Arricchimento per i maschi: mantenimento di uno stock di C. elegans maschili

Overview

I nematodi possono essere propagati facilmente in laboratorio, in parte perché gli ermafroditi possono riprodursi per autofertilizzazione.  Tuttavia, le croci genetiche e altri esperimenti possono richiedere un gran numero di maschi.  Questo video descrive un metodo per arricchire per i C. elegans maschili.

Protocol

Questo protocollo è un estratto da Singaravelu et al, Isolamento e attivazione in vitro di Caenorhabditis elegans Sperm, J. Vis. Exp. (2011).

1. Arricchimento della popolazione maschile

1. A seconda delle esigenze sperimentali, è possibile ottenere un gran numero di maschi utilizzando una delle seguenti strategie:
   1. una grande popolazione di maschi di tipo selvatico può essere ottenuta incrociando 5 maschi di tipo selvatico e 1 ermafrodita su un piccolo prato di OP50 seminato al centro della piastra NGM. Circa il 50% della generazione successiva saranno maschi di tipo selvatico.
   2. him-5(e1490) o him-8(e1489) ermafroditi lanciano un gran numero di maschi. i maschi him-5 e him-8 sono fertili e non vi è alcun difetto evidente nella morfologia e nella funzione dello sperma. Quindi, i maschi lui-5 o him-8 possono essere usati al posto dei maschi di tipo selvatico per molti esperimenti.

2. Identificazione e isolamento dei maschi

1. Esaminare la morfologia della coda dei vermi; la coda del verme maschio è arrotondata.
2. Scegli i maschi dello stadio L4 e trasferiscili su un piatto NGM seminato con E. coli OP50 e lasciali crescere per un giorno o due. I maschi celibati in crescita in assenza di ermafroditi prevengono la perdita di spermatozoi e quindi un gran numero di spermatidi sarebbe disponibile durante la procedura sperimentale.