Enriquecedor para los machos: Mantener un stock de C. elegans masculino

Overview

Los nematodos se pueden propagar fácilmente en el laboratorio, en parte porque los hermafroditas pueden reproducirse mediante auto fertilización.  Sin embargo, las cruces genéticas y otros experimentos pueden requerir un gran número de machos.  Este video describe un método para enriquecer para C. elegans masculino.

Protocol

Este protocolo es un extracto de Singaravelu et al, Aislamiento y Activación In vitro de Caenorhabditis elegans Sperm, J. Vis. (2011).

1. Enriquecimiento de la población masculina

1. Dependiendo de la necesidad experimental, un gran número de machos se pueden obtener mediante el empleo de una de las siguientes estrategias:
   1. gran población de machos de tipo salvaje se puede obtener cruzando 5 machos de tipo salvaje y 1 hermafrodita en un pequeño césped de semilla OP50 en el centro de la placa NGM. Aproximadamente el 50% de la generación que tendrá éxito serán machos de tipo salvaje.
   2. él-5(e1490) o él-8(e1489)hermafroditas lanzan un gran número de machos. él-5 y él-8 machos son fértiles y no hay defecto obvio en la morfología y la función de los espermatozoides. Por lo tanto, él-5 o él-8 machos se pueden utilizar en lugar de machos de tipo salvaje para muchos experimentos.

2. Identificación y aislamiento de los machos

1. Examinar la morfología de la cola de los gusanos; la cola del gusano macho está redondeada.
2. Elija machos en etapa L4 y transfiéralos a una semilla de placa NGM con E. coli OP50 y déjelos crecer durante uno o dos días. El crecimiento de los machos célibes en ausencia de hermafroditas previene la pérdida de espermatozoides y por lo tanto un gran número de espermatozoides estaría disponible durante el procedimiento experimental.