העשרה לגברים: שמירה על מלאי של אלגנים זכרים

Overview

ניתן להפיץ נמטודות בקלות במעבדה - בין השאר משום שהרמפרודיטים יכולים להתרבות על ידי הפריה עצמית.  עם זאת, צלבים גנטיים וניסויים אחרים עשויים לדרוש מספר רב של זכרים.  סרטון זה מתאר שיטה להעשרה עבור ג. אלגנס זכר.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Singaravelu ואח ', בידוד והפעלה במבחנה של זרע אלגנס Caenorhabditis , J. Vis. Exp. (2011).

1. העשרת האוכלוסייה הגברית

1. בהתאם לצורך הניסיוני, ניתן להשיג מספר גדול של זכרים על ידי שימוש באחת מהאסטרטגיות הבאות:
   1. אוכלוסייה גדולה של זכרים מסוג פראי ניתן להשיג על ידי חציית 5 זכרים מסוג בר 1 הרמפרודיט על מדשאה קטנה של OP50 זרעים במרכז צלחת NGM. בערך 50% מהדור הבא יהיו זכרים פראיים.
   2. הוא-5(e1490) או אותו-8(e1489) הרמפרודיטים לזרוק מספר גדול של זכרים. הוא-5 והוא-8 זכרים הם פוריים ואין פגם ברור במורפולוגיה של הזרע ובתפקוד. אז, הוא-5 או הוא-8 זכרים יכולים לשמש במקום זכרים מסוג פראי לניסויים רבים.

2. זיהוי ובידוד של גברים

1. לבחון את מורפולוגיה הזנב של תולעים; זנב התולעת הזכר מעוגל.
2. בחרו זכרי שלב L4 והעבירו אותם ללוחית NGM עם E. coli OP50 ותנו להם לגדול במשך יום או יומיים. גידול זכרים מתנזרים בהיעדר הרמפרודיטים למנוע אובדן זרע ולכן מספר גדול של זרעונים יהיה זמין במהלך הליך ניסיוני.