas: um método para testar a locomoção geral em Drosophila melanogaster

Overview

Este vídeo descreve um método simples para quantificar a locomoção de moscas e mostra o ensaio de escalada realizado.  O ensaio de escalada de moscas é um teste geral da função motora que se baseia em uma resposta geotaxis negativa.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotetive Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Ensaio de Escalada (Adaptado de Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Valide o ensaio de escalada. Neste estudo, teste o ensaio de escalada baseado na metodologia previamente descrita por Ali et al., utilizando Elav^C155>UAS-Tau^R406W (exibindo menores taxas de passagem de escalada) e Elav^C155>UAS-GFP (controle) e Elav^C155>UAS-mCherry (controle).
2. Vire as moscas em uma câmara de teste, uma linha de cada vez (não use anestesia de CO₂₎ e permita que elas se recuperem por 5 minutos. Se o teste for feito em dias diferentes, realize o ensaio na mesma hora do dia. Neste estudo, todos os ensaios de escalada foram realizados à tarde para controlar os efeitos circadianos sobre a locomoção.
   NOTA Evite expor as moscas à luz solar direta ao testar; isso vai interferir com sua capacidade de subir.
3. Toque à força na câmara (lado marcado para baixo) em um mouse pad colocado em uma superfície sólida 3 vezes para que todas as moscas comecem o ensaio na parte inferior. Observe a locomoção de moscas durante um período de 10 s.
4. Regissei o número de moscas que atingem ou passam da linha de 5 cm dentro deste tempo, bem como o número total de moscas testadas. Repita o protocolo, esperando 1 min entre cada ensaio, para um mínimo de 3 réplicas de ensaio por linha.
   NOTA No presente estudo, cada frasco continha entre 2 e 19 moscas para a triagem inicial (moscas machos) e entre 6 e 21 moscas para a análise de deficiência mutante das linhas femininas cruzadas.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package