Berikande för män: Upprätthålla ett lager av manlig C. elegans

Overview

Nematoder kan lätt förökas i labbet - delvis för att hermafroditer kan reproducera genom självbefruktning.  Genetiska kors och andra experiment kan dock kräva ett stort antal män.  Denna video beskriver en metod för att berika för manliga C. elegans.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Singaravelu et al, Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm, J. Vis. Exp. (2011).

1. Berikning av manlig befolkning

1. Beroende på det experimentella behovet kan ett stort antal män erhållas genom att använda en av följande strategier:
   1. stor population av vilda hanar kan erhållas genom att korsa 5 vilda hanar och 1 hermafrodit på en liten gräsmatta av OP50 sådd i mitten av NGM-plattan. Ungefär 50% av den efterföljande generationen kommer att vara vilda män.
   2. him-5(e1490) eller honom-8(e1489) hermafroditer kastar ett stort antal män. han-5 och honom-8 män är bördiga och det finns ingen uppenbar defekt i spermier morfologi och funktion. Så, han-5 eller honom-8 män kan användas i stället för vilda typ män för många experiment.

2. Identifiering och isolering av män

1. Undersök maskarnas svansmorfologi; den manliga maskens svans är rundad.
2. Välj L4 steg hanar och överför dem till en NGM platta sådd med E. coli OP50 och låt dem växa för en dag eller två. Växande celibat män i avsaknad av hermafroditer förhindrar förlust av spermier och därmed ett stort antal spermatider skulle vara tillgängliga under experimentella förfarandet.