Обогащение для мужчин: Поддержание запаса мужской C. elegans

Overview

Нематоды могут легко размножаться в лаборатории - отчасти потому, что гермафродиты могут размножаться путем самообогащения.  Тем не менее, генетические кресты и другие эксперименты могут потребовать большого количества мужчин.  Это видео описывает метод обогащения для мужчин C. elegans.

Protocol

Этот протокол является выдержкой из Singaravelu и др., изоляция и активация in vitro caenorhabditis elegans спермы, J. Vis. Exp. (2011).

1. Обогащение мужского населения

1. В зависимости от экспериментальной необходимости, большое количество мужчин может быть получено с помощью одной из следующих стратегий:
   1. большую популяцию самцов дикого типа можно получить, пересекая 5 самцов дикого типа и 1 гермафродит на небольшой лужайке OP50, посеянной в центре пластины NGM. Примерно 50% успешного поколения будут дикие мужчины типа.
   2. его-5(e1490) или его-8(e1489) гермафродиты бросают большое количество самцов. его-5 и его-8 мужчин плодородны и нет очевидного дефекта в морфологии спермы и функции. Таким образом, его-5 или его-8 мужчины могут быть использованы вместо диких самцов типа для многих экспериментов.

2. Идентификация и изоляция мужчин

1. Изучите хвостовую морфологию червей; хвост самца червя округлен.
2. Выберите L4 этапе мужчин и передать их на пластину NGM посеяны с кишечной палочкой OP50 и дайте им расти в течение дня или двух. Выращивание безбрачия мужчин в отсутствие гермафродитов предотвратить потерю спермы и, таким образом, большое количество сперматозоидов будут доступны во время экспериментальной процедуры.