Berigelse for mænd: Vedligeholdelse af en bestand af mandlige C. elegans

Overview

Nematoder kan let formeres i laboratoriet - dels fordi hermafroditter kan reproducere ved selvbefrugtning.  Genetiske kryds og andre eksperimenter kan dog kræve et stort antal mænd.  Denne video beskriver en metode til at berige for mandlige C. elegans.

Protocol

Denne protokol er et uddrag fra Singaravelu et al, Isolation og In vitro Aktivering af Caenorhabditis elegans Sperm, J. Vis. Exp. (2011).

1. Berigelse af den mandlige befolkning

1. Afhængigt af det eksperimentelle behov kan et stort antal mænd opnås ved at anvende en af følgende strategier:
   1. stor population af vilde type hanner kan opnås ved at krydse 5 vilde type hanner og 1 hermafrodit på en lille græsplæne af OP50 seedet i midten af NGM plade. Omkring 50% af den efterfølgende generation vil være vilde type mænd.
   2. him-5(e1490) eller ham-8(e1489) hermafroditter kaste et stort antal mænd. ham-5 og ham-8 hanner er frugtbare, og der er ingen åbenlys defekt i sædmorfologi og funktion. Så ham-5 eller ham-8 mænd kan bruges i stedet for vilde type mænd til mange eksperimenter.

2. Identifikation og isolering af mænd

1. Undersøg ormenes halemorfologi; den mandlige orm hale er afrundet.
2. Pick L4 fase mænd og overføre dem til en NGM plade seedet med E. coli OP50 og lad dem vokse for en dag eller to. Voksende cølibat mænd i mangel af hermafroditter forhindre tab af sædceller og dermed et stort antal spermatids ville være til rådighed under eksperimentel procedure.