Erkekler için Zenginleştirme: Erkek C. elegans Stokunun Korunması

Overview

Nematodlar laboratuvarda kolayca yayılabilir-- kısmen hermafroditler kendi kendine döllenerek üreyebildiği için.  Bununla birlikte, genetik haçlar ve diğer deneyler çok sayıda erkek gerektirebilir.  Bu videoda erkek C. eleganlar için zenginleştirme yöntemi açıklanmaktadır.

Protocol

Bu protokol Singaravelu ve ark . (2011).

1. Erkek nüfusunun zenginleştirilmesi

1. Deneysel ihtıyata bağlı olarak, aşağıdaki stratejilerden biri kullanılarak çok sayıda erkek elde edilebilir:
   1. NGM plakasının merkezinde tohumlanmış küçük bir OP50 çimi üzerinde 5 vahşi tip erkek ve 1 hermafrodit geçerek vahşi tip erkeklerin büyük popülasyonu elde edilebilir. Sonraki neslin kabaca% 50'si vahşi tip erkekler olacaktır.
   2. him-5(e1490) veya him-8(e1489) hermafroditler çok sayıda erkek atar. him-5 ve him-8 erkekleri doğurgandır ve sperm morfolojisinde ve fonksiyonunda belirgin bir kusur yoktur. Yani, o-5 veya o-8 erkekler birçok deney için vahşi tip erkekler yerine kullanılabilir.

2. Erkeklerin tanımlanması ve izolasyonu

1. Solucanların kuyruk morfolojisini inceleyin; erkek solucanın kuyruğu yuvarlanır.
2. L4 evre erkekleri seçin ve E. coli OP50 ile tohumlanmış bir NGM plakasına aktarın ve bir veya iki gün boyunca büyümelerine izin verin. Hermafroditlerin yokluğunda büyüyen bekar erkekler sperm kaybını önler ve böylece deneysel prosedür sırasında çok sayıda spermatid bulunur.