비행 등반 분석 : 드로소필라 멜라노가스터에서 일반 운동을 테스트하는 방법

Overview

이 비디오는 플라이 운동을 정량화하는 간단한 방법을 설명하고 수행 된 등반 분석법을 보여줍니다.  플라이 클라이밍 분석법은 부정적인 지질학적 반응에 의존하는 모터 기능의 일반적인 테스트입니다.

Protocol

이 프로토콜은 게베돈 외에서발췌 ., 드로소필라 멜라노가스터에서새로운 신경 보호 유전자를 식별 하는 Vivo 앞으로 유전 화면에서,J. Vis. Exp. (2019). 

1. 클라이밍 분석 (알리 외에서적응 ., J. Vis. Exp. (2011))

1. 등반 분석기의 유효성을 검사합니다. 이 연구에서는, Ali 등.에 의해 이전에 설명된 방법론에 기초하여 등반 분석법을 테스트, Elav^C155>UAS-Tau^R406W (낮은 등반 패스 속도를 전시) 및 엘라프^C155>UAS-GFP (제어) 및 엘라프^C155>UAS-mCherry (제어)를 사용하여 비행.
2. 파리를 한 번에 한 줄(CO₂ 마취를 사용하지 않음)으로 파리를 뒤집어 5분 동안 복구할 수 있도록 합니다. 다른 날에 테스트가 수행되면 하루 중 동시에 분석 작업을 수행합니다. 이 연구에서는, 모든 등반 적인 궤적 운동에 circadian 효과 대 한 제어 하기 위해 오후에 수행 되었다.
   참고 사항 테스트 할 때 직사광선에 파리를 노출하지 마십시오; 이것은 등반 능력을 방해할 것입니다.
3. 단단한 표면에 놓인 마우스 패드에 챔버(아래쪽 표시)를 강제로 탭하여 모든 파리가 하단의 분석서를 시작합니다. 10s 의 기간 동안 비행 운동을 관찰.
4. 이 시간 내에 5cm 선에 도달하거나 통과하는 파리 의 수와 테스트 된 총 비행 수를 기록합니다. 각 평가판 사이에 1분 간 대기하는 프로토콜을 반복하여 라인당 최소 3개의 평가판 복제를 합니다.
   참고 사항 본 연구에서는, 각 유리병은 초기 검열을 위한 2그리고 19파리 사이 포함하고 (남성 파리) 사이 6 그리고 21 교차한 여성 선의 돌연변이 결핍 분석을 위한 파리.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package